LSP1基因單核苷酸多態(tài)性與乳癌臨床病理特征關(guān)系

李睿 李革 張司敏 劉溪 蘇紅梅

[摘要] 目的 探討淋巴細(xì)胞特異蛋白1（LSP1）致病基因位點(diǎn)rs3817198多態(tài)性與乳癌臨床病理特征的相關(guān)性，為乳癌的診療提供新線索。方法 對(duì)105例乳癌病人及382例體檢健康者LSP1 rs3817198位點(diǎn)基因型進(jìn)行檢測(cè)，分析乳癌臨床病理參數(shù)與基因型的相關(guān)性;Logistic回歸方法分析基因位點(diǎn)與乳癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。結(jié)果 乳癌組的初潮年齡小于健康對(duì)照組（t=5.291，P<0.05），無(wú)母乳喂養(yǎng)史、無(wú)生育史、腫瘤家族史與乳癌發(fā)病相關(guān)（χ2=3.930～7.265，P<0.05）。乳癌組與對(duì)照組LSP1 rs3817198位點(diǎn)的基因型分布差異有顯著性（χ2=8.100，P<0.05）。Logistic回歸分析顯示，LSP1 rs3817198位點(diǎn)TC、CC基因型增加乳癌的發(fā)病危險(xiǎn)性（TC基因型：OR=2.017，95%CI=0.910～4.471，P<0.05;CC基因型：OR=2.684，95%CI=1.318～5.463，P<0.05）;絕經(jīng)、有哺乳史降低了乳癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)（絕經(jīng)：OR=0.998，95%CI=0.998～0.999，P<0.05;有哺乳史：OR=0.064，95%CI=0.010～0.408，P<0.05），而有腫瘤家族史及LSP1基因rs3817198位點(diǎn)TC、CC基因型增加了乳癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)（腫瘤家族史：OR=2.998，95%CI=1.456～6.172，P<0.05;CC+TC基因型：OR=3.051，95%CI=1.185～7.855，P<0.05）?；蛐蚑C、CC乳癌病人的孕激素受體陰性率顯著高于基因型TT病人（χ2=5.970，P<0.05）。結(jié)論LSP1 rs3817198位點(diǎn)基因型TC、CC可能與乳癌預(yù)后不良有關(guān)，LSP1 rs3817198位點(diǎn)基因型可作為檢測(cè)婦女乳癌易感性的生物標(biāo)志物。

[關(guān)鍵詞] 淋巴細(xì)胞特異蛋白1;多態(tài)性，單核苷酸;乳房腫瘤;病理學(xué)，臨床

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.9 ?[文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A ?[文章編號(hào)] 2096-5532（2020）06-0719-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2020.56.174 [開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）]

[網(wǎng)絡(luò)出版] https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20201016.1124.001.html;

[ABSTRACT] Objective To investigate the association of the polymorphism of the pathogenic gene locus rs3817198 of lymphocyte specific protein 1 （LSP1） with the clinicopathological features of breast cancer， and to provide new clues for the diagnosis and treatment of breast cancer. ?Methods The genotype of LSP1 rs3817198 locus was determined for 105 breast cancer patients and 382 healthy persons who underwent physical examination， and the association between clinicopathological parameters of breast cancer and genotype was analyzed. A Logistic regression analysis was used to investigate the association between this gene locus and the risk of breast cancer. ?Results The breast cancer group had a significantly younger age of menarche than the healthy control group （t=5.291，P<0.05）， and no history of breastfeeding， no history of childbirth， and a family history of tumor were associated with breast cancer （χ2=3.930-7.265，P<0.05）. There was a difference in the genotype distribution of LSP1 rs3817198 between the breast cancer group and the healthy control group （χ2=8.100，P<0.05）. The Logistic regression analysis showed that TC and CC genotypes of the LSP1 gene rs3817198 increased the risk of breast cancer （TC genotype： OR=2.017，95%CI=0.910-4.471，P<0.05; CC genotype： OR=2.684，95%CI=1.318-5.463，P<0.05）; menopause （OR=0.998，95%CI=0.998-0.999，P<0.05） and a history of breastfeeding （OR=0.064，95%CI=0.010-0.408） reduced the risk of breast cancer; a family history of tumor （OR=2.998，95%CI=1.456-6.172，P<0.05） and TC+CC genotype of the LSP1 gene rs3817198 （OR=3.051，95%CI=1.185-7.855，P<0.05） increased the risk of breast cancer. The breast cancer patients with TC and CC genotypes had a significantly higher negative rate of progesterone receptor than those with TT genotype （χ2=5.970，P<0.05）. ?Conclusion The TC and CC genotypes of the LSP1 gene rs3817198 may be associated with the poor prognosis of breast cancer， and the genotype of the LSP1 gene rs3817198 can be used as an important biomarker to detect womens susceptibility to breast cancer.

[KEY WORDS] lymphocyte specific protein 1; polymorphism， single nucleotide; breast neoplasms; pathology， clinical

乳癌為女性最常見(jiàn)惡性腫瘤之一，近年來(lái)其發(fā)病率逐年上升，居女性常見(jiàn)惡性腫瘤發(fā)病之首[1]。有研究顯示，2015年我國(guó)女性乳癌新發(fā)病例高達(dá)26.86萬(wàn)，死亡6.95萬(wàn)[2]，總發(fā)病數(shù)僅次于美國(guó)[3-4]。目前，乳癌的病因尚不明確，其發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多步驟過(guò)程，受多種因素的影響。有研究顯示，淋巴細(xì)胞特異蛋白1（LSP1）基因?yàn)槿榘┮赘行哉嚓P(guān)基因，與正常乳房組織的生長(zhǎng)、退化、纖維化以及乳房密度等有關(guān)[5-6]。本研究分析LSP1基因位點(diǎn)rs3817198單核苷酸多態(tài)性（SNP）與乳癌臨床病理特征的相關(guān)性，為乳癌的診療提供線索。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年6月—2018年1月于青島市市立醫(yī)院就診的乳癌病人105例（乳癌組），均為女性，年齡40～73歲，平均（51.28±11.29）歲。以同期年齡與其匹配的體檢健康者382例作為對(duì)照組。采集兩組研究對(duì)象血液樣本，收集兩組病人年齡、家族史等一般資料及乳癌組病人術(shù)后病理資料。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查通過(guò)，所有參與者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 LSP1 rs3817198位點(diǎn)基因型檢測(cè)

根據(jù)GenBank dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)LSP1的SNP位點(diǎn)rs3817198設(shè)計(jì)引物和TaqMan探針進(jìn)行基因位點(diǎn)檢測(cè)，其序列見(jiàn)表1。PCR反應(yīng)體積為25.0 μL，內(nèi)含：DNA模板50 ng，2×TaqMan Universal PCR Master Mix 10.0 μL（美國(guó)ABI公司），SNP位點(diǎn)PCR引物各0.5 μL，TaqMan探針各0.5 μL。反應(yīng)在PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)BioRad公司）中進(jìn)行。擴(kuò)增參數(shù)：95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃變性15 s，63 ℃退火1 min，共35個(gè)循環(huán)。用不同的熒光報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記的TaqMan探針?lè)謩e與野生型和突變型基因雜交，結(jié)果由隨機(jī)軟件自動(dòng)判讀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用±s表示，數(shù)據(jù)間比較采用方差分析和秩和檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic回歸模型進(jìn)行單因素分析，采用非條件邏輯回歸計(jì)算相對(duì)危險(xiǎn)度的近似估計(jì)值優(yōu)勢(shì)比（OR）估計(jì)相關(guān)因素與乳癌發(fā)病的關(guān)聯(lián)度。

2 結(jié) ?果

2.1 兩組一般資料比較

乳癌組初潮年齡低于對(duì)照組，無(wú)母乳喂養(yǎng)史、未生育、有腫瘤家族史者占比高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.291，χ2=3.930～7.265，P<0.05）;兩組年齡、絕經(jīng)年齡、流產(chǎn)史等差異無(wú)顯著意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

2.2 LSP1 rs3817198位點(diǎn)基因型與乳癌關(guān)系

乳癌組與對(duì)照組LSP1 rs3817198位點(diǎn)的基因型分布差異有顯著性（χ2=8.100，P<0.05）。Logistic回歸分析顯示，LSP1 rs3817198位點(diǎn)TC、CC基因型增加乳癌的發(fā)病危險(xiǎn)性（TC基因型：OR=2.017，95%CI=0.910～4.471，P<0.05;CC基因型：OR=2.684，95%CI=1.318～5.463，P<0.05）。見(jiàn)表3、4。

2.3 LSP1 rs3817198位點(diǎn)基因型與乳癌臨床病理參數(shù)關(guān)系

LSP1基因rs3817198位點(diǎn)基因型與乳癌病人的孕激素受體（PR）狀態(tài)顯著相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.970，P<0.05），而與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、雌激素受體（ER）狀態(tài)、乳癌分子分型等無(wú)相關(guān)性 （P>0.05）。見(jiàn)表5。

2.4 乳癌致病危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析

非條件Logistic回歸分析顯示，絕經(jīng)狀態(tài)、有哺乳史、腫瘤家族史、LSP1 rs3817198位點(diǎn)基因型等與乳癌發(fā)病相關(guān)，其中絕經(jīng)、有哺乳史降低了乳癌患病風(fēng)險(xiǎn)（絕經(jīng)：OR=0.998，95%CI=0.998～0.999，P<0.05;有哺乳史：OR=0.064，95%CI=0.010～0.408，P<0.05），而有腫瘤家族史以及LSP1基因rs3817198位點(diǎn)TC、CC基因型增加了乳癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)（腫瘤家族史：OR=2.998，95%CI=1.456～6.172，P<0.05;CC+TC基因型：OR=3.051，95%CI=1.185～7.855，P<0.05）。見(jiàn)表6。

3 討 ?論

乳癌嚴(yán)重危害女性的健康，其發(fā)生、發(fā)展受多種因素影響，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，可能與基因和環(huán)境密切相關(guān)。個(gè)體因環(huán)境刺激產(chǎn)生的生理反應(yīng)可被多種遺傳變異調(diào)節(jié)。近年來(lái)研究表明，一小段基因變異可引起無(wú)數(shù)表型，從而在一定環(huán)境下影響疾病的易感性。SNP主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸變異所引起的DNA序列多態(tài)性，其在人群中的發(fā)生頻率大于1%，包括單堿基的轉(zhuǎn)換、顛換，它是人類(lèi)可遺傳的變異中最常見(jiàn)的一種[7]。2007年，EASTON等[5]通過(guò)全基因組研究首次發(fā)現(xiàn)，位于LSP1基因的第10內(nèi)含子rs3817198位點(diǎn)與乳癌的發(fā)生相關(guān)[8]。LSP1是在造血細(xì)胞系和內(nèi)皮細(xì)胞中特異表達(dá)的一種與微絲結(jié)合的骨架蛋白。LSP1基因位于11號(hào)染色體，編碼淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，同時(shí)調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、纖維蛋白原基質(zhì)蛋白的黏附以及穿越內(nèi)皮細(xì)胞層等[9]。國(guó)內(nèi)對(duì)此基因的研究較少。本研究結(jié)果顯示，乳癌組LSP1基因rs3817198位點(diǎn)的基因型分布與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其基因型CC、TC可顯著增加乳癌的患病風(fēng)險(xiǎn)。

本文研究結(jié)果顯示，哺乳時(shí)間長(zhǎng)、初潮年齡晚為乳癌的保護(hù)因素，可能與經(jīng)產(chǎn)婦的乳房組織的增殖減弱、孕期激素水平的改變有關(guān)[10-11];而無(wú)生育史、月經(jīng)初潮年齡早與乳癌的發(fā)病有關(guān)，其作用機(jī)制可能與機(jī)體長(zhǎng)時(shí)間處于較高水平性激素的環(huán)境有關(guān)，這與多個(gè)流行病學(xué)研究結(jié)果一致[12-14]。本研究未發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)年齡與乳癌的發(fā)病危險(xiǎn)有關(guān)。乳癌的發(fā)病受遺傳、環(huán)境、生活方式等的影響，而這些因素在不同地區(qū)存在差異，這可能是導(dǎo)致國(guó)內(nèi)外甚至不同地區(qū)的研究結(jié)果不完全相同的原因之一[2，15]。本文非條件Logistic回歸分析顯示，絕經(jīng)狀態(tài)、哺乳史、腫瘤家族史、LSP1基因rs3817198位點(diǎn)CC+TC基因型與乳癌發(fā)病相關(guān)，其中絕經(jīng)、有哺乳史降低了乳癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，而有腫瘤家族史、LSP1 CC+TC基因型為發(fā)生乳癌的危險(xiǎn)因素。

本文LSP1基因rs3817198位點(diǎn)基因型與乳癌臨床病理相關(guān)性研究結(jié)果顯示，基因型TC+CC的PR陰性率顯著高于TT基因型者，而兩組ER狀態(tài)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與ER、PR等在乳癌原發(fā)腫瘤與復(fù)發(fā)腫瘤組織間表達(dá)存在差異有關(guān)，提示我們?cè)谶M(jìn)一步研究中需限定研究對(duì)象條件[16-17]。本文結(jié)果顯示，LSP1 rs3817198位點(diǎn)基因多態(tài)性與PR陰性有關(guān)，而PR陰性的乳癌病人常預(yù)后不良[18-20]，提示LSP1基因rs3817198位點(diǎn)基因型TC+CC可能與預(yù)后不良有關(guān);而LSP1 rs3817198位點(diǎn)基因多態(tài)性與乳癌分子分型無(wú)顯著相關(guān)性，分析原因可能是不同突變基因?qū)Σ煌?lèi)型、不同階段的乳癌的作用并不一致[21-23]。此外，本研究存在局限性，即選取的乳癌組樣本數(shù)量相對(duì)較少，結(jié)果存在一定的偏倚，下一步研究需增加樣本量，進(jìn)一步明確基因突變與乳癌的組織學(xué)分級(jí)、分子分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、5年存活率等的相關(guān)性。

綜上所述，絕經(jīng)、有哺乳史降低了乳癌的患病風(fēng)險(xiǎn)，而有腫瘤家族史及LSP1基因rs3817198位點(diǎn)基因型TC+CC則增加了乳癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，LSP1基因rs3817198位點(diǎn)基因多態(tài)性與PR陰性表達(dá)有關(guān)，LSP1基因rs3817198位點(diǎn)基因型TC+CC可能與預(yù)后不良有關(guān)。LSP1基因rs3817198位點(diǎn)多態(tài)性可能為乳癌發(fā)病的獨(dú)立因素。

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（本文編輯 黃建鄉(xiāng)）