副豬嗜血桿菌研究現(xiàn)狀及綜合防控

□張翠翠易新健徐海軍臧傳佼郎景民

（山東濱州沃華生物工程有限公司，山東省動物病原微生物工程實驗室，山東濱州256600）

副豬嗜血桿菌（HPS）屬于巴斯德菌科嗜血桿菌屬，革蘭氏陰性菌，是豬上呼吸道一種常在菌。 主要造成豬只的肺炎、腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、漿膜炎和敗血癥。 發(fā)病日齡主要集中在保育階段的仔豬， 特別是在豬群感染豬藍耳病或者豬圓環(huán)病毒病等免疫抑制性疾病時， 極易繼發(fā)副豬嗜血桿菌病， 對國內(nèi)外養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。

本文通過對該病的病原學(xué)、流行病學(xué)和綜合防控簡要概述， 以期對養(yǎng)殖場有效防控副豬嗜血桿菌防控提供一定的幫助。

1 病原學(xué)

1.1 理化特性

副豬嗜血桿菌屬于巴斯德菌科嗜血桿菌屬，是一種形態(tài)不一、大小不等（大約1.5 微米×0.4 微米）、無運動、革蘭氏陰性的短小桿菌。 本菌生長需要V 因子（即煙酰胺腺嘌呤二核 苷酸，NAD）， 且培養(yǎng)濃度 隨著NAD 的量而變化， 吳家強等研究結(jié)果表明大部分菌株在NAD 濃度為30 毫克/升時， 菌濃度最佳 （高達1010CFU/毫升）。 本菌在加有NAD和小牛血清的腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基或胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基上生長較好，菌落透明光滑；在巧克力瓊脂培養(yǎng)基中生長不佳，菌落為白色；在血瓊脂平板上生長較差，為針尖狀，如果與葡萄球菌同時培養(yǎng)， 本菌在葡萄球菌邊緣生長較好， 可見明顯的“衛(wèi)星現(xiàn)象”； 在普通培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上不生長。

1.2 毒力基因

副豬嗜血桿菌的血清型較多，不同血清型的菌株毒力差異較大，對其毒力因子知之較少， 對其主要的致病機理研究更少， 目前認(rèn)為可能的毒力相關(guān)因子有莢膜、菌毛、脂多糖、外膜蛋白及酶類等。 Van 等研究表明血清5 型和12 型的主要毒力 基 因 有HPM-1371、HPM-1372、vta3、vta2 和capD；血清2 型主要毒力基因是vta2。

2 流行病學(xué)

2.1 血清型分型

副豬嗜血桿菌有15 個血清型和不能區(qū)分（NT）型，目前主要采用傳統(tǒng)的瓊脂擴散分型方法和新型PCR 分型方法。 傳統(tǒng)的瓊脂擴散分型方法是根據(jù)Kielstein-Rapp-Gabrielson（KRG）瓊脂擴散試驗進行血清學(xué)分型，是最經(jīng)典的分型方法。由于KRG 瓊脂擴散試驗需要各血清型的陽性血清， 而該陽性血清比較難獲得， 阻礙很多研究機構(gòu)和養(yǎng)殖場對其進行研究， 且有20%毒株屬于NT 不可分型。 英國劍橋大學(xué)Howell 博士于2015 年建立一種PCR 方法對各血清型進行分型，其分型結(jié)果與KRG 瓊脂擴散試驗達到90%的重合，且NT 不可分型毒株遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于KRG 瓊脂擴散試驗。 該方法得到蘭州獸醫(yī)研究所劉永生、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)沈長奇、 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)趙琴、中國臺灣lin、越南Van、巴西Pires Espíndola 等認(rèn)可。 但該方法無法區(qū)分血清5 型和12 型，2017 年華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廖明等建立一種新的PCR 分型方法， 能夠?qū)Ω必i嗜血桿菌所有血清型進行分型， 且分型率達到94.30%（281/298），而IHA 分型率只有76.51%（228/298），兩者所測血清型一致性達到80.87%（241/298），包括NT 不可分型毒株。 PCR分型方法的建立有效解決了研究機構(gòu)和養(yǎng)殖場對HPS 的分型， 能夠快速地了解區(qū)域或者場內(nèi)流行血清型，為進一步防控提供理論基礎(chǔ)。

2.2 國內(nèi)主要流行血清型

國內(nèi)不同地區(qū)流行血清型有所差異， 以4 型、5 型、12 型、13 型為主。 廖明等對2007～2015 年從中國南部分離到298 株副豬嗜血桿菌進行分型，結(jié)果表明4 型（25.17%）、5型（23.15%）、12 型（20.47%）、13 型（6.04%）占比最多；趙琴等對2014～2016 年從四川分離的254 個毒株進行分型，結(jié)果表明5 型（25.98%）和4型（23.62%）占比最多；高崧等對蘇皖地區(qū)分離的34 株進行分型，結(jié)果表明以12 型（35.29%）、5 型（11.76%）、4 型（11.76%）為主；lin 等對2013～2017 年分離于臺灣的133 株進行分型， 以5/12 型 （37.6%）、4 型 （27.8%）、13 型（15%）為主。

3 綜合防控

3.1 飼養(yǎng)管理

副豬嗜血桿菌屬于細(xì)菌性疾病，受飼養(yǎng)管理的影響比較大。 飼養(yǎng)管理是疫病防控的基礎(chǔ)， 包括豬場的清潔與消毒、干燥度（欄舍濕度太大， 容易造成細(xì)菌在環(huán)境中的繁殖）、溫度與通風(fēng)的協(xié)調(diào)（在保證溫度合適的情況下，進行通風(fēng)）、發(fā)病豬的隔離等， 這些都能影響豬場副豬嗜血桿菌病的發(fā)生。

3.2 疫苗免疫

疫苗免疫是副豬嗜血桿菌病防控的必要手段， 也是最有效的方法之一。 目前由于食品安全，少抗或者無抗逐步實施， 副豬嗜血桿菌疫苗免疫也越來越廣泛。 副豬嗜血桿菌疫苗主要分為全菌滅活疫苗和基因工程亞單位疫苗。 副豬嗜血桿菌滅活疫苗被廣泛使用在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，并能成功的預(yù)防該疾病。 進口疫苗主要是西班牙海博萊的1 型、6 型二價滅活疫苗和勃林格Z1517 株滅活疫苗。 國內(nèi)主要是沃華生物1 型、5型二價滅活疫苗；科前、普萊柯和中牧4 型、5 型二價滅活疫苗； 科前豬鏈球菌、 副豬嗜血桿菌二聯(lián)滅活疫苗；華宏4 型、5 型、12 型、13 型四價滅活疫苗以及普萊柯豬圓環(huán)病毒、副豬嗜血桿菌病二聯(lián)滅活疫苗；正在臨床中試的有沃華生物豬鏈球菌、 副豬嗜血桿菌病、 豬圓環(huán)病毒（Cap 蛋白）、三聯(lián)滅活疫苗。 由于副豬嗜血桿菌血清型眾多， 各血清型之間缺乏交叉保護能力， 因而基因工程亞單位疫苗一直是研究的熱點，其中外膜蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白及PalA等作為研究的重點。 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)金梅林利用大腸桿菌表達系統(tǒng)（BL21） 對 豬 鏈 球 菌HP0197 和HP1036、副豬嗜血桿菌HPS-06257和PalA 蛋白進行表達，研制出豬鏈球菌、 副豬嗜血桿菌二聯(lián)亞單位疫苗，研究結(jié)果表明對副豬嗜血桿菌4型、5 型的保護率分別是60%和90%。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所王春來利用大腸桿菌表達豬鏈球菌和副豬嗜血桿菌OppA 和OppA2 蛋白并制備成二聯(lián)亞單位疫苗， 結(jié)果表明對副豬嗜血桿菌5 型和13 型均達到80%的保護率。郭曉峰等利用大腸桿菌系統(tǒng)表達Omp16蛋白，并通過測定IL-2、IL-4、IFN-c和免疫攻毒試驗進行評估， 結(jié)果表明Omp16 能刺激機體產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫， 能產(chǎn)生更高滴度的細(xì)胞因子并能抵抗副豬嗜血桿菌的感染。Barasuol 等重組TbpBs 蛋白并通過抗原抗體交叉反應(yīng)和針對各血清型的IgG 抗體水平等研究其交叉免疫反應(yīng)能力，結(jié)果表明重組TbpBs蛋白對血清1 型、5 型、12 型、14 型、15 型具有較強的交叉免疫反應(yīng)。

3.3 藥物治療

在做好豬群的飼養(yǎng)管理和疫苗免疫的情況下， 針對個別豬只選擇敏感藥物進行治療。 副豬嗜血桿菌病的防控不建議對大群用藥， 大群用藥一方面容易造成細(xì)菌的耐藥性，最終導(dǎo)致無藥可用；另外一方面用藥過多，容易造成獸藥殘留，引起食品安全問題。 在無抗或者少抗的養(yǎng)殖情況下， 豬場特別是規(guī)?；i場有必要對豬場進行藥物敏感性摸底，并建立一個合理的用藥體系。