牛支原體的研究進(jìn)展

桑旦歐珠 高家登曲 久

（西藏那曲地區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣總站，西藏那曲 852000）

牛支原體的研究進(jìn)展

桑旦歐珠 高家登*曲 久

（西藏那曲地區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣總站，西藏那曲 852000）

牛支原體又被稱為牛霉形體，主要引起犢牛的肺炎、關(guān)節(jié)炎及肉牛和奶牛的角膜結(jié)膜炎、耳炎、乳腺炎、生殖道炎等在內(nèi)的多種疾病。我國(guó)對(duì)牛支原體的研究比較少，在牛發(fā)病時(shí)容易被忽視。本文就牛支原體的病原學(xué)、流行病學(xué)、致病性、臨床癥狀、病理變化、診斷和治療進(jìn)行了闡述。

牛支原體病原學(xué)臨床癥狀

牛支原體（Mycoplasma bovis，M. bovis）又被稱為牛霉形體，是一類缺少細(xì)胞壁，體積微小，介于病毒與細(xì)菌之間的原核微生物。不僅是感染牛的一種重要的病原體而且還很容易被人們所忽視。牛支原體主要引起犢牛的肺炎、關(guān)節(jié)炎及肉牛和奶牛的角膜結(jié)膜炎、耳炎、乳腺炎、生殖道炎等在內(nèi)的多種疾病。美國(guó)于1961年首次在病牛患有乳腺炎的病料中分離出支原體[1］，1983年我國(guó)首次在患有牛乳腺炎的牛奶中分離到牛霉形體[2］，此后很少報(bào)道支原體，只有少數(shù)的臨床證實(shí)支原體的報(bào)道。直到2008我國(guó)首次從肉?；加袎乃佬苑窝字蟹蛛x出支原體，并確定為牛支原體肺炎[3］。隨后，辛九慶、李嬡等從部分犢牛出現(xiàn)嚴(yán)重肺炎癥狀的肺臟中分離并培養(yǎng)出支原體，首次證實(shí)了在我國(guó)部分地區(qū)存在牛支原體的流行情況[4］。由于牛支原體對(duì)世界的養(yǎng)牛業(yè)危害嚴(yán)重，藥物治療效果不明顯，疫苗研制已成為開(kāi)發(fā)重點(diǎn)。目前美國(guó)研制了牛支原體滅活疫苗，可降低犢牛肺臟的損傷[5］。但目前除美國(guó)外，幾乎沒(méi)有商業(yè)化疫苗用于牛支原體感染的預(yù)防。美國(guó)雖公布兩種商業(yè)化疫苗，但沒(méi)有公開(kāi)發(fā)表說(shuō)明疫苗的有效性，而目前所用的疫苗有嚴(yán)重的副作用[6］。

1　病原學(xué)

牛支原體屬于柔膜體綱，沒(méi)有細(xì)胞壁，能在無(wú)細(xì)胞生命培養(yǎng)基中繁殖生長(zhǎng)的原核細(xì)胞型微生物，基因組大小是1080kb屬于雙股DNA，G+C含量較低一般為27.8%～32.9%，16SrRNA上無(wú)乳支原體與其同源性達(dá)到99.8%[7］。牛支原體個(gè)體微小，能透過(guò)220nm的細(xì)菌濾膜，以二分裂方式生長(zhǎng)繁殖，在液體或固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較慢，一般在5% CO2細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～7d，染色其形狀呈“油煎蛋”樣，革蘭氏染色陰性但著色效果不佳，瑞氏染色良好呈淡紫色，吉姆薩染色呈淡藍(lán)色。葡萄糖、酪蛋白、精氨酸等不能被牛支原體分解，只能用丙酮酸、乳糖等有機(jī)酸類物質(zhì)提供能量。牛支原體屬于黏膜常在菌，主要存在于呼吸系統(tǒng)黏膜、乳腺黏膜、眼結(jié)膜、生殖道黏膜等部位，對(duì)外界抵抗力不強(qiáng)，高溫或干燥都可使其迅速死亡，對(duì)一般的消毒劑抵抗力較小，對(duì)甲紫和醋酸鉈、磺胺類藥物和青霉素均有抵抗力[8］。在4℃牛乳中可存活60d，在水中可存活14d以上。70℃經(jīng)1min或65℃經(jīng)2min即可失去活性[9］，在4℃～37℃的液體中可存活59～185d[10］。

2　流行病學(xué)

各種牛對(duì)支原體的易感性依其生活方式、品種及其個(gè)體的抵抗力不同而有區(qū)別，奶牛和肉牛易感，黃牛和水牛不易感，人不易感，自從首次分離到支原體至今，僅有一例報(bào)道從病人體中分離到牛支原體[11］。目前牛支原體的潛伏期還不確定，國(guó)外有報(bào)道在健康犢牛群中引入感染牛24 h后，就能從犢牛鼻腔中排出牛支原體，但大部分牛在接觸感染牛一周后經(jīng)鼻腔分離到牛支原體[3］。部分牛在接觸感染牛14d后發(fā)病，病牛和帶菌牛是主要的傳染源，有的病牛在康復(fù)后的1.5年甚至2～3年后仍可感染健康牛，在老疫區(qū)感染的牛群有30%～45%的牛呈亞臨床經(jīng)過(guò)[8］。我國(guó)牛支原體病的流行大部分與長(zhǎng)途運(yùn)輸有關(guān)，大部分牛在運(yùn)輸應(yīng)激后7d發(fā)病，少數(shù)牛在運(yùn)輸應(yīng)激后2d發(fā)病，還有的架子牛在運(yùn)輸?shù)侥康牡睾?0d左右發(fā)病[3］。牛群一旦感染支原體將難以消滅，如果在繼發(fā)其他呼吸道疾病，死亡率將顯著增加。主要經(jīng)呼吸道傳播，病原體通過(guò)呼吸道排出，有時(shí)也可經(jīng)乳汁、尿液或子宮滲出液排出，因此近距離接觸、犢牛吸吮乳汁或接觸已發(fā)病牛的尿液或子宮滲出液的牛只就有可能感染牛支原體。

在世界范圍內(nèi)牛支原體廣泛存在，季節(jié)、性別、氣候和年齡等因素對(duì)易感性無(wú)影響。但條件應(yīng)激、畜舍過(guò)度擁擠、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件差可以使本病流行。由于牛感染支原體后使其免疫力降低，從而引起其他疾病的繼發(fā)或混合感染，國(guó)外主要報(bào)道混合感染的疾病有呼吸道合胞體病毒、溶血性巴氏桿菌等[10］，國(guó)內(nèi)報(bào)道的牛泰勒蟲(chóng)病混合感染率較高[3］，而牛支原體與多殺性巴氏桿菌A型和化膿隱秘桿菌混合感染也有報(bào)道[12］。

3　致病性

支原體的致病性主要與其毒力和侵襲力有關(guān)。而支原體的侵襲力主要作為毒力的載體突破機(jī)體的防御功能，并在體內(nèi)定居、生長(zhǎng)、繁殖。侵襲力主要依靠其脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白和粘附結(jié)構(gòu)來(lái)表現(xiàn)。在支原體致病過(guò)程中，其入侵和致病損傷的關(guān)鍵和前提是對(duì)宿主的粘附。而牛支原體卻沒(méi)有專門的粘附結(jié)構(gòu)，但其基因組內(nèi)有數(shù)個(gè)能表達(dá)一組具有粘附功能的脂質(zhì)膜蛋白。該組蛋白至少有13個(gè)可變的基因編碼，又被稱為可變表面脂蛋白（variable surface lipoproteins，Vsp），牛支原體的Vsp已鑒定多個(gè)，有VspA、VspB、VspC、VspF、VspO和VspL[13］，可能還有其他的粘附蛋白，如P26抗原、28ku蛋白、pMB67等。這組蛋白不僅可以介導(dǎo)牛支原體與宿主組織或細(xì)胞的黏附，而且還具有很強(qiáng)的免疫原性，可誘導(dǎo)黏膜免疫[14］。支原體可以利用表面粘附蛋白造成細(xì)胞膜損傷，同時(shí)支原體也可代謝有毒產(chǎn)物，如神經(jīng)外毒素、水解酶等發(fā)揮毒素作用，也可對(duì)宿主細(xì)胞造成損傷。

4　臨床癥狀與病理變化

4.1臨床癥狀

發(fā)病初期病牛體溫升高至40℃～42℃，出現(xiàn)稽留熱，在清晨、傍晚吸入冷空氣或喝冷水刺激時(shí)常表現(xiàn)激烈的短、干的咳嗽，有濃性或清亮鼻液流出?；加屑毙孕偷牟∨３霈F(xiàn)食欲減退或廢絕，呼吸加快或呼吸困難、頻繁干咳、前肢外展、鼻孔擴(kuò)張。因胸部疼痛進(jìn)而呈腹式呼吸。胸部叩診，患部出現(xiàn)實(shí)音或濁音區(qū)。胸部聽(tīng)診，出現(xiàn)濕性啰音以及支氣管呼吸音，如繼發(fā)胸膜炎可聽(tīng)到摩擦音，此時(shí)叩診可出現(xiàn)疼痛。發(fā)病后期，心臟衰弱，脈搏快而弱，80～120次/min，有時(shí)出現(xiàn)肉垂和胸下部水腫，反芻減少或停止，尿少但比重增加，腹瀉與便秘交替出現(xiàn)，病牛因極度呼吸困難窒息而死。患有慢性型的病牛多由急性轉(zhuǎn)來(lái)，也有開(kāi)始發(fā)病即為慢性型，主要表現(xiàn)為病牛消瘦，被毛粗亂，食欲不振，大多數(shù)沒(méi)有明顯的臨床癥狀，體溫時(shí)高時(shí)低，偶發(fā)短咳，即使治愈，也會(huì)成為帶菌者。隨著病情的發(fā)展患牛出現(xiàn)腹瀉，甚至出現(xiàn)血便；有的繼發(fā)犢牛關(guān)節(jié)炎，表現(xiàn)關(guān)節(jié)腫大，臥地不起；有的還出現(xiàn)結(jié)膜炎，出現(xiàn)結(jié)膜潮紅并有膿性分泌物[6，8］。

4.2病理變化

剖檢的特征性病例變化主要在肺部和胸腔，典型的病理癥狀主要是漿液纖維素樣胸膜炎和大理石樣肺變。發(fā)病初期病變較小，出現(xiàn)肺炎的病灶水腫、充血，表現(xiàn)為紫紅色或鮮紅色。發(fā)病中期肺臟增重、腫大，肺間質(zhì)增寬變厚呈灰白色，以右側(cè)較多，胸膜和肺部粘連，且胸腔有少量積液；心包內(nèi)有積液，液體呈黃色，心肌脂肪變性；由于病程的長(zhǎng)短不一，肺部的變化也不盡相同，病程短的可見(jiàn)肺心葉、隔葉和尖葉出現(xiàn)局部紅色肉變及化膿灶；嚴(yán)重的肺部出現(xiàn)化膿性或干酪樣壞死。到發(fā)病后期肺臟病變被結(jié)締組織包圍，形成膿腔或空洞[6，8］。

5　診斷

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀及病理變化，綜合分析后可初步做出診斷。目前，國(guó)內(nèi)外常用的確診本病的方法主要有三種，分別為細(xì)菌的病原學(xué)檢查、基因診斷和血清學(xué)診斷三種方法。

5.1細(xì)菌的病原學(xué)檢查

無(wú)菌采集病牛的鼻拭子、肺臟或胸腔積液等病料接入支原體的專用培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)5% CO2細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～7d，在光學(xué)顯微鏡下觀察支原體的形態(tài)呈“煎蛋樣”，在結(jié)合生化試驗(yàn)即可進(jìn)行鑒定；在液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的顏色由紅變?yōu)辄S色并且透亮，可見(jiàn)豆芽狀或指環(huán)狀的輕度乳光。由于支原體的分離鑒定難度大，時(shí)間長(zhǎng)，不能迅速做出診斷，所以難以推廣。

5.2基因診斷

主要采用的是PCR方法，由于無(wú)乳支原體與牛支原體有很高的同源性，在早期，利用PCR方法很難區(qū)分[15，16］。冉智光等參考牛支原體oppD/F基因設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性引物，擴(kuò)增出牛支原體的特異性片段，不僅能與絲狀支原體絲狀亞種區(qū)別，還可與無(wú)乳支原體進(jìn)行鑒別[17］。

5.3血清學(xué)診斷

主要采用的方法是間接ELISA方法，有時(shí)也用間接血凝試驗(yàn)和生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)進(jìn)行牛支原體的檢測(cè)。目前商品化的ELISA試劑盒主要有比利時(shí)和加拿大生產(chǎn)的ELISA試劑盒及國(guó)產(chǎn)全菌蛋白ELISA試劑盒[18］。

在鑒別本病時(shí)應(yīng)與牛肺結(jié)核和牛多殺性巴氏桿菌進(jìn)行鑒別診斷。

6　預(yù)防與治療措施

6.1加強(qiáng)牛群的引進(jìn)管理

堅(jiān)持“自繁自養(yǎng)”的原則，不從疫區(qū)引進(jìn)牛只，如果必須引進(jìn)，在引進(jìn)前做好牛支原體檢測(cè)，陰性牛做好預(yù)防接種。引進(jìn)后隔離觀察，確保無(wú)病后方可與健康牛共同飼養(yǎng)。

6.2加強(qiáng)牛群的飼養(yǎng)管理

保持牛舍的干燥、清潔，做好通風(fēng)、換氣；減少各種因素的應(yīng)激，如冬天禁止喝冷水等；年齡或品種不同的牛應(yīng)分開(kāi)飼養(yǎng)；牛舍的牛群不能擁擠，密度要適當(dāng)；定時(shí)補(bǔ)充維生素、礦物質(zhì)和精料；做好牛舍平時(shí)的消毒工作。

6.3治療

“早診斷，早治療”是控制本病的根本方法，發(fā)病早期全群應(yīng)采用抗生素治療有一定的效果，如果出現(xiàn)繼發(fā)感染或者混合感染應(yīng)選用敏感藥物。由于支原體沒(méi)有細(xì)胞壁，因此對(duì)青霉素和頭孢類藥物不敏感；支原體較敏感的藥物有環(huán)丙沙星、四環(huán)素、泰樂(lè)菌素、泰妙菌素等抗菌藥[19］；臨床用藥效果存在差異，這可能與該病的病程、耐藥性及繼發(fā)感染等因素有一定的關(guān)系[3］。

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桑旦歐珠（1975-），男，西藏人，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物的疫病防治。

高家登*（1988-），男，河南人，從事動(dòng)物傳染病診斷與防治。