HPLC-ESI-QTOF-MS法測定減肥保健食品中16種食欲抑制劑的研究

宋健

摘 要：本文提出了以HPLC-ESI-QTOF-MS法測定減肥保健食品中16種食欲抑制劑，以為檢測機構(gòu)提供理論與實踐幫助，保障減肥保健食品的健康使用。

關(guān)鍵詞：HPLC-ESI-QTOF-MS法;減肥保健食品;食欲抑制劑

食欲抑制劑會對食用者的下丘腦攝食中樞產(chǎn)生影響，影響食用者食欲，使其產(chǎn)生飽腹感，進而控制進食，達到減肥的目的。長期食用食欲抑制劑使食用者產(chǎn)生依賴性，并出現(xiàn)頭暈、惡心、腹瀉等副作用，危害食用者的身體健康。就此，在減肥保健食品投入市場前，需做好食欲抑制劑檢測工作。

1 實驗方法

1.1 實驗儀器與試劑

實驗選擇高效液相色譜—電噴霧離子化—四級桿串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀及離心機等。

實驗試劑包括甲醇、丙酮、16種食欲抑制劑（包括氯卡色林、麻黃堿、辛伐他汀、西曲布明等）的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

實驗樣品為市售減肥保健食品。

1.2 實驗參數(shù)優(yōu)化

選擇控制變量法，分析最佳實驗參數(shù)（包括對比色譜柱、流動相、質(zhì)譜條件、提取溶劑、凈化柱），明確檢測方法的應(yīng)用要點。

在色譜柱分析中，選擇迪馬鉆石一代C18柱、賽暢C18柱、沃特世XterraC18柱、沃特世CORTECS T3柱4種色譜柱，對比其對食欲抑制劑的分離效果，發(fā)現(xiàn)沃特世CORTECS T3柱的響應(yīng)值最高，將其選為色譜柱。

在流動相分析中，A相的備選溶劑包括甲醇與乙腈;B相的備選溶劑包括水、乙酸銨溶液及磷酸溶液等，對比洗脫獲得的色譜分離效果，發(fā)現(xiàn)A相為甲醇，B相為乙酸銨溶液時，色譜峰分離效果最佳，且表現(xiàn)出較高的離子豐度，將其選為流動相。

在質(zhì)譜條件分析中，選擇正離子與負(fù)離子兩種模式，以同樣參數(shù)進行掃描處理，設(shè)定相應(yīng)質(zhì)譜參數(shù)，對比兩者響應(yīng)強度與峰形，發(fā)現(xiàn)正離子模式下離子豐度更高，食欲抑制劑的離子化效率最高。就此，選擇正離子掃描方式，合理設(shè)定霧化氣壓力、電壓、流速等參數(shù)。

在提取溶劑分析中，選擇甲醇、乙醇、丙酮及乙腈等溶劑為實驗對象，分別設(shè)定不同溶劑組合，對食欲抑制劑進行提取處理，對比提取效果，發(fā)現(xiàn)甲醇和丙酮混合提取效果最佳，將其混合比設(shè)定為6∶4（體積比）。

在凈化柱分析中，選擇WCX、WAX、SIL及MCX等固相萃取柱，進行凈化實驗，測定混合液的凈化回收率。結(jié)果顯示，MCX的凈化回收率最高，選定為凈化柱。

1.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱取5 g減肥保健食品，置于50 mL離心管中，向離心管內(nèi)添加

10 mL甲醇，在頻率40 KHz的條件下，進行超聲提取;將超聲提取后的物質(zhì)置于離心機中離心處理5 min，離心條件為12 000 rpm;吸取上清液，向殘渣內(nèi)添加10 mL甲醇，以同樣參數(shù)進行超聲提取，將其與上清液混合;混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，將混合液濃縮至3 mL;通過混合型陽離子交換固相萃取柱（MCX）對濃縮液進行凈化處理，處理劑選擇丙酮、甲醇與水;凈化后的混合液進行淋洗處理，處理劑選擇鹽酸與甲醇;使用甲醇-水-氨水混合液（三者體積比為80∶12∶8）洗脫，置于氮吹儀中干燥處理，處理后的殘渣添加1 mL乙腈溶解，使用0.22 μm的膜過濾，完成樣品處理。

1.4 實驗條件

在色譜分析中，選擇沃特世CORTECS T3型號的色譜柱，將柱溫設(shè)定為30 ℃;進樣量設(shè)定為10 μL;選擇甲醇為A相，乙酸銨溶液為B相;各相的流速設(shè)定為1 mL/min;色譜柱選擇梯度洗脫方式。

在質(zhì)譜分析中，選擇ESI源為離子源，采取ESI+掃描方式，全掃描參數(shù)設(shè)定為50～1 000 m/z;鞘氣溫度設(shè)定為400 ℃;干燥氣溫度設(shè)定為

300 ℃;流速設(shè)定為10 L/min;毛細(xì)管電壓設(shè)定為4 000 V;霧化氣壓力設(shè)定為300 KPa，流速設(shè)定為1.5 L/min。

2 實驗結(jié)果與分析

在檢測的30種減肥保健食品中，1種檢測出豪莫西布曲明，檢測添加量為11.2 μg/L;1種檢測出苯丙醇胺，檢測添加量為6.3 μg/kg。兩者均為非法添加非食用物質(zhì)，會對人體造成

損害。

以不含食欲抑制劑的減肥保健食品為樣品，對其進行前處理后，添加低濃度（1、5、10、50 ng/mL與100 ng/mL）的食欲抑制劑標(biāo)準(zhǔn)液，檢測后計算檢出限（信噪比設(shè)定為3）與定量限（信噪比設(shè)定為10）。檢測結(jié)果顯示，該方法的檢出限為0.03～

0.3 μg/kg，定量限為0.1～1 μg/kg。同時，向不含食欲抑制劑的樣品添加1、50、100 μg/kg的16種食欲抑制劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照最佳實驗條件進行檢測，分析該檢測方法的回收率與精密度。檢測結(jié)果顯示，在1～

100 μg/kg的添加范圍內(nèi)，該檢測方法的加標(biāo)回收率為92.3%～99.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1%～4%，說明該檢測方法檢測準(zhǔn)確性與靈敏度高。

3 結(jié)論

綜上所述，HPLC-ESI-QTOF-MS法在減肥保健食品中食欲抑制劑檢測中，檢出限為0.03～0.3 μg/kg，定量限為0.1～1 μg/kg，具有檢測準(zhǔn)確性高、檢測靈敏度高等優(yōu)勢，可推廣應(yīng)用。檢測過程中，檢測人員需做好樣品前處理，按照合理色譜條件與質(zhì)譜條件檢測，保障檢測方法優(yōu)勢的發(fā)揮。