規(guī)?；i場如何建立實驗室監(jiān)測體系

周松峰，黃全奎，華 俊，秦樹英 ，覃紹敏，吳健敏*

（1.廣西里建桂寧種豬有限公司，廣西 南寧 530105；2.廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所，廣西 南寧530001）

近年來，隨著散養(yǎng)戶的大量退出，特別是受非洲豬瘟的影響[1]，規(guī)模化豬場在我國已占到了絕對的比重[2]，整體提升了養(yǎng)豬行業(yè)的綜合管理水平，但是仍存在很多不足。例如一些規(guī)模場由于生產管理方式、生物安全措施和技術防控手段較為落后，行業(yè)間缺乏溝通，對疾病缺乏有效的監(jiān)控手段等原因[3]，使得疾病頻繁出現(xiàn)且無法有效控制，造成較大的經濟損失。另外，一些規(guī)模場雖然沒有發(fā)生重大動物疫情，但是由于沒有建立實驗室監(jiān)測技術體系，無法判斷豬群中是否存在帶毒豬。帶毒豬持續(xù)不斷地向外界排毒[4]，造成散發(fā)性疫情不斷發(fā)生。

規(guī)?；i場要積極創(chuàng)造條件，開展免疫抗體及病原監(jiān)測，積極做好種豬垂直傳播疫病病原的凈化工作。通過監(jiān)測，有針對性地提升豬場綜合生物安全措施并把它作為今后規(guī)模場工作的重點。完整的、準確的實驗室監(jiān)測體系是疫病防治的科學武器和有效手段，規(guī)模場實驗室監(jiān)測體系的建設勢在必行[5]。本文就如何建立規(guī)?；i場實驗室監(jiān)測體系，進行簡單闡述。

1 監(jiān)測的分類

規(guī)模化豬場監(jiān)測可以分為常規(guī)監(jiān)測和發(fā)生疫病時的快速檢測兩種。

1.1 常規(guī)監(jiān)測

常規(guī)監(jiān)測是指在豬群表現(xiàn)正常的情況下，開展的針對豬群及原料品質的監(jiān)測。主要包括抗體監(jiān)測、病原監(jiān)測和飼料監(jiān)測3個方面。

抗體監(jiān)測：通過血清學診斷技術，檢測豬血清中的特定抗體水平。包括抗體水平的高低、維持的時間、抗體均勻度及群體免疫水平等?？贵w水平監(jiān)測可以評價疫苗的質量，評估豬群的免疫狀況[6]，從而為制定合理的免疫程序(如免疫次數(shù)、免疫時間及免疫劑量等)提供依據(jù)。免疫抗體監(jiān)測常根據(jù)不同的群體進行，一般大致分為公豬、母豬、育肥豬和仔豬4個群體。想要精確地反映豬場的實際情況，還應細分群體，包括后備母豬、1～2 胎次、3～4 胎次、5～6 胎次及高胎次等 5個母豬群體；哺乳仔豬（新生仔豬、斷奶前）；斷奶仔豬；保育豬和育肥豬。公豬可被視為一個單獨群體進行普檢，其他豬群按實際情況進行抽檢。其中母源抗體消長規(guī)律的監(jiān)測最為重要，它對制定合理的免疫程序，及時根據(jù)變化修定免疫程序意義重大[7]。

病原監(jiān)測：通過PCR技術、細菌分離鑒定和藥敏試驗等方法對病毒、細菌、真菌及寄生蟲等病原進行監(jiān)測。一般采集豬血液、鼻咽拭子、肛拭子、糞、尿、分泌物及養(yǎng)殖環(huán)境樣品等進行檢測，監(jiān)測本場病原的感染情況(感染程度、感染時間及感染對象等)，從而采取合理的應對措施，有針對性地選擇疫苗及消毒藥物進行預防，以及使用敏感藥物進行治療，防止耐藥菌株的產生。通過隔離、淘汰帶毒豬等合理的凈化手段，建立某種特定疾病的陰性場，再通過定期監(jiān)測，持續(xù)保持對某種疾病的陰性狀態(tài)，是確保豬場生產安全穩(wěn)定，創(chuàng)造更大效益最為有效的措施。

對疫病的控制應以預防為主，而常規(guī)監(jiān)測是疫病預防的重要手段，通過常規(guī)監(jiān)測和動態(tài)分析，及早發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，可形成豬場生物安全屏障。

飼料監(jiān)測：飼料安全對于豬群的健康尤為重要[8]，它是保證豬群健康的基本前提。飼料常規(guī)監(jiān)測主要分為以下幾個方面：常規(guī)理化指標，如水分、粗蛋白質、總磷、粗灰分、鈣、粗纖維、粗脂肪、氯化鈉、脂肪酸和各種氨基酸等；重金屬，如鎘、鉻、砷和汞等；抗生素，抗生素殘留；違禁藥物，如三聚氰胺、克倫特羅和萊克多巴胺等；霉菌毒素，如赤霉烯酮、嘔吐毒素和黃曲霉毒素；對豬群有害病原的檢測，如藍耳病病原、非洲豬瘟病原等。

1.1.1 常規(guī)監(jiān)測需注意的問題?？茖W合理的常規(guī)監(jiān)測方法必須做到以下幾點（以抗體和病原監(jiān)測為例），數(shù)據(jù)才有意義。首先保證檢測樣品的數(shù)量和質量。育肥豬群（本公司將育肥豬群分為3個階段：小豬階段、中豬階段、大豬階段）的每個生長階段都至少要采集總量的5%，母豬群至少要采集總量的10%，公豬需要全群采集。樣品數(shù)量決定整個豬群檢測結果的準確性，所以樣品越多結果越可靠。規(guī)范采血操作，合理地分離和保存血清。血清應為無色至淡黃色澄明液體，無溶血，檢測時最好是新鮮血清，血清保存時間越久，結果越不準確。采集的病料必須新鮮且具有代表性，最好是未經藥物治療的活病豬的病料。要根據(jù)不同病原的不同特性，合理保存病料，特別是在夏季高溫天氣下，更要防止病料腐敗變質。要保證豬場監(jiān)測的連續(xù)性[9]。開展定期監(jiān)測，必須根據(jù)本場現(xiàn)狀并結合以前和周邊的疫情形勢進行。制定合理的監(jiān)測時間，要確保監(jiān)測時間的連續(xù)性，一般每隔4個月監(jiān)測1次。對于特定監(jiān)測項目，要確保監(jiān)測的階段性和連續(xù)性，如母源抗體的監(jiān)測，哺乳豬、保育豬等的抽樣檢測，后備豬的病原和抗體監(jiān)測等。要具備實驗室及試驗條件。基本實驗室主要包括解剖室、病原檢測室、血清學檢測室、樣品及檔案保存室、洗滌與廢棄物無害化處理室等。所需的必要儀器設備主要有熒光定量PCR檢測儀、超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、酶標儀、普通顯微鏡、微量移液器、電熱水浴鍋、高壓滅菌鍋、冰箱及一些解剖器具、試管和離心管等。試驗藥品、試劑盒及常規(guī)的培養(yǎng)基、藥敏試紙等按試驗需要配備。其中人員條件主要指具有較強的專業(yè)理論知識和生產管理經驗的工作人員，因為對監(jiān)測結果進行合理的分析和判斷是規(guī)?；i場生產監(jiān)測的重要組成部分。同時還需制定嚴格的實驗室管理制度，包括崗位責任制、儀器設備操作使用管理制度、生物安全管理制度、病料采集保存制度、試驗記錄制度及檔案資料管理制度等。

1.2 發(fā)病時的快速檢測

當豬群生產狀況低下或臨床出現(xiàn)病態(tài)時，為了快速查明病因，需要根據(jù)實際情況調整檢測內容，從而判定豬場是否受到特定病原侵襲。

1.2.1 監(jiān)測方法。利用血清學技術(如ELISA試驗、血凝試驗)檢測免疫抗體或某種疾病的野毒抗體(如豬偽狂犬病gE抗體等)。監(jiān)測項目包括豬瘟、藍耳病、豬偽狂犬病、圓環(huán)病毒病、口蹄疫、細小病毒病、豬乙型腦炎和弓形體病等的抗體。運用分子生物學技術，從基因水平監(jiān)測動物病原菌(如PCR方法)，利用特異性引物可以快速擴增某種特定病原的核酸，從而判定所檢病料中是否存在特定病原，隨后通過測序及基因序列的遺傳進化分析[10]，判定該病原是否變異或進化，及時準確地掌握疫病流行動態(tài)，為疫苗的篩選及進一步制定防控措施提供依據(jù)。檢測項目包括豬瘟、豬偽狂犬病、圓環(huán)病毒病、藍耳病和豬細小病毒病等的病原。運用微生物學技術，對細菌性致病菌進行分離鑒定[11]，檢測分離菌株的致病性及對抗生素的耐藥情況等。檢測項目包括副豬嗜血桿菌、鏈球菌、大腸桿菌、寄生蟲、藥物殘留和霉菌毒素等。利用快速診斷試劑 (如膠體金試紙條等)，現(xiàn)場可以快速、準確地檢測抗體、病原和藥物殘留等，非常方便。

2 本公司常規(guī)的監(jiān)測方案

2.1 后備種豬

后備種豬飼養(yǎng)至60 kg后，轉至后備豬馴化隔離舍飼養(yǎng)，對不符合選留條件的及時淘汰出群，對符合條件的采樣監(jiān)測。監(jiān)測項目包括豬瘟抗原及抗體、藍耳病抗原及抗體、豬偽狂犬病抗原及抗體、豬口蹄疫抗體、圓環(huán)病毒病抗原及抗體等。

2.2 生產公豬和母豬

公豬全群監(jiān)測，生產母豬分胎次抽檢，每年2次。監(jiān)測項目：豬瘟抗原及抗體、藍耳病抗原及抗體、豬偽狂犬病抗原及抗體、圓環(huán)病毒病抗原及抗體、口蹄疫抗體、乙腦抗原及抗體、細小病毒病抗原及抗體、弓形體等。

2.3 生長豬群

按周齡定期抽檢，監(jiān)測項目為：豬瘟抗原及抗體、豬偽狂犬病抗原及抗體、圓環(huán)病毒病抗原及抗體、藍耳病抗原及抗體、口蹄疫抗體及弓形體等。

2.4 特殊時期的檢測

豬群中個體或群體出現(xiàn)疫病時，以臨床判定為參考，制定相應的檢測項目，根據(jù)所需檢測項目，采集相應的樣品，詳細記錄采集樣品的來源、采集日期、豬只日齡及臨床癥狀等項目，并合理地保存樣品，盡快送到本公司實驗室檢測。公司具有專門的疫病診斷實驗室，能夠做到現(xiàn)采現(xiàn)檢，省去了諸多中間環(huán)節(jié)，使得檢測更加快速、準確。

目前國家對豬瘟、藍耳病、豬偽狂犬病及口蹄疫等嚴重影響我國養(yǎng)豬業(yè)的病原開展凈化工作。雖然不同的疫病有不同的凈化方案，但是其凈化的大體思路基本相同：篩選評估適合本場的優(yōu)質疫苗，定期、持續(xù)開展病原及抗體監(jiān)測，采取強有力的淘汰措施和合理的飼養(yǎng)管理及全方位的生物安全措施等[12]。

3 討論

3.1 實驗室監(jiān)測數(shù)據(jù)的積累

規(guī)?；i場實驗室監(jiān)測，只是生產綜合管理環(huán)節(jié)中的一環(huán)，豬場的生產監(jiān)測遠不止這些。對豬場的每一個生產環(huán)節(jié)、每一個細節(jié)都需要監(jiān)測，只有這樣才能夠了解整個豬場的真實情況，從而對豬場整體的生產進行合理地指導。另外，監(jiān)測可以是長遠的，也可以是短期的，只有對生產環(huán)節(jié)處處留心，積累試驗數(shù)據(jù)，從大量的數(shù)據(jù)中歸納和總結出影響豬場生產的不利因素，才能做到及時采取應對措施。

3.2 監(jiān)測體系有助于特定病原的凈化

通過豬場實驗室監(jiān)測體系的建立和應用，規(guī)?；i場可以根據(jù)檢測的具體情況，凈化某些特定病原(如豬偽狂犬病、豬瘟、藍耳病等)，并提出控制方案，有效提高豬群的健康水平[13]。

3.3 多種舉措并舉，保證豬場生產穩(wěn)定

豬場的實驗室監(jiān)測體系是保障豬場安全生產的有力武器，但是并非決定性因素，實驗室監(jiān)測體系只是豬場的一個較為合理的參考系統(tǒng)。在運行實驗室監(jiān)測體系的同時，提高豬場的管理水平，采取綜合性措施，才能使豬場真正實現(xiàn)安全、健康生產[14]。