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    南京地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群HTLV感染狀況分析

    2020-12-11 05:39:20蔡麗娜陳慧朱紹汶周靜宇陳新李世林陳寶安
    關(guān)鍵詞:初篩獻(xiàn)血者南京

    蔡麗娜,陳慧,朱紹汶,周靜宇,陳新,李世林,陳寶安

    (1.江蘇省血液中心 獻(xiàn)血服務(wù)科,江蘇 南京 210042;2.江蘇省血液中心 檢驗(yàn)科,江蘇 南京 210042;3.江蘇省血液中心 質(zhì)量管理科, 江蘇 南京 210042;4. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所,四川 成都 610052;5.東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院 血液科,江蘇 南京 210009)

    人類(lèi)嗜T淋巴細(xì)胞病毒(human T-cell lymphotropic virus,HTLV)是致瘤性RNA病毒,屬慢病毒亞科,可分為HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ兩型。我國(guó) HTLV-Ⅰ流行主要集中在福建、廣東、浙江等東南沿海地區(qū)。近年來(lái) HTLV 感染率調(diào)查表明,廣東、福建等東南沿海地區(qū)存在小范圍流行[1],廈門(mén)是 HTLV 的流行區(qū)[2],河南、湖北等也有相關(guān)案例報(bào)道[3],HTLV 有向非流行區(qū)蔓延的趨勢(shì)[4]。2003年南京地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血抽樣中有5例感染案例[5],但無(wú)相關(guān)確認(rèn)感染報(bào)道[6]。由于南京地區(qū)人口流動(dòng)性較大,目前仍沒(méi)有把HTLV篩查作為常規(guī)篩查項(xiàng)目,對(duì)南京地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群進(jìn)行HTLV篩查有助于了解當(dāng)?shù)氐牟《靖腥玖餍星闆r,為血液安全提供數(shù)據(jù)支持。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    隨機(jī)選取2016—2019年江蘇省血液中心無(wú)償獻(xiàn)血者血液樣本100 172例,獻(xiàn)血者年齡18~55歲;所有無(wú)償獻(xiàn)血者均符合我國(guó)GB18467-2011《獻(xiàn)血者健康檢查要求》的規(guī)定,主要在街頭(固定/流動(dòng))獻(xiàn)血車(chē)/屋、團(tuán)體獻(xiàn)血和站內(nèi)獻(xiàn)血。按照《血站技術(shù)操作規(guī)程(2015版)》的要求留取標(biāo)本,采用5 ml EDTA-K2真空管采集血樣,標(biāo)本采集后置于2~8 ℃冰箱儲(chǔ)存。

    1.2 主要試劑

    HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測(cè)試劑盒(北京萬(wàn)泰公司,批號(hào)T20160101、T20170401、T20180302B、T20190503B),美國(guó)MP HTLV Blot 2.4 蛋白印跡檢測(cè)試劑盒,HTLV核酸檢測(cè)試劑為衛(wèi)生部臨檢中心自建試劑。以上試劑均在有效期內(nèi)使用。

    1.3 儀器

    MICROLAS STAR 8CH全自動(dòng)加樣儀(瑞士Hamilton公司);FAME24/30全自動(dòng)酶免儀(瑞士Hamilton公司)。

    1.4 檢測(cè)方法

    1.4.1 HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體ELISA法初篩 隨機(jī)選取當(dāng)天的獻(xiàn)血者標(biāo)本,用ELISA法進(jìn)行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體篩查。根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求,標(biāo)本OD值≥診斷界值者為HTLV抗體陽(yáng)性,標(biāo)本OD值<診斷界值者為HTLV抗體陰性。初篩呈反應(yīng)性標(biāo)本須進(jìn)行雙孔復(fù)試,復(fù)試至少1孔為陽(yáng)性則判斷為HTLV抗體檢測(cè)陽(yáng)性。

    1.4.2 蛋白免疫印跡(WB)/核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)(NAT)確證 留取抗-HTLV初篩陽(yáng)性標(biāo)本血漿和白膜層。將已經(jīng)進(jìn)行ELISA法檢測(cè)的血漿標(biāo)本再次離心(3 000 r·min-1,10 min),吸取血漿至螺口凍存管中,放入-20 ℃以下冰箱保存;吸取白膜層至離心管中,放入-20 ℃以下冰箱保存。將上述血漿與白膜層標(biāo)本在2~10 ℃條件下運(yùn)送至國(guó)家衛(wèi)健委臨檢中心確證實(shí)驗(yàn)室,WB實(shí)驗(yàn)和NAT兩種方法同時(shí)進(jìn)行確證。WB實(shí)驗(yàn)用血漿檢測(cè)HTLV-Ⅰ/Ⅱ;NAT用白膜層提取基因組DNA,采用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)HTLV-Ⅰ/Ⅱ基因。任一方法結(jié)果為陽(yáng)性即判為HTLV-Ⅰ/Ⅱ陽(yáng)性,該獻(xiàn)血者為確證感染者;如兩種方法均為陰性,則結(jié)果判為HTLV-Ⅰ/Ⅱ陰性。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用χ2檢驗(yàn)對(duì)2016—2019年4個(gè)年度的HTLV-Ⅰ/Ⅱ初篩陽(yáng)性率進(jìn)行比較,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 ELISA初篩結(jié)果

    100 172例獻(xiàn)血者樣本中12例ELISA抗-HTLV呈反應(yīng)性,初篩陽(yáng)性率為0.012%。 2016—2019年4個(gè)年度HTLV-Ⅰ/Ⅱ初篩陽(yáng)性率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.199,P>0.05)。見(jiàn)表1。

    表1 2016—2019年HTLV- Ⅰ/Ⅱ 初篩結(jié)果

    2.2 WB/NAT確證結(jié)果

    2016、2017、2019年初篩呈反應(yīng)性獻(xiàn)血者標(biāo)本W(wǎng)B/NAT確認(rèn)結(jié)果均為陰性,確證感染率為0(表2);其中2017年有1例初篩呈反應(yīng)性獻(xiàn)血者標(biāo)本合并乙肝表面抗原ELISA雙邊陽(yáng)性,系統(tǒng)已鎖定該獻(xiàn)血者為終身屏蔽獻(xiàn)血狀態(tài)。2018年有1例標(biāo)本W(wǎng)B確證結(jié)果呈不確定,且合并梅毒螺旋體抗體ELISA雙邊陽(yáng)性,該獻(xiàn)血者當(dāng)時(shí)獻(xiàn)血年齡為23歲,考慮可能為性傳播,遺憾的是后來(lái)多次隨訪失敗,獻(xiàn)血者拒絕提供醫(yī)院的化驗(yàn)報(bào)告,也拒絕采樣,后續(xù)試驗(yàn)無(wú)法跟進(jìn),系統(tǒng)已鎖定該獻(xiàn)血者為終身屏蔽獻(xiàn)血狀態(tài)。

    表2 HTLV Ⅰ/Ⅱ初篩陽(yáng)性標(biāo)本確證結(jié)果

    3 討 論

    HTLV-Ⅰ是以嚴(yán)格的細(xì)胞-細(xì)胞形式進(jìn)行傳播的,游離的病毒顆粒幾乎不能感染細(xì)胞,HTLV-Ⅰ在體內(nèi)主要感染CD4+T細(xì)胞。HTLV-Ⅱ的傳播途徑主要是性傳播、母嬰傳播、輸血及靜脈注射共用針頭等。輸血是HTLV-Ⅰ/Ⅱ的重要傳播途徑。如血液成分儲(chǔ)存時(shí)間超過(guò)10 d將大大降低HTLV-Ⅰ/Ⅱ的感染幾率。研究表明,成人T淋巴細(xì)胞白血病(ATL)是一種與HTLV-Ⅰ感染直接相關(guān)的疾病[7- 8]。

    HTLV高流行區(qū)主要分布在日本西南部、非洲、加勒比地區(qū)、南美等地,日本、美國(guó)、加拿大、巴西和一些歐洲國(guó)家早就開(kāi)始對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體篩查[9],有效降低了HTLV經(jīng)輸血傳播的風(fēng)險(xiǎn)。美國(guó)1988年將HTLV-Ⅰ列入獻(xiàn)血者常規(guī)篩查項(xiàng)目, HTLV輸血傳播的風(fēng)險(xiǎn)性在實(shí)施篩查前為0.025%,在實(shí)施篩查后降為0.001 6%[10]。法國(guó)和荷蘭分別在1991年和1993年相繼對(duì)所有的獻(xiàn)血者實(shí)施HTLV篩查[11- 12]。

    大量的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),我國(guó)局部地區(qū)存在HTLV感染,尤其是福建東南沿海地區(qū),寧德獻(xiàn)血者的HTLV確認(rèn)陽(yáng)性率為0.34%[13],莆田獻(xiàn)血者的HTLV確認(rèn)陽(yáng)性率為0.101%[14]。2016年有報(bào)道,福建、廣州、浙江、北京、山東、吉林、湖南、廣西、江蘇等地區(qū)均有檢測(cè)出抗-HTLV確證陽(yáng)性的獻(xiàn)血者[15]。2018年珠三角地區(qū)獻(xiàn)血者中總HTLV感染率為0.001 2%[16]。目前,我國(guó)福建地區(qū)已經(jīng)對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行HTLV常規(guī)篩查。近些年來(lái),通過(guò)對(duì)我國(guó)部分HTLV確證陽(yáng)性的血液進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析,積累了一些分子生物學(xué)資料,證實(shí)了中國(guó)內(nèi)陸地區(qū)HTLV-Ⅰ C亞型的存在。我們對(duì)南京地區(qū)2016—2019年4個(gè)年度無(wú)償獻(xiàn)血者隨機(jī)抽樣篩查,只發(fā)現(xiàn)1例確證試驗(yàn)結(jié)果為不確定的標(biāo)本,但并不能說(shuō)明南京地區(qū)就不存在HTLV的感染者,只能說(shuō)明南京地區(qū)目前屬于HTLV非流行區(qū)或低流行區(qū)[6]。鑒于南京地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)、人群密集、流動(dòng)人口多,后續(xù)有必要繼續(xù)對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行HTLV篩查,擴(kuò)大篩查范圍和篩查力度,確保臨床用血安全。目前,南京地區(qū)臨床用血已全部采用濾白血液制劑,同時(shí)還對(duì)血漿進(jìn)行病毒滅活,最大程度降低了輸血傳播病毒的風(fēng)險(xiǎn)。另外,還要加強(qiáng)對(duì)市民的HTLV知識(shí)科普,加強(qiáng)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前的征詢工作,可以更有效地降低輸血傳播HTLV的風(fēng)險(xiǎn)。

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