動物性食品中萬古霉素及去甲萬古霉素測定方法研究進(jìn)展

周迎春 韓文鳳 劉致遠(yuǎn)

1.河南進(jìn)口肉類指定口岸漯河查驗(yàn)區(qū)服務(wù)中心 河南漯河 462300 2.漯河職業(yè)技術(shù)學(xué)院 河南漯河 462000

萬古霉素(Vancomycin)和去甲萬古霉素(Norvancomycin)分子式分別為：C66H75Cl2N9O24、C65H73Cl2N9O24，他們均屬于抗革蘭氏陽性菌的三環(huán)糖肽類抗生素，其藥力較強(qiáng)，被稱為“抗生素最后的王牌”，可用來治療超級耐藥細(xì)菌如超級細(xì)菌NDM1、MRSA、MRSE細(xì)菌的感染[1]，是人類目前對付超級耐藥菌株的最后一道防線。

在商業(yè)利益的驅(qū)動下，萬古霉素和去甲萬古霉素被不法分子應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)，從而造成動物性食品中萬古霉素和去甲萬古霉素殘留。

長期或過量食用含有萬古霉素和去甲萬古霉素的動物源性食品，可引起耳、腎和神經(jīng)系統(tǒng)毒性反應(yīng)，皮膚過敏及器官功能紊亂等不良反應(yīng)[2]。同時，由于萬古霉素及去甲萬古霉素的濫用，導(dǎo)致其耐受細(xì)菌的數(shù)量也有所增加，產(chǎn)生更嚴(yán)重的抗生素耐藥性，這對人類疾病的預(yù)防和治療極其不利，影響動物源性食品安全、公共衛(wèi)生、生態(tài)平衡以及動物性食品出口。

在肉類進(jìn)口過程中，萬古霉素的測定曾一度是國際貿(mào)易中的壁壘。因此，對動物源性食品開展萬古霉素及去甲萬古霉素殘留量的檢驗(yàn)檢測工作迫在眉睫。

1 動物性食品中萬古霉素及去甲萬古霉素測定標(biāo)準(zhǔn)的研究進(jìn)展

我國農(nóng)業(yè)部第560號公告將萬古霉素及去甲萬古霉素規(guī)定為禁用獸藥。

2010年03月22日，衛(wèi)生部第四批《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》(整頓辦函〔2010〕50號)公告將萬古霉素列為可能違法添加的非食用物質(zhì)，并特別注明：“需要研制動物性食品中測定萬古霉素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法”。

通過檢索國內(nèi)外已公開發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)，未查詢到相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或已立項(xiàng)未批準(zhǔn)發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)。目前，我國已公布的標(biāo)準(zhǔn)中，僅有一個飼料中萬古霉素測定的標(biāo)準(zhǔn)，即《農(nóng)業(yè)部1862號公告-3-2012飼料中萬古霉素的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》。吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)《DB22/T 1825-2013豬肉中萬古霉素殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》處于未公布實(shí)施階段，暫無其他標(biāo)準(zhǔn)適應(yīng)本標(biāo)準(zhǔn)所涉及的檢驗(yàn)內(nèi)容。

為了給食品風(fēng)險預(yù)警和食品安全監(jiān)管提供技術(shù)支撐，制定動物性食品中萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量測定的標(biāo)準(zhǔn)刻不容緩。

2 動物性食品中萬古霉素及去甲萬古霉素測定方法的研究現(xiàn)狀

目前，測定萬古霉素和去甲萬古霉素的方法主要有高效液相色譜法和熒光偏振免疫法[3]、化學(xué)發(fā)光免疫法[4，5]等，這些方法的前處理往往適用于基質(zhì)簡單的樣品，且檢出限高，不適用于低濃度的檢測，測定對象多為人體或動物血液、腦脊液樣品[6，7]。豬、牛、羊、家禽和水產(chǎn)等動物源性食品含有大量脂肪、蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽、固醇類等，成分復(fù)雜，易被雜質(zhì)干擾，引起基質(zhì)效應(yīng)，降低回收率，而且動物源性食品中萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量小，運(yùn)用上述方法無法準(zhǔn)確進(jìn)行定量定性檢測。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時兼有分離與定性、定量的優(yōu)勢，可完成對復(fù)雜樣本準(zhǔn)確、高效的定性定量分析，優(yōu)化了樣本的前處理過程，使樣本分析更準(zhǔn)確、方便、快捷，具有靈敏度高、應(yīng)用范圍廣、實(shí)用性強(qiáng)等優(yōu)勢，尤其適合分析基質(zhì)復(fù)雜的樣品。

已發(fā)表的文獻(xiàn)報道中利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量的測定對象多為牛奶[8]、蝦[9]等極性較強(qiáng)的樣品，便于分離、易于檢測，而同時適用于豬、牛、羊、家禽和水產(chǎn)等多種動物性食品的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量的報道相對較少，現(xiàn)有報道的方法僅適用于豬肉或豬肝等一種動物性食品[10，11]，或者只能測定萬古霉素[12，13]，而且多數(shù)方法需要采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量[14，15]，增加了檢測工作的復(fù)雜性，實(shí)用性不強(qiáng)。

杜業(yè)剛[16](2016)、韓婉清[17](2016)、綦艷[18](2016)等研究適用于多種動物性食品中萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量的測定，具有較高參考價值。杜業(yè)剛[16](2016)等研究中，萬古霉素和去甲萬古霉素的方法定量限均為20μg/kg；韓婉清[17](2016)等研究中，萬古霉素和去甲萬古霉素的方法定量限分別為15μg/kg、9μg/kg；綦艷[18](2016)等研究中，萬古霉素和去甲萬古霉素的方法定量限分別為2.0μg/kg、3.0μg/kg。方法檢出限普遍偏高，均不能達(dá)到該項(xiàng)目立項(xiàng)要求的技術(shù)指標(biāo)——方法定量限在1ppb(即1.0μg/kg)以下或盡可能低。王洪朋[19](2019)等報道的方法在檢測豬肉、豬肝、豬腎樣品時萬古霉素和去甲萬古霉素的方法定量限均可低至0.3μg/kg，值得推廣到牛、羊、家禽和水產(chǎn)等動物性食品中加以研究、得以應(yīng)用。

3 動物性食品中萬古霉素及去甲萬古霉素測定方法的發(fā)展方向

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法根據(jù)液相色譜的配置不同，又分為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法與超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法與另外兩種檢測方法相比，具有檢測效率高、進(jìn)樣體積小、流動相消耗少等顯著優(yōu)勢。為保障動物性食品安全、公共衛(wèi)生、生態(tài)平衡以及動物性食品安全出口，制定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物性食品中萬古霉素殘留量的標(biāo)準(zhǔn)并將方法定量限降低到1ppb(即1.0μg/kg)以下或盡可能低勢在必行。