兒童急性下呼吸道感染的病毒抗原檢測及結(jié)果分析

尹文艷，靳蓉，蘇守碩，王菲，李悅，劉燕

（貴陽市婦幼保健院/貴陽市兒童醫(yī)院 呼吸科，貴州 貴陽 550002）

0 引言

急性下呼吸道感染 （acute lower respiratory tract infection，ALRTI）是兒童常見的感染性疾病，嚴重威脅兒童健康，并給患兒家庭及社會帶來巨大的經(jīng)濟負擔。且據(jù)WHO統(tǒng)計，發(fā)展中國家兒童肺炎的發(fā)病率比發(fā)達國家高l0倍。病毒是引起兒童肺炎的主要病原，2歲以下病毒性肺炎占86%，5歲以上占37%。其中，呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）、流感病毒（influenzavirus，IFV）、副流感病毒（parainfluenza virus，PIV）、鼻病毒（rhinovirus，RV）及腺病毒（adenovirus，AdV）等是引起兒童ALRTI的常見病毒病原[1]。本次研究選擇于我院呼吸科住院的200例急性下呼吸道感染患兒作為研究對象，并對其鼻咽分泌物進行收集，通過直接免疫熒光法對兒童急性下呼吸道感染的病毒抗原進行檢測，并對檢測結(jié)果進行分析，現(xiàn)將報道示下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選擇2017年12月至2019年10月前來本院接受診療的200例急性下呼吸道感染患兒作為研究對象，其中男112例，女88例；年齡28天至14歲，平均（7.03±1.24）歲。入選患者中，急性肺炎42例，急性支氣管炎78例，急性毛細支氣管炎80例。本次研究患兒家屬已知情，并簽署知情同意書，研究已獲得院內(nèi)倫理委員會同意。

1.2 方法。主要通過直接免疫熒光法對病毒抗原進行檢測，檢測的下呼吸道感染病毒抗原主要包括RSV、IFV、PIV1、PIV2、PIV3、RV、Adv共7種病毒抗原。檢測方法如下：將一次性塑料導管經(jīng)患者鼻腔插入，插入深度達7 cm左右直達咽部，然后將鼻咽分泌物吸取出，并使用2 mL濃度為0.9%的無菌氯化鈉注射液進行沖洗導管，將標本取出之后馬上送檢。檢測步驟為：將標本置入到離心管之中，并保持均勻狀態(tài)，以1000 r/min完成離心操作，時間為10 min，將上部清液去除，向沉淀物之中擠入PBS，劑量為2 mL，然歐再以1000 r/min完成離心操作，時間仍設定為10 min，然后再將上清液去除，將0.5 mL PBS加入到沉淀物之中，對其充分混勻，然后取出25 mL置于多孔載玻片進行風干，完成風干之后使用冷丙酮將其固定5 min，之后使用試劑盒7中熒光標記單克隆抗體分別向標本上滴加，在37℃環(huán)境下孵育30 min，進行3次PBS洗片，風干之后進行封片鏡檢。通過熒光顯微鏡進行讀片，若一孔涂片含有的細胞個數(shù)≥100個，則可以認為該涂片能夠應用到檢測結(jié)果評價之中，若出現(xiàn)的完整細胞≥2個，且細胞之中存在蘋果綠熒光，則可判定為陽性[2]。

1.3 統(tǒng)計學分析。以SPSS 20.0進行統(tǒng)計學分析，將（）代表計量資料，經(jīng)t檢驗，將%代表計數(shù)資料，經(jīng)χ2檢驗，差異明顯時，P<0.05，有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 本組標本病毒抗原檢測結(jié)果。200份標本中，病毒抗原陽性檢出率 48.5%（97/200），在7種病毒抗原中，以RSV陽性率檢出率最高，其次為RV，兩者差異明顯，有統(tǒng)計學意義，P<0.05，見表1。

2.2 三種下呼吸道感染病毒抗原檢測結(jié)果。毛細支氣管炎病毒抗原陽性檢出率高于其他兩種疾病，P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義，見表2。

3 討論

表1 本組標本病毒抗原檢測陽性結(jié)果（n，%）

表2 三種疾病病毒抗原檢測結(jié)果（n，%）

直接免疫熒光法是當前呼吸道感染病毒抗原檢測的一種廉價、快速、高效的方法，目前，此方法已在臨床檢測中推廣應用。通過此方法能夠?qū)Σ《究乖M行準確檢測，可于兒童急性下呼吸道感染發(fā)病初期階段便能夠進行明確的指導。而從當前該疾病用藥方面，濫用抗生素現(xiàn)象比較普遍，若未能夠找出病毒抗原從而對患兒實施針對性治療，則患兒在用藥過程中很容易出現(xiàn)病毒耐藥性，從而降低治療效果，甚至不能夠發(fā)揮藥物效用[3]。因此，需要對兒童急性下呼吸道感染的病毒抗原進行準確檢測，從而為臨床治療提供指導。目前，雖然直接免疫熒光法得以在呼吸道疾病檢測之中得到普遍應用，但該方法還存在一定的缺陷，即在使用這種方法進行篩查的過程中，通常會存在4%-8%的染色具有非特異性，從而容易出現(xiàn)誤診的情況，對于該缺陷，閱片醫(yī)務人員的工作經(jīng)驗顯得非常重要，閱片醫(yī)務人員可通過自身豐富的經(jīng)驗來對特異性和非特異性之間做出區(qū)分。

呼吸道病毒主要指的是侵犯呼吸道而引發(fā)呼吸系統(tǒng)以及呼吸系統(tǒng)外組織器官病變的一類病毒。在呼吸道病毒抗原中，以RSV、IFV、PIV1、PIV2、PIV3、RV、Adv這7種抗原最為常見。在這7種病毒抗原之中，RSV屬于最為常見的一種抗原，其能夠造成間質(zhì)性肺炎，也能夠造成毛細支氣管炎，其病毒感染的潛伏期一般在2-8 d，大多數(shù)情況下，其潛伏期通常在4-6 d，其產(chǎn)生的癥狀一般比較輕，單純感染病例一般會在6-10 d便可自行恢復[4]，通過X線檢查，其產(chǎn)生的陰影一般會在2-3周時間范圍內(nèi)消失，若未能夠采取有效的隔離措施，將會容易造成繼發(fā)感染，并再度出現(xiàn)發(fā)熱癥狀，因為患兒的呼吸道局部與成人相比缺乏IgA抗體，因此此類人群對RSV比較易感[5]。通過本次研究顯示，病毒抗原陽性檢出率為48.5%，其中單一陽性檢出率最高的是RSV（40.21%），其次為RV（24.74%），RSV能夠引發(fā)病毒性肺炎以及毛細支氣管炎，病毒感染的潛伏期一般為2-8 d，如果未能夠采取有效的隔離措施，容易繼發(fā)感染，并再次出現(xiàn)發(fā)熱，而因兒童呼吸道局部缺乏IgA抗體，故比較容易感染RSV[6]。此外，本次研究提示，在三種急性下呼吸感染病例中，以急性毛細支氣管炎的病毒陽性檢出率最高（77.5%），這與國內(nèi)相關報道研究結(jié)果一致，可見，RSV是毛細支氣管炎最常見的病毒病原，針對這一檢測結(jié)果，需要臨床醫(yī)師指導患兒家屬積極配合做好預防工作，尤其是對一般治療進行重視，注意對患兒隔離，并做好其他病毒感染的預防工作。

綜上所述，經(jīng)檢測分析，本地區(qū)兒童急性下呼吸道感染病毒抗原主要為RSV，其次為RV，臨床用藥治療過程中，應該根據(jù)各病原體進行合理用藥，并且相關單位還應該加強防控工作，對一般治療特別重視，一旦出現(xiàn)感染病例，應該重視采取隔離措施，著重預防激發(fā)細菌感染以及其他類型病毒感染。