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    漿膜腔積液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)(2020)

    2020-12-08 17:35:06周道銀許紹強(qiáng)張時(shí)民樊愛(ài)琳黃道連高建軍段愛(ài)軍朱鳳嬌趙成艷高菊興君安醫(yī)學(xué)細(xì)胞平臺(tái)專(zhuān)家委員會(huì)閆立志劉超群
    關(guān)鍵詞:漿膜涂片積液

    吳 茅,周道銀,許紹強(qiáng),張時(shí)民,樊愛(ài)琳,黃道連,高建軍,段愛(ài)軍,朱鳳嬌,趙成艷,高菊興君安醫(yī)學(xué)細(xì)胞平臺(tái)專(zhuān)家委員會(huì) 組 稿 閆立志,劉超群 執(zhí) 筆

    參加共識(shí)討論的專(zhuān)家(按姓氏拼音排序):

    柏世玉1, 曹 科2, 竇心靈3, 丁邦勝4, 段愛(ài)軍5, 樊愛(ài)琳6, 高菊興7, 顧劍飛8, 高建軍9, 高海燕10,何 勇11, 黃 俊12, 黃道連13,胡 晶14,蔣錦文15,金 鑫16,盧興國(guó)17,李相磊18,劉超群19,梁 勤20,林慧君21,繆 峰22,潘 巍23,茹進(jìn)偉24,孫宏華25,吳 茅26,王敏敏27,王 哲28,許紹強(qiáng)29,夏萬(wàn)寶30,邢銘芬31,許銀懷32,岳保紅33,閆立志34,張軍格35,張時(shí)民36,張建富37,張春瑩38,曾強(qiáng)武39,趙成艷40,朱鳳嬌41,莊順紅42,周玉利43,周道銀44,周 麟45,鄭智弦46,鄭 瑞47

    (1.山東省泰安市中心醫(yī)院,山東泰安 271000; 2.深圳市兒童醫(yī)院,廣東深圳 518026;3.酒泉市人民醫(yī)院,甘肅酒泉 735000;4.安徽省立醫(yī)院,合肥 230001;5.河南信合醫(yī)院,河南信陽(yáng) 465200;6.空軍軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院,西安 710032;7.臨沂市人民醫(yī)院,山東臨沂 276002;8.復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院,上海 200040;9.邯鄲市第一醫(yī)院,河北邯鄲 056002;10.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院,哈爾濱 150001;11.湖南保靖縣人民醫(yī)院,湖南保靖 416500;12.成都市第三人民醫(yī)院,成都 610031;13.南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛(ài)醫(yī)院,廣東中山 528400;14.重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院,重慶 400016;15.東陽(yáng)市人民醫(yī)院,浙江東陽(yáng) 322100;16.浙江省立同德醫(yī)院, 杭州 310012;17.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院,杭州 310009;18.開(kāi)封市中心醫(yī)院,河南開(kāi)封 475000;19. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬金華中醫(yī)院,浙江金華321017; 20.甘肅省中醫(yī)院,蘭州 730050;21.浙江省人民醫(yī)院,杭州 310014;22.原山東省寄生蟲(chóng)病防治研究所,山東濟(jì)寧 272000;23.海鹽縣人民醫(yī)院,浙江海鹽 314300;24.樂(lè)昌市人民醫(yī)院,廣東樂(lè)昌 512200; 25.中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院,廣東深圳 518000;26.浙江省人民醫(yī)院,杭州 310014;27.杭州市第一人民醫(yī)院,杭州 310006;28.保定第一醫(yī)院,河北保定 071000;29.廣東三九腦科醫(yī)院,廣州 510510;30.上海市松江區(qū)中心醫(yī)院,上海 201600;31.湖州市南潯區(qū)人民醫(yī)院,浙江湖州 313009;32.濮陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心,河南濮陽(yáng) 457000;33.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院,鄭州 450052;34.內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院,內(nèi)蒙古包頭 014010;35.象山縣紅十字臺(tái)胞醫(yī)院,浙江象山 315731;36.北京協(xié)和醫(yī)院,北京 100730;37.江蘇省人民醫(yī)院,南京 210029;38.四川大學(xué)華西醫(yī)院,成都 610041;39.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,貴陽(yáng) 550001;40.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院,遼寧大連 116000;41.浙大一院三門(mén)灣分院,浙江三門(mén) 317100;42.金華市中心醫(yī)院,浙江金華 321000;43.杭州市第一人民醫(yī)院,杭州 310006;44.上海長(zhǎng)海醫(yī)院,上海 200433; 45.諸暨市中醫(yī)醫(yī)院,浙江諸暨 311800;46.梧州市紅十字會(huì)醫(yī)院,廣西梧州 543000;47.浙江省臺(tái)州醫(yī)院,浙江臨海317000 )

    漿膜腔積液是指在疾病情況下,胸腔、腹腔、心包腔及睪丸鞘膜腔內(nèi)積聚過(guò)多液體的總稱(chēng)。漿膜腔積液常規(guī)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)與影像學(xué)、病理液基等技術(shù)一樣有著重要的臨床意義,能夠?yàn)榕R床提供及時(shí)的、有效的、全面的診療依據(jù),受到臨床醫(yī)生的廣泛重視。目前漿膜腔積液常規(guī)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)在國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室發(fā)展不均衡,操作不規(guī)范,報(bào)告格式及診斷標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一[1-2],君安醫(yī)學(xué)細(xì)胞平臺(tái)為進(jìn)一步推廣漿膜腔積液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查,使其操作規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化,經(jīng)全國(guó)多位從事該領(lǐng)域研究的專(zhuān)家共同商討,根據(jù)國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室發(fā)展情況,并參考國(guó)內(nèi)外大量文獻(xiàn),制定出漿膜腔積液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)與診斷技術(shù)共識(shí)。

    1 檢驗(yàn)?zāi)康?/h2>

    計(jì)數(shù)漿膜腔積液中細(xì)胞數(shù)量及各類(lèi)有核細(xì)胞所占百分比,準(zhǔn)確識(shí)別各類(lèi)細(xì)胞、寄生蟲(chóng)、結(jié)晶等有形成分,發(fā)現(xiàn)細(xì)菌和真菌,為疾病的診斷、鑒別診斷、治療效果和預(yù)后評(píng)估提供檢驗(yàn)依據(jù)[3-4]。

    2 標(biāo)本采集[5]

    2.1 標(biāo)本容器 漿膜腔積液由臨床醫(yī)生采集,建議使用標(biāo)本專(zhuān)用管(有蓋、帶刻度、EDTA-K2抗凝劑),采集后加蓋,顛倒混勻3 ~5 次,立即送檢。

    2.2 標(biāo)本量 標(biāo)本留取量至少8 ~10ml,有形成分較少時(shí)可留取50ml 標(biāo)本或多管送檢。

    2.3 標(biāo)本標(biāo)識(shí) 標(biāo)本留取后需要做唯一標(biāo)識(shí)(推薦使用條碼標(biāo)簽),至少包括患者姓名、住院號(hào)或門(mén)診號(hào)及標(biāo)本類(lèi)型。

    3 標(biāo)本運(yùn)送與接收

    3.1 標(biāo)本的運(yùn)送 標(biāo)本采集后2h 內(nèi)由專(zhuān)人送檢,注意生物安全防護(hù),避免溢出。

    3.2 標(biāo)本的接收 標(biāo)本由檢驗(yàn)科工作人員接收,核對(duì)標(biāo)本信息、標(biāo)本種類(lèi)、標(biāo)本留取時(shí)間,觀察標(biāo)本量是否符合要求,觀察標(biāo)本顏色、性狀,以及其它特殊要求是否滿(mǎn)足;對(duì)于不合格標(biāo)本,執(zhí)行標(biāo)本拒收程序或讓步檢驗(yàn)。

    標(biāo)本離心前,若手工計(jì)數(shù)細(xì)胞參照臨床體液檢驗(yàn)技術(shù)要求WS/T 662-2020 施行[6];儀器計(jì)數(shù)參照自動(dòng)化體液分析模式操作要求施行。

    4 標(biāo)本處理

    接收后的標(biāo)本要及時(shí)處理,避免細(xì)胞及其它有形成分破壞,相對(duì)離心力400g,離心時(shí)間5~10 min;對(duì)離心效果不理想的標(biāo)本,可以先用吸管吸出大部分上清液后再次離心,以達(dá)到高度濃縮目的;對(duì)于血性標(biāo)本,離心后可以吸取“白膜”層,混勻后再次離心;未能及時(shí)處理的標(biāo)本應(yīng)放在2~8℃冰箱中儲(chǔ)存,不超過(guò)48h。

    5 制片

    5.1 制片要求 推片為首選方法,要求片膜的頭、體、尾層次清晰,薄厚適度;有核細(xì)胞數(shù)量較少時(shí),可制作2 張無(wú)尾片,以提高陽(yáng)性率。

    5.2 制片方法 將離心后的標(biāo)本管緩慢拿出,避免顛倒或晃動(dòng),用一次性塑料吸管緩慢吸出上清液,靠近底部沉淀時(shí)可用加樣器吸取多余上清液,如底部沉淀量多或比較黏稠,可適當(dāng)增加上清液殘留量。將底部沉渣混勻,取大約10μl 標(biāo)本滴加在載玻片一端,用推片向另一端推制成約2 ~4cm 長(zhǎng)度的涂片,推片角度30°~ 45°,推片時(shí)根據(jù)沉渣的濁度或黏稠度調(diào)整推片角度和速度,濁度或黏稠度較大時(shí),適當(dāng)降低推片角度和速度;濁度或黏稠度較小時(shí),適當(dāng)增加推片角度和速度。注意多份標(biāo)本制片時(shí),推片不能重復(fù)使用或清洗后使用,避免交叉污染。

    注:細(xì)胞較少時(shí),可以使用細(xì)胞涂片離心機(jī)制片。

    5.3 制片數(shù)量 建議制片數(shù)量3 ~5 張;如果加做其它染色法,根據(jù)標(biāo)本量的多少增加制片數(shù)量,制片結(jié)束后,在玻片上注明編號(hào)、患者姓名、日期、標(biāo)本種類(lèi)。

    6 染色

    6.1 常用的染色方法有瑞-姬染色或瑞氏染色,根據(jù)鑒別需要加選其它染色。

    6.2 染色時(shí)將自然干燥的涂片水平放置在染片架上進(jìn)行染色(方法同血涂片),按照瑞-姬染色標(biāo)本操作程序染色,染色時(shí)間5 ~10 min,特殊標(biāo)本可以鏡下觀察染色效果。

    6.3 染好的涂片用流水緩慢沖洗,沖洗時(shí)應(yīng)注意將涂片水平放置在水龍頭下小水沖洗,盡量減少染料沉渣沉積,避免流水直接沖洗片膜,將沖洗后的涂片片尾朝上,自然晾干。

    7 閱片與細(xì)胞分類(lèi)

    7.1 閱片 先用低倍鏡瀏覽片尾,必要時(shí)瀏覽全片。了解有無(wú)體積較大的細(xì)胞或成堆細(xì)胞,觀察細(xì)胞分布與排列,發(fā)現(xiàn)其它有價(jià)值的有形成分,再用油鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)。

    7.2 細(xì)胞分類(lèi) 在涂片染色較好、細(xì)胞分布均勻的部位,以“弓”字從片尾到中間的順序分類(lèi)計(jì)數(shù)100 ~200 個(gè)有核細(xì)胞,分類(lèi)結(jié)果以百分比形式報(bào)告。

    7.3 涂片保存 發(fā)出報(bào)告后,對(duì)涂片進(jìn)行分類(lèi)歸檔,妥善保管,保存時(shí)限按各實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行處置,一般保存3 ~5年。

    8 報(bào)告

    有條件的單位推薦出具圖文報(bào)告,報(bào)告包括常規(guī)和細(xì)胞學(xué)兩個(gè)部分。對(duì)化膿性炎癥、消化道穿孔、結(jié)核性及惡性腫瘤細(xì)胞的標(biāo)本,可先電話(huà)通知臨床醫(yī)生,再出具正式報(bào)告[7]。

    8.1 常規(guī)部分 包括顏色、透明度、李凡他試驗(yàn)、細(xì)胞總數(shù)、有核細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)百分比等。

    8.2 細(xì)胞學(xué)部分 包括圖像、形態(tài)學(xué)描述、異常細(xì)胞的分級(jí)報(bào)告、提示或建議等。同時(shí)報(bào)告其它有形成分,如細(xì)菌、真菌、包涵體、寄生蟲(chóng)、結(jié)晶、脂肪滴及其它有價(jià)值的形態(tài)信息。

    8.2.1 圖像:用圖像采集系統(tǒng)在鏡下選擇涂片細(xì)胞分布均勻,染色良好的部位,對(duì)診斷有價(jià)值的細(xì)胞或有形成分進(jìn)行拍攝,選擇有代表性的圖片。

    8.2.2 形態(tài)學(xué)描述:對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行必要的形態(tài)描述,包括細(xì)胞分布、細(xì)胞大小、胞質(zhì)量、胞質(zhì)內(nèi)容物、胞質(zhì)著色、核大小、核形、核染色質(zhì)排列、核仁數(shù)量與大小等。對(duì)其它異常細(xì)胞或有形成分進(jìn)行必要的形態(tài)學(xué)描述。

    8.2.3 異常細(xì)胞的分級(jí)報(bào)告:未查見(jiàn)惡性細(xì)胞、查見(jiàn)核異質(zhì)細(xì)胞、查見(jiàn)可疑惡性細(xì)胞、查見(jiàn)惡性細(xì)胞。如果能夠確定上皮源性的惡性細(xì)胞則報(bào)告癌細(xì)胞;如果能夠確定是造血淋巴組織惡性細(xì)胞則報(bào)告為白血病細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞;如果不能確定來(lái)源時(shí),一律報(bào)告惡性細(xì)胞。

    8.2.4 提示和建議:根據(jù)細(xì)胞數(shù)量、種類(lèi),以及形態(tài)學(xué)變化,結(jié)合臨床資料,向臨床提供合理性提示或建議。

    9 生物安全與防護(hù)

    9.1 標(biāo)本的采集、運(yùn)送必須符合生物安全要求,防止溢出。如標(biāo)本溢出后,應(yīng)立即對(duì)污染的環(huán)境和設(shè)備進(jìn)行消毒處理。

    9.2 檢驗(yàn)人員在處理標(biāo)本時(shí),需做好個(gè)人防護(hù),嚴(yán)格執(zhí)行生物安全管理程序,對(duì)有明確傳染性的標(biāo)本按級(jí)別進(jìn)行防護(hù)。

    9.3 廢棄標(biāo)本及其它相關(guān)的廢棄物,嚴(yán)格執(zhí)行醫(yī)療廢物處理流程。

    10 臨床意義[8-9]

    10.1 非腫瘤性有核細(xì)胞

    10.1.1 檢出中性粒細(xì)胞,比例及數(shù)量增多,提示急性炎癥;并發(fā)壞死顆粒及細(xì)胞碎片出現(xiàn),提示化膿性炎癥可能。

    10.1.2 檢出淋巴細(xì)胞,多見(jiàn)于漏出性積液,也可見(jiàn)于病毒感染、腫瘤或淋巴瘤等疾?。蝗袅馨图?xì)胞比例及數(shù)量明顯增多,考慮結(jié)核性積液可能。

    10.1.3 檢出嗜酸性粒細(xì)胞,比例及數(shù)量增多,提示氣胸、血胸、過(guò)敏性疾病或寄生蟲(chóng)感染可能,也偶見(jiàn)于腫瘤或結(jié)核性積液中。

    10.1.4 檢出嗜堿性粒細(xì)胞,比例及數(shù)量增多,提示存在變態(tài)反應(yīng)性疾病。

    10.1.5 檢出巨噬細(xì)胞,且比例及數(shù)量增多,提示慢性非特異性炎癥、急性炎癥恢復(fù)期;此外,也可見(jiàn)于腫瘤、病毒或寄生蟲(chóng)感染等。

    10.1.6 檢出漿細(xì)胞,少量與免疫反應(yīng)有關(guān);若伴有形態(tài)異常和數(shù)量增多,提示漿細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤可能。

    10.1.7 檢出退化間皮細(xì)胞,提示間皮細(xì)胞在積液中存在較長(zhǎng)時(shí)間或有害因素?fù)p傷。

    10.1.8 檢出核異質(zhì)間皮細(xì)胞或間皮細(xì)胞不典型增生,提示漿膜受損、慢性炎癥、水腫或有害因素?fù)p傷間皮細(xì)胞;中、高度核異質(zhì)細(xì)胞不排除腫瘤細(xì)胞可能。

    10.1.9 檢出巨核細(xì)胞,提示髓外造血或外傷可能,需結(jié)合臨床及其它相關(guān)檢查。

    10.1.10 檢出含鐵血黃素細(xì)胞(結(jié)合鐵染色),提示漿膜腔陳舊性出血。

    10.1.11 檢出狼瘡細(xì)胞,提示系統(tǒng)性紅斑狼瘡或其它免疫性疾病可能。

    10.1.12 檢出鱗狀上皮等外源性細(xì)胞,提示空腔臟器穿孔或術(shù)后瘺道可能,需要結(jié)合其它有形成分綜合分析。

    10.2 腫瘤細(xì)胞

    10.2.1 檢出可疑惡性間皮瘤細(xì)胞,提示漿膜腔原發(fā)性惡性腫瘤,建議結(jié)合免疫組化及其它檢查進(jìn)一步明確。

    10.2.2 檢出腺癌細(xì)胞、鱗狀上皮癌細(xì)胞、未分化(或低分化)癌細(xì)胞、小細(xì)胞癌、骨髓瘤細(xì)胞、神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞、惡性黑色素瘤細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞,提示腫瘤細(xì)胞漿膜腔轉(zhuǎn)移,建議結(jié)合免疫組化及組織病理學(xué)進(jìn)一步明確。

    10.2.3 檢出造血淋巴組織系統(tǒng)原始細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞,則提示白血病細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞侵犯漿膜腔,需結(jié)合病史。

    10.3 其它有形成分

    10.3.1 檢出結(jié)晶類(lèi):膽固醇結(jié)晶提示囊性、包裹性積液;檢出膽紅素結(jié)晶并發(fā)脂肪滴、細(xì)菌或真菌、鱗狀上皮細(xì)胞等,提示空腔臟器穿孔;檢出橙色血質(zhì)結(jié)晶(血晶),提示漿膜腔陳舊性出血。

    10.3.2 檢出細(xì)菌及真菌,提示漿膜腔細(xì)菌或真菌感染(需排除污染)。

    10.3.3 檢出寄生蟲(chóng),提示寄生蟲(chóng)感染。

    10.3.4 檢出花粉或植物細(xì)胞,提示空腔臟器穿孔(需排除污染)。

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