• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于在體單向腸灌流模型的紅車軸草異黃酮類成分滲透性研究

    2020-11-19 07:26:30羅立宇吳宏偉趙海譽高文遠
    中國中醫(yī)藥信息雜志 2020年11期
    關鍵詞:芒柄腸段花素

    羅立宇,吳宏偉,趙海譽,高文遠

    基于在體單向腸灌流模型的紅車軸草異黃酮類成分滲透性研究

    羅立宇1,吳宏偉2,趙海譽2,高文遠1

    1.天津大學藥物科學與技術學院,天津 300072;2.中國中醫(yī)科學院中藥研究所,北京 100700

    研究紅車軸草水提物的異黃酮類腸吸收成分及其腸滲透性,探討其相應機制。采用超高效液相色譜串聯(lián)質譜法(UPLC-MS/MS),建立紅車軸草水提物腸灌流液中異黃酮類成分大豆苷元、大豆苷、染料木苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷的定量分析方法。基于大鼠在體單向腸灌流模型,研究紅車軸草水提物中6種異黃酮類成分在不同小腸段(十二指腸、空腸、回腸)的腸滲透性,并對不同濃度的芒柄花素、芒柄花苷單體成分腸滲透特征進行研究。建立了紅車軸草水提物腸灌流液中6種異黃酮類成分的UPLC-MS/MS定量分析方法,符合方法學要求。紅車軸草水提物灌流液各成分的有效滲透系數(P)均大于5×10-5cm/s,最大者為芒柄花素(P=3.20,十二指腸),其次為染料木苷(P=2.19,空腸);對于不同腸段,各成分P和吸收速率常數(Ka)均存在一定差異,大豆苷元、芒柄花素的十二指腸P最大,其余4種成分的空腸P最大,表明紅車軸草水提物中異黃酮的最佳吸收窗口為十二指腸和空腸;不同濃度芒柄花素、芒柄花苷單體灌流的P、Ka差異均無統(tǒng)計學意義(>0.05),吸收曲線近似線性,其吸收機制符合被動擴散的特征。本研究初步明確了紅車軸草水提物中異黃酮類成分的腸滲透性及吸收機制,可為質控成分篩選、制劑開發(fā)及臨床合理用藥提供參考。

    在體單向腸灌流;滲透性;紅車軸草;異黃酮;芒柄花素;芒柄花苷

    紅車軸草為豆科車軸草屬植物紅車軸草L.的花序及帶花枝葉,廣泛分布于世界各地,我國各地均有栽培或野生。該植物主要含黃酮、異黃酮、香豆素、有機酸等化學成分[1],其中異黃酮類成分為紅車軸草的主要藥效成分,如芒柄花素、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、染料木苷等,該類成分具有雌激素樣作用[2-3],可預防癌癥[4]、抗骨質疏松[5]、改善女性圍絕經期綜合征[6-7]等。

    口服給藥是中藥臨床常用途徑,胃腸道吸收是影響口服藥生物利用度和變異性的重要因素,了解藥物的胃腸道吸收機制、吸收部位及腸滲透性,對于確定藥物的劑型、揭示中藥功效物質基礎及其相互作用、指導臨床用藥具有重要意義[8]。目前,預測藥物小腸吸收的方法主要分為體外法、離體法、在體法3種[9],其中在體單向腸灌流模型能夠維持血液供應,較好地模擬體內環(huán)境,不損傷研究部位的循環(huán)系統(tǒng)和生理環(huán)境,并可精確獲取不同腸段的吸收特征,與人體試驗結果更具有一致性[10-11]。

    目前關于紅車軸草中異黃酮類成分的研究主要集中在成分定性、定量及藥理活性,其腸吸收成分及吸收規(guī)律研究迄今尚未見報道。因此,本研究基于大鼠在體單灌流模型,首先采用超高效液相色譜串聯(lián)質譜法(UPLC-MS/MS)分析紅車軸草腸灌流液中主要有效成分,建立其中主要異黃酮類成分芒柄花素、大豆苷元、大豆苷、芒柄花苷、染料木苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的定量分析方法,在此基礎上對紅車軸草水提物的腸吸收特征進行研究,揭示其在不同小腸段(十二指腸、空腸、回腸)的滲透和吸收動力學特征,并以芒柄花素、芒柄花苷為代表,對其吸收機制進行探索,為辨識紅車軸草質控成分、揭示紅車軸草異黃酮類有效成分在體內的吸收機制奠定基礎。

    1 儀器、試藥與動物

    Acquity UPLC I-Class型超高效液相色譜儀,美國沃特世公司;Xevo TQ-S micro三重四級桿質譜串聯(lián)(配備MassLynx數據采集軟件),美國沃特世公司;BSA2202S、BSA124S分析天平,德國賽多利斯公司;KQ5200E超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司;Sigma 1-15PK高速離心機,德國希格瑪公司;LSP02-1B注射泵,保定蘭格恒流泵有限公司;Milli-Q超純水制備系統(tǒng),美國密理博公司。

    紅車軸草采自陜西省寧強漢源鎮(zhèn),經北京中醫(yī)藥大學王晶娟副教授鑒定為豆科車軸草屬植物紅車軸草L.的花序及帶花枝葉;對照品芒柄花素(上海詩丹德標準技術服務有限公司,純度>98%,批號1559/15005)、大豆苷元(四川省維克奇生物科技有限公司,純度>98%,批號110794)、大豆苷(成都曼斯特生物科技有限公司,純度>98%,批號MUST-11121201)、芒柄花苷(成都普菲德生物技術有限公司,純度>98%,批號130507)、染料木苷(上海源葉生物科技有限公司,純度>98%,批號P09M8F31018)、毛蕊異黃酮葡萄糖苷(成都普菲德生物技術有限公司,純度>98%,批號140326)、金絲桃苷(上海源葉生物科技有限公司,純度>98%,批號Y04A9X62302),芒柄花素、芒柄花苷原料藥(南京普怡生物科技有限公司,純度>98%,批號140189、141112);質譜級乙腈、甲酸,美國飛世爾科學世界公司;分析級磷酸、氯化鎂、氯化鈉、磷酸二氫鈉、氯化鉀、氯化鈣、碳酸氫鈉、葡萄糖,北京化工廠。

    SD大鼠,雄性,體質量250~280 g,斯貝福(北京)實驗動物科技有限公司提供,動物許可證號SCXK(京)2019-0010。飼養(yǎng)于SPF級動物實驗室,環(huán)境溫度(23±2)℃,濕度(55±10)%,12 h/12 h光照黑暗循環(huán),自由攝食飲水。

    2 方法與結果

    2.1 溶液制備

    2.1.1 對照品溶液

    精密稱取各對照品適量,置于50 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得單一成分對照品貯備液。精密量取各單一成分對照品貯備液適量于同一50 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,得濃度約為15 μg/mL的混合對照品貯備液,取混合對照品貯備液繼續(xù)稀釋,得系列不同濃度的混合對照品溶液,用于分析方法的建立。

    2.1.2 Krebs-Ringer’s溶液

    分別稱取葡萄糖1.4 g、氯化鈣0.37 g,分別單獨溶解。稱取氯化鎂0.02 g、磷酸二氫鈉0.32 g、氯化鉀0.35 g、碳酸氫鈉1.37 g、氯化鈉7.8 g,加水溶解,緩慢加入葡萄糖溶液和氯化鈣溶液,加水稀釋并定容至1000 mL,即得Krebs-Ringer’s溶液(K-R溶液)。

    2.1.3 酚紅溶液

    取酚紅20 mg,精密稱定,溶于1 L K-R溶液中,混勻,即得濃度20 μg/mL的酚紅貯備液。精密移取酚紅貯備液適量至量瓶中,以K-R溶液稀釋成酚紅濃度分別為5~20 μg/mL的系列溶液,以吸光度對酚紅濃度進行線性回歸,繪制標準曲線。精密移取灌流液0.5 mL,置10 mL試管中定容,搖勻,0.45 μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,用紫外-可見分光光度計在波長555 nm處測定吸光度,以標準曲線法計算酚紅含量,用于藥物濃度校正。

    2.1.4 紅車軸草水提物及單體成分灌流液

    稱取100 g紅車軸草,剪斷,加適量水浸泡30 min,加熱煎煮45 min,紗布過濾,得濾液,藥渣繼續(xù)加水煎煮45 min,過濾,合并2次濾液,加熱濃縮為含原藥材1 g/mL的紅車軸草水提液。精密移取紅車軸草水提液2 mL于50 mL容量瓶中,用酚紅貯備液定容,即得腸灌流實驗所用紅車軸草水提物灌流液。

    分別稱取適量芒柄花素、芒柄花苷對照品,加甲醇溶解,配制成所需濃度貯備液,4 ℃貯存。取單體成分貯備液1 mL,用酚紅貯備液稀釋至不同濃度,即得單體成分腸灌流液。

    取SD大鼠,禁食不禁水12~18 h,腹腔注射10%水合氯醛麻醉。沿腹中線打開腹腔,選取所需3個腸段:自幽門下2 cm處向下10 cm為十二指腸段,自幽門下15 cm處向下10 cm 為空腸段,自盲腸上端2 cm處向上10 cm為回腸段。于腸段兩端切口,用37 ℃生理鹽水沖洗至無內容物流出,再用空氣將生理鹽水排空,插管并結扎,接恒流泵。注射泵與腸段入口端相連,設置灌流速度為0.2 mL/min,用腸灌流液(預熱至37 ℃)持續(xù)灌流約30 min吸收達到穩(wěn)定后重新計時,每隔15 min用已知質量的EP管在腸段出口端收集流出灌流液[12-13]。實驗結束后剪下被灌流的腸段并處死大鼠,測量腸段長度及內徑,計算EP管內灌流液的質量。所得灌流液經處理后,分別測定各時間點樣品中指標成分含量及相應的酚紅濃度。

    2.2 分析方法的建立

    2.2.1 色譜條件

    采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),流速0.3 mL/min,柱溫40 ℃,流動相A為0.1%甲酸水、B為乙腈,進樣量2 μL。梯度洗脫程序:0~1.0 min,90%~80%A;1~5.5 min,80%~60%A;5.5~6 min,60%~20%A;6~8 min,20%~5%A;8~8.5 min,5%A;8.5~9 min,5%~90%A;9~10 min,90%~90%A。

    2.2.2 質譜條件

    采用電噴霧離子源(ESI),正、負離子掃描,多反應監(jiān)測(MRM)方式。毛細管電壓0.5 kV,脫溶劑氣流N2,流速1000 L/h,脫溶劑溫度500 ℃,離子源溫度150 ℃。定性、定量離子對及碰撞能量等質譜參數見表1。

    表1 6種化合物質譜參數

    化合物 名稱ESI 模式保留時間/min母離子(m/z)定量離子(m/z)錐孔電壓/V碰撞能量/eV 大豆苷+2.42417.08255.034812 染料木苷+3.30433.07271.092416 芒柄花苷+3.78431.09269.125014 大豆苷元+5.18255.06 91.018234 芒柄花素-6.72267.04251.995816 毛蕊異黃酮 葡萄糖苷+2.55447.09285.115216

    2.2.3 供試品溶液制備

    取大鼠腸灌流液,加甲醇稀釋10倍,用0.22 μm微孔濾膜過濾,進行UPLC-MS/MS分析。

    2.2.4 測定法

    分別取空白灌流液、混合對照品溶液(50 ng/mL)及供試品溶液,按上述方法進行UPLC-MS/MS分析,結果見圖1。在上述色譜及質譜條件下,紅車軸草灌流液中6種目標成分能實現(xiàn)良好分離,并具有較好的響應值,且無其他成分干擾目標成分的檢測。

    2.2.5 方法學考察

    2.2.5.1 線性關系與定量限

    取“2.1.1”項下混合對照品溶液,用甲醇稀釋為濃度1~300 ng/mL的系列對照品溶液(=6),進行UPLC-MS/MS分析,以各自定量離子的峰面積為縱坐標、對照品濃度為橫坐標繪制標準曲線,得各成分線性方程和相關系數。結果表明,各成分在測定范圍內線性關系良好。

    取“2.1.1”項下對照品混合溶液,逐級稀釋并測定,至信噪比(S/N)=10,得定量限。結果表明各成分的定量限符合測定要求,方法靈敏度良好。

    注:DDG.大豆苷;MRYHTPTTG.毛蕊異黃酮葡萄糖苷;RLMG.染料木苷;MBHG.芒柄花苷;DDGY.大豆苷元;MBHS.芒柄花素

    2.2.5.2 精密度試驗

    取“2.1.1”項下混合對照品貯備液適量,加甲醇稀釋至濃度50 ng/mL的混合對照品溶液,連續(xù)進樣6次,記錄峰面積并計算RSD。結果各成分RSD均小于3%,表明儀器精密度良好。

    2.2.5.3 重復性試驗

    取“2.1.4”項下同一灌流液,按“2.2.3”項下方法平行制備6份供試品溶液,進行UPLC-MS/MS分析,記錄峰面積并計算RSD。結果各成分RSD均小于3%,表明方法重復性良好。

    2.2.5.4 穩(wěn)定性試驗

    取“2.1.4”項下同一灌流液,按“2.2.3”項下方法制備,分別于0、2、4、10、20、24 h進行UPLC-MS/MS分析,記錄峰面積并計算RSD。結果各成分峰面積RSD為1.2%~3.9%,表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

    2.2.5.5 加樣回收率試驗

    取目標成分濃度已知的紅車軸草灌流液,按低(50%)、中(100%)、高(200%)濃度分別加入對照品,各濃度平行制備3份,進行UPLC-MS/MS分析,記錄峰面積并計算加樣回收率。結果表明各成分的回收率良好,RSD均小于5%,方法的準確度符合要求。

    2.2.5.6 方法學考察結果

    紅車軸草灌流液中6種方法學考察結果見表2。

    表2 紅車軸草灌流液中6種成分方法學考察結果

    化合物線性范圍/ (ng/mL)相關系數 (R2)定量限/ (ng/mL)精密度 RSD/%重復性 RSD/%穩(wěn)定性 RSD/%平均回收率/% 低濃度中濃度高濃度 大豆苷1.45~2890.999 50.0142.22.53.7 96.5105.2 97.8 毛蕊異黃酮葡萄糖苷1.28~2550.999 90.0131.32.81.5 96.6103.5103.5 染料木苷1.20~2390.999 70.2402.02.83.9 97.8101.4 97.3 芒柄花苷1.66~1660.999 80.0171.21.52.3100.4104.1 97.6 大豆苷元1.51~1510.999 20.3002.10.53.7103.7104.1100.9 芒柄花素1.17~2330.999 70.5002.61.21.2102.5 95.4 97.5

    2.3 腸滲透性分析

    按“2.1.4”項下方法,收集不同腸段、不同時間點的腸灌流液,按上述方法進行檢測,計算主要成分濃度;并測量相應腸段長度、內徑及灌流液質量,按以下公式計算有效滲透系數(P)和吸收速率常數(Ka)[13]。

    式中,Q為灌流液流速(mL/min);C為灌流液未經腸吸收時各成分的濃度(μg/mL);C為灌流收集液中各成分濃度(μg/mL);C(cor)為校正后的灌流收集液中各成分濃度(μg/mL);L為灌流腸段長度(cm);為灌流腸段半徑(cm);=2πrL,為灌流腸段體積(mL);M、M分別為腸腔進、出口端灌流液中酚紅濃度。

    大鼠腸灌流實驗獲得的P值與人體腸吸收實驗獲得的P值有較好的一致性,并與口服生物利用度具有較好的相關性,根據Zakeri-Milani[14]規(guī)則判定, P<5×10-5cm/s為低滲透性,P>5×10-5cm/s為高滲透性。Ka用于評價藥物吸收快慢。

    紅車軸草水提物的腸滲透性分析結果見表3??梢钥闯觯鞒煞?i>P均大于5×10-5cm/s,表明紅車軸草水提物中6種異黃酮類成分滲透性良好,其中P最大者為芒柄花素(P=3.20±0.94,十二指腸),其次為染料木苷(P=2.19±0.7,空腸)。對于不同腸段,各成分P和Ka均存在一定差異:P差異最大的成分為染料木苷(<0.05),空腸(P=2.19)為回腸(P=0.34)的6.4倍;其次為大豆苷(<0.05),空腸(P=0.93)為回腸(P=0.18)的5.2倍。各成分的最大P及Ka均出現(xiàn)在十二指腸或空腸段,表明各成分在小腸的主要吸收部位為十二指腸和空腸。另外,對于各腸段(十二指腸、空腸、回腸),苷元(大豆苷元、芒柄花素)的P和Ka均顯著大于其相應的苷(大豆苷、芒柄花苷),差異有統(tǒng)計學意義(<0.05),表明在溶液狀態(tài)下,苷元較苷更易于透過腸壁而被吸收。

    表3 紅車軸草6種異黃酮類成分不同腸段Peff、Ka(±s,n=3)

    2.4 芒柄花素、芒柄花苷腸吸收機制

    為進一步探索紅車軸草異黃酮類成分的腸吸收機制,基于主要吸收部位(空腸),選取芒柄花素、芒柄花苷為代表,考察多濃度的吸收特征,探討其吸收機制。累積吸收曲線見圖2、圖3??梢姡鄯e吸收量隨灌流液中成分濃度升高而增大,吸收曲線近似于線性,提示腸道對芒柄花素、芒柄花苷的吸收無濃度抑制,其吸收機制以被動擴散為主。由表4、表5可見,芒柄花素P、Ka分別為(1.00~1.20)×10-4cm/s、(9.62~10.98)×10-4/s,芒柄花苷P、Ka分別為(0.54~0.66)×10-4cm/s、(6.05~7.69)×10-4/s,提示濃度對芒柄花素、芒柄花苷的P和Ka沒有影響(>0.05),進一步表明芒柄花素、芒柄花苷的吸收機制以被動擴散為主。

    圖2 芒柄花素空腸累積吸收曲線

    圖3 芒柄花苷空腸累積吸收曲線

    表4 不同濃度芒柄花素的空腸Peff、Ka(±s,n=3)

    表5 不同濃度芒柄花苷的空腸Peff、Ka(±s,n=3)

    3 討論

    本試驗對色譜條件、質譜條件及樣品前處理方法進行了系統(tǒng)考察。色譜方面,比較了甲醇-水和乙腈-水洗脫系統(tǒng),以及不同品牌色譜柱,結果發(fā)現(xiàn)采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色譜柱,流動相為乙腈-0.1%甲酸水時,可得到良好的MRM色譜峰形;質譜方面,主要對各成分的碰撞誘導解離電壓進行了優(yōu)化,以便獲得最大響應值;在樣品前處理上,除采用甲醇直接稀釋外,還考察了固相萃取的前處理法,雖然固相萃取能夠更好地去除樣品的中無機鹽、濃縮樣品,但綜合分析效果及分析通量,最終決定采用灌流液直接加甲醇稀釋的方法,該方法快速、準確,目前尚未見相關報道。

    紅車軸草主要異黃酮類成分除以上6種外,含量較高的還有染料木素、鷹嘴豆芽素A[1]等,因此前期擬對其進行定量研究。但預實驗結果表明,紅車軸草水提液未能檢出染料木素與鷹嘴豆芽素A,在50%甲醇水超聲提取液中才能檢測到染料木素與鷹嘴豆芽素A,這是由于染料木素與鷹嘴豆芽素A的極性較小,難溶于水??紤]到紅車軸草在臨床使用中主要以水作為提取溶劑,為保持與臨床用法的一致性,本研究采用水作為提取溶劑,研究紅車軸草水提液中多種異黃酮類成分的滲透性。同時,本研究確定的6種異黃酮類成分也可為基于水煎液的紅車軸草中藥復方的質量控制標志物的篩選提供參考。

    紅車軸草水提液6種異黃酮類成分的P均大于5×10-5cm/s,表明紅車軸草水提液異黃酮類成分滲透性良好。由于特定的溶解性、滲透性或物理化學性質,一些藥物只在特定的腸段吸收,稱為吸收窗口[15-16]。不同腸段存在酶活性、黏膜層厚度、膜成分等生理差異,導致對不同化學成分的吸收存在顯著差異[17-19]。本研究中紅車軸草水提液6種異黃酮類成分在不同腸段的吸收均存在一定差異,大豆苷元、芒柄花素在十二指腸的P最大,其余4種成分在空腸的P最大,提示紅車軸草水提物異黃酮類成分的最佳吸收窗口為十二指腸和空腸。

    不同濃度芒柄花素和芒柄花苷的空腸段吸收實驗結果顯示,在試驗濃度范圍內,藥物濃度不影響其吸收特征,表明芒柄花素、芒柄花苷腸吸的吸收機制以被動擴散為主。其他成分的吸收機制尚待進一步確認。

    與芒柄花素、芒柄花苷單體形式給藥相比,紅車軸草水提取物中芒柄花素、芒柄花苷在相應腸段(空腸)的P顯著提高(<0.05),表明紅車軸草水提物多成分的綜合效應促進了芒柄花素、芒柄花苷的滲透吸收。

    另外,在葛根芩連片有效成分滲透性研究中,基于與本研究相同的實驗方法,得到葛根芩連片中大豆苷元與大豆苷在大鼠空腸段的P分別為0.41×10-4、0.64×10-4cm/s[20],本研究結果得到紅車軸草水提液中大豆苷元與大豆苷在大鼠空腸段的P分別為1.08×10-4、0.93×10-4cm/s,較其在葛根芩連片中的P值顯著提高,表明中藥不同復方配伍導致的化學環(huán)境變化對有效成分的滲透吸收會產生影響。

    綜上,本研究通過對紅車軸草水提物異黃酮類成分的腸滲透性研究,揭示了其主要吸收成分、各成分的吸收特征,以及芒柄花素、芒柄花苷的吸收機制,可為紅車軸草質控成分的篩選、制劑的開發(fā)及臨床合理用藥提供參考和支持。

    [1] WU Q, WANG M, SIMON J E. Determination of isoflavones in red clover and related species by high-performance liquid chromatography combined with ultraviolet and mass spectrometric detection[J]. J Chromatogr A,2003,1016(2):195-209.

    [2] BUDRYN G, GALAZKA-CZARNECKA I, BRZOZOWSKA E, et al. Evaluation of estrogenic activity of red clover (L.) sprouts cultivated under different conditions by content of isoflavones, calorimetric study and molecular modelling[J]. Food Chem,2018,245:324-336.

    [3] KOLODZIEJCZYK-CZEPAS J. Trifolium species-derived substances and extracts - biological activity and prospects for medicinal applications[J]. J Ethnopharmacol,2012,143(1):14-23.

    [4] BLAKESMITH S J, LYONS-WALL P M, GEORGE C, et al. Effects of supplementation with purified red clover () isoflavones on plasma lipids and insulin resistance in healthy premenopausal women[J]. Br J Nutr,2003,89(4):467-474.

    [5] ATKINSON C, COMPSTON J E, DAY N E, et al. The effects of phytoestrogen isoflavones on bone density in women:a double- blind, randomized, placebo-controlled trial[J]. Am J Clin Nutr, 2004,79(2):326-333.

    [6] KANADYS W, BARANSKA A, JEDRYCH M, et al. Effects of red clover () isoflavones on the lipid profile of perimenopausal and postmenopausal women - a systematic review and meta-analysis[J]. Maturitas,2020,132:7-16.

    [7] 李松濱,楊麗珍,李寶龍.紅車軸草異黃酮對圍絕經期大鼠卵巢功能的影響[J].中醫(yī)藥學報,2009,37(2):18-20.

    [8] RUIZ-GARCIA A, BERMEJO M, MOSS A, et al. Pharmacokinetics in drug discovery[J]. J Pharm Sci,2008,97(2):654-690.

    [9] HE X, SONG Z J, JIANG C P, et al. Absorption properties of luteolin and apigenin in Genkwa Flos using in situ single-pass intestinal perfusion system in the rat[J]. Am J Chin Med,2017, 45(8):1745-1759.

    [10] ZAKERI-MILANI P, VALIZADEH H, TAJERZADEH H, et al. Predicting human intestinal permeability using single-pass intestinal perfusion in rat[J]. J Pharm Pharm Sci,2007,10(3):368-379.

    [11] 許敏,姜壯壯,陶麗,等.中藥滲透性規(guī)律及其評價研究進展[J].中草藥,2019,50(14):3477-3483.

    [12] 許永崧,韓曉鳳,龔慕辛,等.單向在體腸灌流在中藥研究中的應用[J].中國實驗方劑學雜志,2016,22(1):211-218.

    [13] 朱亮,尹麗娜,梁澤華,等.在體低速單向灌流模型考察Hup-A的腸吸收部位[J].中華中醫(yī)藥學刊,2015,33(11):2721-2724.

    [14] LI H, DONG L, LIU Y, et al. Comparison of two approaches of intestinal absorption by puerarin[J]. J Pharmacol Toxicol Methods,2014,70(1):6-11.

    [15] ZAKERI-MILANI P, BARZEGAR-JALALI M, AZIMI M, et al. Biopharmaceutical classification of drugs using intrinsic dissolution rate (IDR) and rat intestinal permeability[J]. Eur J Pharm Biopharm,2009,73(1):102-106.

    [16] ROUGE N, BURI P, DOELKER E. Drug absorption sites in the gastrointestinal tract and dosage forms for site-specific delivery[J]. Int J Pharm,1996,136(1/2):117-139.

    [17] LIPINSKI C, LOMBARDO F, DOMINY B, et al. Experimental and computational approaches to estimate solubility and permeability in drug discovery and development settings[J]. Adv Drug Deliv Rev, 2012,64:4-17.

    [18] GAO Y, HE L, KATSUMI H, et al. Improvement of intestinal absorption of water-soluble macromolecules by various polyamines:Intestinal mucosal toxicity and absorption-enhancing mechanism of spermine[J]. Int J Pharm,2008,354(1/2):126-134.

    [19] DAHAN A, WEST B T, AMIDON G L. Segmental-dependent membrane permeability along the intestine following oral drug administration:Evaluation of a triple single-pass intestinal perfusion (TSPIP) approach in the rat[J]. Eur J Pharm Sci,2009, 36(2/3):320-329.

    [20] 王子禹,劉洋,張鑫,等.基于抗炎活性的葛根芩連片整體的中藥生物藥劑學分類系統(tǒng)研究[J].中國中藥雜志,2019,44(17):3662-3671.

    Study on Intestinal Permeability of Isoflavones inL. Based onSingle Pass Intestinal Perfusion Model

    LUO Liyu1, WU Hongwei2, ZHAO Haiyu2, GAO Wenyuan1

    To study the isoflavone intestinal absorption components and intestinal permeability of water extracts ofL.; To explore the corresponding mechanism.An ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) method was adopted. A quantitative analysis method for the isoflavone components of isoflavoues daidzein, daidzin, genistein, mullein isoflavone glucoside, formononetin, ononin in the intestinal perfusate of water extracts ofL. was established. In situ single-pass intestinal perfusion model was used to study the intestinal permeability of the six isoflavones in the water extracts ofL. in different small intestine segments (duodenum, jejunum, and ileum). The intestinal penetration characteristics of formononetin and ononin at different concentrations were studied.The UPLC-MS/MS quantitative analysis method of 6 isoflavones in intestinal perfusate ofL. was established, which met the methodological requirements.The effective permeability coefficient (P) of the components from the water extracts were all greater than 5×10-5cm/s. Of the six isoflavones, the maximum value ofPwas formononetin (P=3.20, duodenum), followed with genistein (P=2.19, jejunum). For the different intestinal segments, thePand absorption rate constant (Ka) of the components were different. Daidzein and formononetin had the maximumPat the duodenum. The other four components had the maximumPat the jejunum. The results indicated that the best effective absorption locations for the isoflavones in the water extracts were the duodenum and jejunum. There was no statistical significance inPand Ka (>0.05) for formononetin and ononin in different concentrations, and the absorption curve was approximately linear. Therefore, the absorption mechanisms of formononetin and ononin were both passive diffusion.This study has preliminarily clarified the intestinal permeability and absorption mechanism of isoflavones in the water extracts ofL. The results could provide a contribution for quality control component screening, formulation development and clinical rational medication.

    single-pass intestinal perfusion model; permeability;L.; isoflavones; formononetin; ononin

    R284.1;R285.5

    A

    1005-5304(2020)11-0089-07

    10.19879/j.cnki.1005-5304.202003739

    高文遠,E-mail:pharmgao@tju.edu.cn

    (2020-03-28)

    (2020-05-19;編輯:陳靜)

    猜你喜歡
    芒柄腸段花素
    利用近紅外-吲哚菁綠成像系統(tǒng)判斷急性腸缺血模型缺血腸段的實驗研究
    TLR4介導克羅恩病不同病變部位淋巴歸巢水平的差別
    燈盞花素分散片溶出度檢測方法的改進
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:28
    燈盞花素注射液對腹腔鏡全子宮切除術患者圍術期應激反應及炎癥反應的影響
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:19:08
    芒柄花素平衡溶解度和油水分配系數的測定
    芒柄花素的現(xiàn)代研究進展
    芒柄花素抑制乳腺癌細胞HIF-1α/CXCR4信號以及細胞增殖和遷移
    槲皮素腸溶PLGA納米粒各腸段的吸收特性研究
    制劑新技術在燈盞花素研發(fā)中的應用
    芒柄花素對兔離體腸平滑肌舒張作用的影響
    日韩亚洲欧美综合| 国产成人a区在线观看| 高清在线视频一区二区三区| 免费看不卡的av| 99视频精品全部免费 在线| 2022亚洲国产成人精品| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产黄片视频在线免费观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 午夜福利网站1000一区二区三区| 99热这里只有精品一区| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | av女优亚洲男人天堂| 一区二区三区免费毛片| 大香蕉97超碰在线| 超碰97精品在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久视频综合| 午夜老司机福利剧场| 啦啦啦啦在线视频资源| 麻豆成人av视频| 欧美三级亚洲精品| 十分钟在线观看高清视频www | 中文字幕精品免费在线观看视频 | 久久久久视频综合| 色婷婷久久久亚洲欧美| 观看免费一级毛片| 久久女婷五月综合色啪小说| 日韩伦理黄色片| 97在线视频观看| 天天躁日日操中文字幕| 内地一区二区视频在线| 免费看光身美女| 中文字幕av成人在线电影| 最黄视频免费看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 又大又黄又爽视频免费| 中国国产av一级| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产成人a区在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 中国三级夫妇交换| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 中文在线观看免费www的网站| 九草在线视频观看| 观看av在线不卡| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 51国产日韩欧美| 欧美97在线视频| 99视频精品全部免费 在线| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲不卡免费看| 亚洲最大成人中文| 美女主播在线视频| 嫩草影院入口| 国产一区有黄有色的免费视频| 九九在线视频观看精品| 亚洲精品色激情综合| 日韩免费高清中文字幕av| 极品少妇高潮喷水抽搐| av天堂中文字幕网| 十分钟在线观看高清视频www | 日韩一区二区三区影片| 久久久久久久久久成人| 免费播放大片免费观看视频在线观看| videossex国产| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲,欧美,日韩| 婷婷色麻豆天堂久久| 多毛熟女@视频| 久久久久精品性色| 蜜桃在线观看..| 国产乱人视频| 国产精品女同一区二区软件| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品99久久久久久久久| 国产精品无大码| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 日日撸夜夜添| av不卡在线播放| 一级爰片在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲精品国产成人久久av| 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品一二三| 黄色日韩在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产视频内射| 久久久久精品性色| 免费在线观看成人毛片| 国产av国产精品国产| 一级a做视频免费观看| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲伊人久久精品综合| 一区二区三区免费毛片| 精品视频人人做人人爽| 街头女战士在线观看网站| 久久热精品热| 亚洲欧洲日产国产| 韩国av在线不卡| 老女人水多毛片| 亚洲av二区三区四区| 国产伦精品一区二区三区视频9| av国产精品久久久久影院| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产午夜精品一二区理论片| 街头女战士在线观看网站| 天堂8中文在线网| 久久精品久久久久久久性| 国产久久久一区二区三区| 又爽又黄a免费视频| 妹子高潮喷水视频| 美女视频免费永久观看网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲不卡免费看| h视频一区二区三区| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美日韩综合久久久久久| 欧美日韩视频精品一区| 各种免费的搞黄视频| 久久青草综合色| 日本一二三区视频观看| 久热久热在线精品观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 蜜桃在线观看..| 男女免费视频国产| 99热国产这里只有精品6| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| av专区在线播放| 赤兔流量卡办理| 一级片'在线观看视频| 青青草视频在线视频观看| 午夜老司机福利剧场| 久久久久久人妻| av视频免费观看在线观看| 另类亚洲欧美激情| 女人久久www免费人成看片| 熟女电影av网| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 只有这里有精品99| 最近最新中文字幕免费大全7| 视频中文字幕在线观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产亚洲精品久久久com| 秋霞在线观看毛片| 欧美极品一区二区三区四区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜福利在线在线| 亚洲av.av天堂| 日本av手机在线免费观看| 亚洲国产色片| 国产深夜福利视频在线观看| 人人妻人人看人人澡| 夫妻性生交免费视频一级片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 各种免费的搞黄视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产视频内射| 精品一品国产午夜福利视频| 内射极品少妇av片p| 精品人妻偷拍中文字幕| 精品久久久久久电影网| 欧美日韩视频精品一区| www.色视频.com| 亚洲精品国产色婷婷电影| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 嘟嘟电影网在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国产美女午夜福利| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 在线观看免费视频网站a站| 成人免费观看视频高清| 一本一本综合久久| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲欧美一区二区三区国产| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 在线天堂最新版资源| freevideosex欧美| 2018国产大陆天天弄谢| 卡戴珊不雅视频在线播放| 色视频www国产| 在线观看人妻少妇| 99re6热这里在线精品视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲真实伦在线观看| 国产精品三级大全| 精品久久久久久久末码| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 97超碰精品成人国产| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲怡红院男人天堂| 国产精品久久久久久av不卡| 超碰97精品在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产精品一区二区在线观看99| 日本与韩国留学比较| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| av不卡在线播放| 亚洲图色成人| 赤兔流量卡办理| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 成年av动漫网址| 蜜桃在线观看..| 男女边摸边吃奶| 久久久国产一区二区| 一本久久精品| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 网址你懂的国产日韩在线| 这个男人来自地球电影免费观看 | 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲精品自拍成人| 精品久久国产蜜桃| 一级毛片我不卡| 晚上一个人看的免费电影| 精品一品国产午夜福利视频| 午夜福利高清视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 在现免费观看毛片| videos熟女内射| 亚洲av二区三区四区| 久久久久精品久久久久真实原创| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 51国产日韩欧美| 午夜免费男女啪啪视频观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产成人免费观看mmmm| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产91av在线免费观看| 91狼人影院| 久久热精品热| 97超视频在线观看视频| av卡一久久| 熟妇人妻不卡中文字幕| 欧美激情国产日韩精品一区| 永久网站在线| 日韩三级伦理在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲国产日韩一区二区| 婷婷色综合大香蕉| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 久久精品人妻少妇| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 又爽又黄a免费视频| 国产男女超爽视频在线观看| 又大又黄又爽视频免费| 午夜免费鲁丝| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲最大成人中文| 亚洲美女视频黄频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 18禁动态无遮挡网站| 国产淫语在线视频| 成人特级av手机在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 久久99热这里只有精品18| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲人成网站在线播| 日韩国内少妇激情av| 亚洲精品亚洲一区二区| 少妇丰满av| 一级片'在线观看视频| 人妻系列 视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费观看a级毛片全部| 久久青草综合色| 九九爱精品视频在线观看| 精品酒店卫生间| 最后的刺客免费高清国语| 最后的刺客免费高清国语| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 黄色日韩在线| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产高清有码在线观看视频| 晚上一个人看的免费电影| 国产一区二区三区综合在线观看 | 日韩制服骚丝袜av| 色婷婷久久久亚洲欧美| 内地一区二区视频在线| 亚洲国产高清在线一区二区三| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久av网站| 婷婷色综合大香蕉| 日韩免费高清中文字幕av| 精品一品国产午夜福利视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 热re99久久精品国产66热6| 免费看光身美女| 22中文网久久字幕| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 精品久久久久久久末码| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 人体艺术视频欧美日本| 人妻夜夜爽99麻豆av| 一级片'在线观看视频| 天天躁日日操中文字幕| 中文字幕免费在线视频6| 黄色一级大片看看| 七月丁香在线播放| 中国三级夫妇交换| 99久久综合免费| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 91狼人影院| 精品人妻视频免费看| 校园人妻丝袜中文字幕| 婷婷色av中文字幕| 亚洲欧美日韩东京热| 免费观看a级毛片全部| 男男h啪啪无遮挡| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产精品av视频在线免费观看| 久久 成人 亚洲| av线在线观看网站| 亚洲av日韩在线播放| 丰满乱子伦码专区| 三级国产精品片| 青春草视频在线免费观看| av.在线天堂| 高清日韩中文字幕在线| 好男人视频免费观看在线| 成人二区视频| 国产伦在线观看视频一区| 在线看a的网站| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 在现免费观看毛片| av在线老鸭窝| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲美女视频黄频| 日韩欧美精品免费久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 夫妻性生交免费视频一级片| 十分钟在线观看高清视频www | 午夜福利在线观看免费完整高清在| 少妇被粗大猛烈的视频| av卡一久久| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产人妻一区二区三区在| 在线观看一区二区三区激情| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩成人伦理影院| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 中文在线观看免费www的网站| 午夜福利在线在线| 国产成人免费无遮挡视频| 精品久久久噜噜| 久久热精品热| av卡一久久| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲熟女精品中文字幕| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 99re6热这里在线精品视频| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 亚洲欧美成人精品一区二区| 中文天堂在线官网| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 日日啪夜夜爽| 日韩av不卡免费在线播放| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲成人手机| 免费看av在线观看网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产视频内射| 成人综合一区亚洲| 插逼视频在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 一本一本综合久久| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 99久久人妻综合| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产高清三级在线| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 日韩av在线免费看完整版不卡| av国产精品久久久久影院| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日日啪夜夜撸| 99久久综合免费| 免费人成在线观看视频色| 黄片wwwwww| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 18+在线观看网站| 一区在线观看完整版| 色婷婷久久久亚洲欧美| 99国产精品免费福利视频| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲av日韩在线播放| 日韩大片免费观看网站| 少妇的逼好多水| 国产男女内射视频| 亚洲内射少妇av| 久久久久精品性色| 日韩电影二区| 久久久久久人妻| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产 精品1| 日日啪夜夜爽| 99热网站在线观看| 国产高清国产精品国产三级 | 啦啦啦视频在线资源免费观看| 高清不卡的av网站| 精品久久久噜噜| 国产爱豆传媒在线观看| 在线观看人妻少妇| 欧美日韩视频精品一区| 综合色丁香网| 国产在线一区二区三区精| 熟女人妻精品中文字幕| 国产精品一二三区在线看| 丝瓜视频免费看黄片| 黄色配什么色好看| 国产av码专区亚洲av| av在线蜜桃| 国产男女内射视频| 美女福利国产在线 | 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 少妇人妻 视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产精品一区二区在线不卡| 乱系列少妇在线播放| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 秋霞在线观看毛片| 中文字幕亚洲精品专区| 在线天堂最新版资源| 精品久久国产蜜桃| 成人综合一区亚洲| 亚洲真实伦在线观看| 毛片女人毛片| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产精品熟女久久久久浪| 久久毛片免费看一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 我的老师免费观看完整版| 日日撸夜夜添| 色视频www国产| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲欧美精品自产自拍| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产亚洲一区二区精品| 最近中文字幕2019免费版| 综合色丁香网| 韩国av在线不卡| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产爱豆传媒在线观看| 插逼视频在线观看| av一本久久久久| 成年女人在线观看亚洲视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 一区在线观看完整版| 视频中文字幕在线观看| 99热这里只有精品一区| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲综合色惰| 国产精品99久久99久久久不卡 | 欧美成人a在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 人妻夜夜爽99麻豆av| 我要看日韩黄色一级片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 免费观看在线日韩| 精品久久久久久久末码| 最近最新中文字幕大全电影3| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 男女国产视频网站| 在现免费观看毛片| 女人久久www免费人成看片| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 啦啦啦在线观看免费高清www| 日本黄色片子视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 日日啪夜夜撸| 嫩草影院新地址| 亚洲人成网站在线观看播放| 国内揄拍国产精品人妻在线| 韩国av在线不卡| 欧美最新免费一区二区三区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费黄网站久久成人精品| 日本与韩国留学比较| 视频中文字幕在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 精品一品国产午夜福利视频| 国产高清不卡午夜福利| 久久ye,这里只有精品| 51国产日韩欧美| 久久女婷五月综合色啪小说| 男女边吃奶边做爰视频| tube8黄色片| 亚洲精品aⅴ在线观看| 在线观看国产h片| 女人十人毛片免费观看3o分钟| av在线app专区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲三级黄色毛片| 高清日韩中文字幕在线| 欧美精品亚洲一区二区| 久久久久久久久久久免费av| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日韩一本色道免费dvd| 大片免费播放器 马上看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 精品国产三级普通话版| 视频区图区小说| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品欧美亚洲77777| 久久6这里有精品| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 一级片'在线观看视频| 国产 精品1| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 国产乱人偷精品视频| 女性生殖器流出的白浆| 少妇人妻久久综合中文| 老司机影院成人| 亚洲中文av在线| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 熟女人妻精品中文字幕| 麻豆成人av视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产爽快片一区二区三区| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲av福利一区| 欧美 日韩 精品 国产| 在线观看一区二区三区| 最近2019中文字幕mv第一页| 日韩一本色道免费dvd| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 高清毛片免费看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 夫妻午夜视频| 人妻少妇偷人精品九色| 国产爱豆传媒在线观看| 国内精品宾馆在线| 精品少妇黑人巨大在线播放| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久久久久久国产电影| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲av.av天堂| 亚洲图色成人| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 99热这里只有是精品50| 搡女人真爽免费视频火全软件| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 一区二区av电影网| 韩国av在线不卡| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 有码 亚洲区| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲精品国产成人久久av| 另类亚洲欧美激情| 久久国产乱子免费精品| 美女福利国产在线 | 欧美+日韩+精品| 九色成人免费人妻av| 麻豆成人av视频| 男男h啪啪无遮挡| 欧美最新免费一区二区三区| 在现免费观看毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | av播播在线观看一区| 一区二区av电影网| 秋霞伦理黄片| 搡老乐熟女国产| 国产一区二区三区综合在线观看 | av福利片在线观看| av不卡在线播放| 亚洲欧美成人精品一区二区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产成人精品一,二区| 又大又黄又爽视频免费| 久久久a久久爽久久v久久| 久久久成人免费电影| 国产高清三级在线| 夫妻午夜视频|