復(fù)方烏鱧口服液對(duì)產(chǎn)后抑郁癥模型大鼠行為學(xué)的影響

何 娜，魏 云，何清林，聶 晶，田翔宇，羅 維，楊玉奇

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)2017級(jí)在職碩士研究生，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2.湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410013；3.明瑞制藥有限公司，湖南 瀏陽(yáng) 410331；4湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，湖南 長(zhǎng)沙 410013）

復(fù)方烏鱧口服液是由鮮烏鱧、黃芪、大棗等組成，主要用于促進(jìn)創(chuàng)傷、外科手術(shù)、分娩后的傷口愈合及傷后頭面虛腫、心悸氣短、神疲自汗等癥。臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)其對(duì)分娩后情緒郁悶癥有一定療效［1-2］。本實(shí)驗(yàn)探討了復(fù)方烏鱧口服液抗抑郁的藥效作用及機(jī)制，報(bào)道如下。

1 材料與方法

藥物：復(fù)方烏鱧口服液，規(guī)格10mL/支，生藥含量為1.062g/mL，批號(hào)160109，由湖南明瑞制藥有限公司提供。鹽酸帕羅西汀片，規(guī)格20mg/片，由浙江尖峰藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)150101。地塞米松磷酸鈉注射液，規(guī)格1mL∶5mg，濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)15120602-1。

動(dòng)物：受孕SD大鼠，60只，250～280g，SPF級(jí)，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，飼養(yǎng)于SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室，溫度20℃～26℃，濕度40%～70%。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)為No.43004700015835。

儀器與試劑：DNM-9606酶標(biāo)分析儀，北京普朗新技術(shù)有限公司。5-HT檢測(cè)試劑盒，由Cusabio提供，批號(hào)C0969790372。

方法：將60只受孕大鼠隨機(jī)分為6組，分為對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性對(duì)照組，復(fù)方烏鱧口服液低劑量組、中劑量組、高劑量組，獨(dú)籠飼養(yǎng)。除對(duì)照組外，其余各組大鼠自受孕第1天起，皮下注射，注射用水1mL/kg；至受孕成功第15天開始，皮下注射地塞米松磷酸鈉0.2mg/kg，直到產(chǎn)崽。產(chǎn)崽后繼續(xù)給藥，模型組用蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照組用鹽酸帕羅西汀3.6mg/kg，復(fù)方烏鱧口服液低、中、高劑量組用1.8、3.6、7.2mL/kg，連續(xù)給藥15天。產(chǎn)后4天觀察母愛行為（噙崽潛伏期、集窩時(shí)間、舔崽時(shí)間、噙崽頻率），產(chǎn)后10天進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（活動(dòng)性及興趣性），產(chǎn)后12天進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)（絕望不動(dòng)持續(xù)時(shí)間），產(chǎn)后15天進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（自救持續(xù)時(shí)間、絕望不動(dòng)持續(xù)時(shí)間），產(chǎn)后22天，母鼠腹主動(dòng)脈取血，采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)5-HT含量。

檢測(cè)指標(biāo)［3-4］：①關(guān)愛行為：于分娩后的第4天，母鼠給藥1h后，將幼鼠分散于鼠籠四角，母鼠置于鼠籠中央，在鼠籠正上方100 cm處懸掛攝像機(jī)進(jìn)行記錄，記錄每只母鼠關(guān)愛幼崽行為。噙崽潛伏期，母鼠噙起第1只幼鼠的時(shí)間；集窩時(shí)間，母鼠將所有幼鼠集中的時(shí)間；舔崽時(shí)間，母鼠用舌頭舔或頭部在幼鼠頭背和肛門生殖器周圍持續(xù)3s以上的總時(shí)間；噙崽頻率，母鼠噙起幼鼠的總次數(shù)。②曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：于分娩后的第10天，母鼠給藥1h后，用自制OPEN-FIELD敞箱。四周箱壁為黑色，底面用黑線均勻劃分為相等面積的25塊方格。以動(dòng)物穿越方格數(shù)作為水平活動(dòng)的得分，以直立次數(shù)為垂直活動(dòng)得分。每只動(dòng)物僅測(cè)定1次，每次3min。每次測(cè)試前保持敞箱內(nèi)干凈。曠場(chǎng)試驗(yàn)水平運(yùn)動(dòng)的得分反映大鼠的活動(dòng)性，垂直活動(dòng)的得分則反映大鼠的興趣性。③懸尾實(shí)驗(yàn)：于分娩后的第12天，末次給藥1h后，距大鼠尾尖部約1cm處用膠布貼于懸尾箱支架上，使大鼠成倒掛狀態(tài)，其頭部離箱底約10cm，1次懸掛1只大鼠。懸掛時(shí)間為6min，記錄大鼠4min內(nèi)懸尾累積不動(dòng)時(shí)間。④強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)：于分娩后的第15天，末次給藥1h后，在約60cm高的水桶內(nèi)放人約30cm高度的37℃溫水，距離桶上方100cm處懸掛攝像機(jī)進(jìn)行記錄。大鼠持續(xù)游泳力竭后繼續(xù)觀察6min，記錄游泳不動(dòng)時(shí)間，即大鼠只在水中做少量輕微擺動(dòng)保持頭部不下沉的時(shí)間。⑤血清5-HT含量測(cè)定：各組動(dòng)物繼續(xù)給藥7天后，母鼠腹主動(dòng)脈取血，采用酶聯(lián)免疫法，用ELISA試劑盒檢測(cè)5-HT含量。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（±s）表示，用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

各組關(guān)愛幼崽行為比較見表1。與對(duì)照組比較，模型組母鼠噙崽潛伏期明顯增加，集窩時(shí)間顯著增加，舔崽時(shí)間明顯減少，噙崽頻率顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；與模型組比較，復(fù)方烏鱧口服液低、中、高劑量組噙崽潛伏期、集窩時(shí)間、舔崽時(shí)間、噙崽頻率有不同程度的改善作用，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組關(guān)愛幼崽行為比較 （±s ，n=10）

表1 各組關(guān)愛幼崽行為比較 （±s ，n=10）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05。

噙崽頻率（次/30min）對(duì)照組 - 14.61±2.91 12.08±3.49 62.08±23.84 17.60±5.40模型組 - 17.91±2.99*18.12±5.24**46.04±11.92*10.50±3.17**低劑量組 1.8 17.04±2.87 15.95±4.61 50.65±13.11 13.40±5.54中劑量組 3.6 14.97±3.19#14.50±4.19 50.88±13.17 16.20±6.25#高劑量組 7.2 14.80±3.26#14.08±4.07#55.35±14.38 16.50±6.10#陽(yáng)性對(duì)照組 3.6mg/kg 14.78±3.04#13.90±4.02#55.39±14.34 16.40±7.00#組別 劑量（mL/kg）噙崽潛伏期（s）集窩時(shí)間（min）舔崽時(shí)間（s）

各組抗抑郁作用比較見表2。與對(duì)照組比較，模型組母鼠活動(dòng)性顯著減少，興趣性有降低趨勢(shì)，懸尾和游泳絕望不動(dòng)時(shí)間明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；與模型組比較，復(fù)方烏鱧口服液低、中、高劑量組活動(dòng)性、興趣性、懸尾和游泳絕望不動(dòng)時(shí)間有不同程度的改善作用，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 各組抗抑郁作用比較 （±s ，n=10）

表2 各組抗抑郁作用比較 （±s ，n=10）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05。

游泳絕望不動(dòng)時(shí)間（min）對(duì)照組 - 50.60±14.12 17.00±6.99 2.22±0.57 2.47±0.38模型組 - 33.40±16.95**12.70±3.92 2.72±0.62* 2.93±0.42*低劑量組 1.8 44.60±10.67 13.60±4.38 2.45±0.42 2.70±0.43中劑量組 3.6 45.00±11.71 14.30±4.52 2.44±0.33 2.54±0.39#高劑量組 7.2 45.80±11.69#15.20±5.01 2.22±0.75# 2.61±0.37陽(yáng)性對(duì)照組 3.6 mg/kg 45.90±12.42#16.10±8.23 2.19±0.44# 2.49±0.41#組別 劑量（mL/kg）活動(dòng)性（格/3min）興趣性（次/3min）懸尾絕望不動(dòng)時(shí)間（min）

各組對(duì)母鼠血清5-羥色胺含量影響的比較見表3。與對(duì)照組比較，模型組母鼠5-HT濃度明顯降低（P＜0.05）。與模型組比較，復(fù)方烏鱧口服液低、中、高劑量組母鼠5-HT濃度有不同程度的改善作用，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 各組對(duì)母鼠血清5-HT含量影響的比較 （±s ，n=10）

表3 各組對(duì)母鼠血清5-HT含量影響的比較 （±s ，n=10）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別 劑量（mL/kg） 5-HT（ng/mL）對(duì)照組 - 6.81±2.50模型組 - 4.49±1.62*低劑量組 1.8 5.09±1.84中劑量組 3.6 5.69±2.06高劑量組 7.2 6.45±2.41#陽(yáng)性對(duì)照組 3.6mg/kg 6.52±2.42#

3 討 論

PPD主要表現(xiàn)為焦慮、激動(dòng)、悲傷、沮喪、哭泣、失眠和意識(shí)錯(cuò)亂，甚至出現(xiàn)幻覺和自殺傾向。抑郁癥屬中醫(yī)“郁證”“癲”等范疇。多因脾腎兩虛，肝氣郁結(jié)，血?dú)饽郎氖B(yǎng)，腦失所調(diào)，進(jìn)而發(fā)?。?-4］。西醫(yī)認(rèn)為PPD病因與5-HT含量降低有關(guān)，治療抑郁癥的藥物以5-HT作用的靶點(diǎn)，主要通過增加單胺類遞質(zhì)的濃度、增強(qiáng)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的功能而起到抗抑郁作用［5-10］。

復(fù)方烏鱧口服液由烏鱧、黃芪、大棗等組成，具有補(bǔ)血補(bǔ)氣及促進(jìn)傷口愈合的作用。方中烏鱧具有促進(jìn)傷口愈合、抗炎、殺菌等作用，黃芪具有增強(qiáng)免疫功能作用。Saleem A M等［11］研究發(fā)現(xiàn)烏鱧魚片水提物具有明顯抗抑郁作用。韓曉蕾等［12］研究證明黃芪能夠降低小鼠抑郁反應(yīng)，提高抑郁癥小鼠血清5-HT含量。研究表明，復(fù)方烏鱧口服液能夠使PPD母鼠抑郁行為減輕，同時(shí)能夠使母鼠血清5-HT含量提高，提示復(fù)方烏鱧口服液具有一定的抗抑郁作用。