烏拉特前旗地區(qū)沙芥總黃酮提取方法對(duì)比研究

烏仁格格 高子舒 余靖冉(河套學(xué)院，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000)

0 引言

沙芥又名沙蘿卜、沙蓋，蒙名額樂森·老邦，是沙區(qū)人民喜愛的野菜之一，其根、莖、葉均可食用，風(fēng)味獨(dú)特，營養(yǎng)保健價(jià)值高，有“沙漠人參”之稱[1]。此外沙芥也是天然的中藥、蒙藥，主要含有礦物質(zhì)、糖類、維生素、氨基酸、黃酮、生物堿等化學(xué)成分[2]。沙芥的莖和幼葉富含水，幼苗時(shí)的沙芥、沙芥籽含有大量油脂，可飼養(yǎng)生活在沙區(qū)的野生動(dòng)物，牛羊等畜類也喜食，可作為牛羊等動(dòng)物春冬兩季的好飼料，同時(shí)對(duì)維護(hù)沙區(qū)生態(tài)平衡也起到了不可磨滅的作用[3]。本實(shí)驗(yàn)是對(duì)巴彥淖爾市烏拉特前旗地區(qū)沙芥總黃酮的提取方法進(jìn)行對(duì)比研究，確定適于提取烏前旗沙芥總黃酮的可行性方法，為烏前旗沙芥開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

將已清洗并自然風(fēng)干的野生沙芥全草放入粉碎機(jī)至2/3 處粉碎；再過60 目篩得試樣。樣品于2017 年8 月從內(nèi)蒙古巴彥淖爾市烏拉特前旗沙地采集得。電子分析天平(FA10048 型上海市安亭電子儀器廠)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮儀器有限公司)、數(shù)顯恒溫水域鍋(HH-2 國華電器有限公司)、紫外分光光度計(jì)(SP-1920UV 型上海光譜儀器有限公司)、循環(huán)水式多用真空泵(SHB-III 型鄭州長城科工貿(mào)有限公司)、各類玻璃儀器。蘆丁(合肥博美藥劑有限公司)為生化試劑，其他試劑為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

稱取蘆丁標(biāo)樣10.00mg 加入80%乙醇溶液溶解，并定容至50mL。分別精確移取0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于25mL 容量瓶，加入1.0mL5% NaNO2溶液，搖勻靜置8min；再加入1.0mL10% Al(NO3)3溶液，搖勻靜置8min；最后加4.0mL 2mol/L NaOH 溶液，用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中，搖勻靜置15min，備用。通過紫外分光光度計(jì)測得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液在510nm 處有最大吸收峰，將上述六份溶液于510nm下測OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程[4]。

2.2 精密度測定試驗(yàn)

精確移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，平行六份，測其吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法測定蘆丁含量[4]。

2.3 加樣回收率測定試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取沙芥全草粉末0.5g，平行三份，分別加入適量蘆丁對(duì)照品，按2.1 中方法處理，測其OD 值，計(jì)算回收率[4]。

2.4 提取方法

2.4.1 堿提酸沉法

準(zhǔn)確稱取1.000 g 沙芥全草粗粉加100mL 蒸餾水煮沸。邊攪拌邊緩慢加入石灰石水溶液將體系pH 調(diào)節(jié)至8～9，微沸20～30min，趁熱過濾。收集濾渣于250mL 錐形瓶中，重復(fù)上述操作，趁熱過濾。合并兩次濾液于250mL 錐形瓶中在60～70℃下用HCl 溶液調(diào)節(jié)pH 至5.0，靜置24h，抽濾。沉淀物連同濾紙放在燒杯中，加入30mL 80%乙醇溶液放置3h[5]。抽濾后將濾液濃縮，用80%乙醇定容至25mL 容量瓶中，得提取液。

2.4.2 乙醇熱回流法

準(zhǔn)確稱取1.000g 沙芥全草粗粉加80%的乙醇30mL，在80℃溫度條件下回流提取1h，抽濾。重復(fù)本操作3 次，合并濾液蒸餾濃縮，用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中，得提取液。

2.4.3 甲醇熱回流法

操作同乙醇熱回流法，溶劑為80%的甲醇。

2.4.4 超聲波提取法

準(zhǔn)確稱取沙芥全草粗粉1.000g 加30mL 80%的甲醇；在超聲波震蕩器中震蕩1h，抽濾[6]。濾渣重復(fù)上述步驟2 次，合并濾液，蒸餾濃縮，用80%乙醇定容至25mL 容量瓶中，得提取液。

2.4.5 熱水浸提法

準(zhǔn)確稱取沙芥全草粗粉1.000g 于250mL 錐形瓶中，加100mL蒸餾水，在95℃溫度條件下用恒溫水浴鍋保溫浸提6h，然后加熱蒸餾濃縮，用80%乙醇溶液定容至25mL 容量瓶中，得提取液[5]。

2.5 總黃酮提取含量測定

每個(gè)方法平行提取四組，分別精密移取1mL 提取液，按照2.1 方法顯色測定OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮提取含量。

式中：C 為待測樣內(nèi)總黃酮濃度(mg/mL)；V 為總體積(mL)；m 為沙芥原料質(zhì)量(g)。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，在波長510nm 下測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為：A=10.5685C-0.0024，R 值為0.9994。

3.2 精密度和加樣回收率測定試驗(yàn)

精密度測定結(jié)果如表1 所示，計(jì)算得RSD 為0.79%，說明精密度良好、重復(fù)性良好。加樣回收率測定結(jié)果見表2，計(jì)算得平均回收率為98.4%，RSD 為1.11%，說明準(zhǔn)確度良好，方法可靠。

表1 精密度測定試驗(yàn)結(jié)果

表2 加樣回收率測定試驗(yàn)結(jié)果

3.3 不同提取方法對(duì)沙芥全草總黃酮提取含量的影響

采用甲醇熱回流法、乙醇熱回流法、堿提酸沉法、超聲波提取法、熱水浸提法等5 種方法對(duì)沙芥全草中總黃酮進(jìn)行了提取，提取效果如表3 所示。

表3 不同提取方法得沙芥全草總黃酮提取含量

由表3 中數(shù)據(jù)可知，不同提取方法提取沙芥全草總黃酮含量排序?yàn)椋簤A提酸沉法＞乙醇熱回流法＞超聲波提取法＞甲醇熱回流法＞熱水浸提法；且RSD 值表明重復(fù)性均良好。

五種方法中堿提酸沉法提取含量最高，能有效的提取沙芥中總黃酮，但其實(shí)驗(yàn)步驟較為復(fù)雜，試劑藥品消耗量大，實(shí)驗(yàn)條件苛刻且用到的溶劑具有強(qiáng)烈腐蝕性，實(shí)驗(yàn)重復(fù)偏差相對(duì)較高，因此不適宜作為最佳提取方法。熱水浸提法具有操作簡單，溶劑易得的優(yōu)點(diǎn)；但實(shí)驗(yàn)溫度要求高，平均提取含量為3.29mg/g，與堿提酸沉法比提取含量低了16.9%，且實(shí)驗(yàn)所需時(shí)間長，一般不常用于總黃酮的提取。超聲波提取法、甲醇熱回流法和乙醇熱回流法相對(duì)于堿提酸沉法來說操作簡單，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好；其中超聲波提取法提取時(shí)間最短，但對(duì)儀器有要求，實(shí)驗(yàn)成本高；甲醇熱回流法操作與乙醇熱回流法相同，但其提取劑甲醇有一定毒性；而乙醇熱回流法提取含量較高，且還具有實(shí)驗(yàn)原理易懂，使用后的乙醇可回收再利用等優(yōu)點(diǎn)。因此提取沙芥全草總黃酮可將乙醇熱回流法作為最佳提取方法。

4 結(jié)語

結(jié)果表明：在烏拉特前旗地區(qū)沙芥總黃酮的提取方法對(duì)比實(shí)驗(yàn)中，乙醇熱回流法是最佳提取方法，平均提取含量為3.58mg/g。該方法具有操作簡單，原理易懂，提取含量高，儀器簡易，用時(shí)較短，溶劑乙醇無毒無害，方便回收等優(yōu)點(diǎn)。賈彥峰等[6]測定沙芥葉片總黃酮含量的研究得結(jié)果為；堿提酸沉法＞超聲波提取法＞乙醇(甲醇)回流提取法＞熱水浸提法，其結(jié)果與本研究有較大差異，原因可能是試樣產(chǎn)地、采集時(shí)間不同，賈彥峰[6]等采用的是沙芥葉片，本研究采用沙芥全草為試樣。

通過本研究可知，巴彥淖爾市烏拉特前旗地區(qū)沙芥全草中總黃酮含量較可觀，建議在今后研究中對(duì)本地區(qū)沙芥總黃酮乙醇回流提取法作進(jìn)一步工藝優(yōu)化以提高總黃酮的提取含量；為進(jìn)一步分離、鑒定黃酮單體成分和其生物活性成分提供最優(yōu)提取方案?？傮w來看，沙芥是一種值得去開發(fā)利用的藥用和食用植物資源。