一例紫色色桿菌感染小熊貓的診治報告

修云芳 徐素慧 王隆柏 羅偉銘 何曉聰 周倫江＊ 曾顯成

（1.海峽（福州）大熊貓研究交流中心 福州 350003；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福州 350013；3.福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院（蜂學(xué)學(xué)院） 福州 350002）

紫色色桿菌是一種在熱帶和亞熱帶地區(qū)的水與土壤中存在的革蘭氏陰性桿菌，是一種條件致病菌，最早發(fā)現(xiàn)于巴西亞馬孫河流域的黑河， 動物和人類均可感染， 但感染人類極少 （若感染后死亡率較高）[1-2]。 小熊貓主要生活在喜馬拉雅山的山地針闊混交林和中國西南部海拔2 000～4 000 m 山脈中。近年來隨著人類活動的干擾，生存環(huán)境喪失、棲息地破碎化嚴(yán)重威脅著小熊貓的生存。 圈養(yǎng)條件下小熊貓壽命可達10～13 歲，傳染病是圈養(yǎng)小熊貓種群的最大威脅，防治措施不得當(dāng)可能會導(dǎo)致群體死亡。

2009 年7 月，福州大熊貓研究中心發(fā)現(xiàn)有3 只小熊貓感染了紫色色桿菌無色變種， 出現(xiàn)以呼吸衰竭為特征的主要臨床癥狀， 病死率為100%[3]。2020 年7 月以來該中心陸續(xù)出現(xiàn)6 只小熊貓急性死亡，分析其發(fā)病情況、臨床癥狀和病理變化，并經(jīng)實驗室檢測和藥敏試驗， 初步診斷為小熊貓感染紫色色桿菌。 通過采取緊急防治措施， 疫情獲得有效控制。 現(xiàn)將診治結(jié)果報告如下。

1 發(fā)病情況

福州大熊貓研究中心于1994 年引進小熊貓，存欄數(shù)量達20 只。2019 年因小熊貓館改造搬遷，小熊貓暫時放在臨時過渡園（原蝴蝶園）飼養(yǎng)。 相比于原來的場館，臨時過渡園環(huán)境較差，自2020 年7 月9日起，突然發(fā)現(xiàn)6 只小熊貓發(fā)熱、被毛松亂、精神沉郁、采食量下降，用頭孢哌酮鈉、頭孢拉定、氨芐青霉素治療未見效，1～2 d 后死亡。

2 臨床癥狀

發(fā)病小熊貓主要表現(xiàn)為精神萎頓， 食欲減退或廢絕， 體溫升高 (38.2 ℃)， 呼吸困難； 其中編號1460 號與1152 號有外傷、后肢癱瘓，眼臉腫脹，鼻腔流出紅色液體；932 號與1151 號均出現(xiàn)后肢癱瘓，未發(fā)現(xiàn)外傷；1615 號為妊娠母貓，未發(fā)現(xiàn)外傷；928 號在發(fā)病前右后掌曾感染真菌，皮膚潰瘍，傷口處理愈合時間較長，17 d 后也發(fā)現(xiàn)類似主要癥狀。

3 病理變化

小熊貓氣管積泡沫、心包積液；肝臟有散在粟粒狀白色壞死灶；腹腔內(nèi)有少量澄清、半透明液體，混有少量絮狀纖維蛋白； 胸腔有少量積液， 肺淤血。1115 號小熊貓脾臟出現(xiàn)壞死灶，其余個體脾臟未見異常。

4 實驗室診斷

4.1 細菌分離 取氣管、脾臟、肺臟和心包液，接種于血平板，放置37 ℃培養(yǎng)24 h，發(fā)現(xiàn)接種氣管積液的血平板長出藍黑色、圓形、中等大小、形態(tài)一致的光滑型菌落（見圖1）。 取單個菌落涂玻片進行革蘭氏染色、鏡檢，可見兩端鈍圓、革蘭氏陰性的紫色球桿菌（見圖 2）。

圖1 在血平板上培養(yǎng)的黑色菌落

4.2 PCR 檢測 設(shè)計合成引物[3]，提取細菌的DNA，進行PCR 擴增， 結(jié)果獲得約750 bp 大小的基因片段，與預(yù)期片段大小相符。 片段經(jīng)測序比對分析，與NCBI 發(fā)布的紫色色桿菌的基因序列相符。

圖2 革蘭氏染色鏡檢

4.3 藥敏試驗 將分離的紫色細菌進行藥敏試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該細菌對氧氟沙星、 對氟苯尼考、 萬古霉素、利奈唑胺、阿奇霉素、紅霉素、氧氟沙星、亞氨培南、慶大霉素、環(huán)丙沙星敏感；對替加環(huán)素、利福平、阿莫西林、頭孢噻肟、呋喃妥因、頭孢哌酮鈉、阿米卡星中度敏感；對多西環(huán)素、多粘菌素、磺胺甲惡唑、青霉素、恩若沙星不敏感。

綜上，通過發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化和實驗室診斷，診斷為小熊貓感染了紫色色桿菌。

5 防治措施

5.1 預(yù)防 隔離患獸， 禁止飼養(yǎng)用具交叉使用；嚴(yán)格消毒， 將獸舍內(nèi)一不流動水池硬化處理， 清除積水，進行全面環(huán)境消毒，連續(xù)1 周采用火焰消毒或者含氯消毒劑輪流消毒， 每天1 次； 全面排查環(huán)境安全，對獸舍、鐵網(wǎng)、門窗、棲架、睡床、產(chǎn)箱等可能引起小熊貓受傷的部位進行軟化處理。加強飼養(yǎng)管理，適當(dāng)分群，減少群體數(shù)量；發(fā)現(xiàn)愛打架個體，對其單獨飼養(yǎng)，減少因群體打斗導(dǎo)致外傷；飼養(yǎng)員加強觀察，發(fā)現(xiàn)打斗要及時處理，做到早發(fā)現(xiàn)早治療。

5.2 治療 對患病小熊貓的傷口進行及時徹底消毒，依據(jù)傷口情況化膿瘡用雙氧水處理，新鮮創(chuàng)口用碘伏消毒，生理鹽水沖洗干凈后，涂黃金散、復(fù)方爐甘石散或茶樹油蘆薈膏。根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，選擇有效抗菌藥物治療，參考個體敏感情況，可用保定籠靜脈注射氧氟沙星或氟苯尼考。 因患病小熊貓血清白蛋白低，采取補充人血白蛋白一次（2.5 g），對出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶升高的小熊貓個體，靜脈注射氨基酸50 mL、維生素 C 250 mg、輔酶 A 30 UI，ATP 10 mg。

該中心通過采取以上綜合防控措施， 疫情最終得到有效控制。

6 分析與討論

紫色色桿菌， 是熱帶與亞熱帶地區(qū)環(huán)境中存在的條件致病菌，為革蘭氏陰性、兼性厭氧及無芽孢的球桿菌。 動物或人類的免疫力低下或免疫缺陷是感染該菌的誘因[4]。 Soares R L 等報道紫色色桿菌感染4 日齡小母牛主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎引起臥地不起、前葡萄膜炎引起失明、全身多臟器膿腫及敗血癥。小牛因母牛棄養(yǎng)， 未食初乳導(dǎo)致免疫力低下是發(fā)病誘因[5]。

紫色色桿菌感染小熊貓報道最早見于1998 年美國北達科他州動物園，解剖可見肩胛骨肌肉、淋巴結(jié)、肺膿腫；病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)肝、肺、淋巴結(jié)及脾壞死[6]。 在國內(nèi)最初報道病例為2009 年福州大熊貓研究中心，3 只小熊貓主要臨床癥狀為呼吸衰竭，病死率100%， 從肺與氣管分泌物分離的細菌經(jīng)鑒定為紫色色桿菌無色變種[3]。 11 年后福州大熊貓研究中心再次發(fā)生小熊貓群體感染紫色色桿菌， 病變以肝臟膿腫為主，從心血、肝臟、肺臟、脾臟都分離到細菌。 2 個菌株引起小熊貓臨床癥狀及解剖病變有所不同，在血平板上的培養(yǎng)特性也不同，此次血平板培養(yǎng)出菌落為中等大小、濕潤的紫黑色球桿菌，未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象， 而在2009 年分離的菌落為變種的白色菌，能導(dǎo)致溶血現(xiàn)象。

2009 年和2020 年福州大熊貓研究中心兩次發(fā)生小熊貓感染紫色色桿菌的病例， 均發(fā)生于較為炎熱的7 月。 該次小熊貓感染紫色色桿菌， 并導(dǎo)致發(fā)病、 死亡。 后經(jīng)調(diào)查， 主要原因可能是該中心從2020 年初對動物園的獸舍進行升級改造，小熊貓臨時住所離改造獸舍不足百米，環(huán)境嗓音、氣味對其造成很大應(yīng)激，群體免疫力都有所下降；另外，發(fā)生了群體打斗導(dǎo)致外傷，發(fā)現(xiàn)處理不及時，且運動場內(nèi)有一處水池，長期蓄存不流動污水，污水中的紫色色桿菌感染傷口，導(dǎo)致該病流行暴發(fā)。

至于該次疫情所分離到的紫色色桿菌的其他生物學(xué)特性，以及與2009 年分離菌株的異同點，有待今后進一步研究。