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    臍橙渣發(fā)酵飼料固態(tài)發(fā)酵工藝的研究

    2020-11-14 06:59:56張強(qiáng)金恒吳麗娟謝喬劉瑞平王利華蘇州鐘云平邱光忠
    江西畜牧獸醫(yī)雜志 2020年5期
    關(guān)鍵詞:磷酸二氫鉀發(fā)酵飼料麩皮

    張強(qiáng),金恒,吳麗娟,謝喬,劉瑞平,王利華,蘇州,鐘云平,邱光忠

    (1.贛州市畜牧研究所,江西贛州341401;2.贛州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局)

    贛南作為全國(guó)最大的臍橙主產(chǎn)區(qū),被譽(yù)為“世界橙鄉(xiāng)”,2019年臍橙種植面積達(dá)10.8 萬(wàn)hm2,總產(chǎn)量122 萬(wàn)t,產(chǎn)值129 億元。贛南臍橙深加工后副產(chǎn)物臍橙渣的營(yíng)養(yǎng)較為豐富,其碳水化合物和鈣含量較高,氨基酸組分較全面,粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和磷含量偏低[1]。通過(guò)一定工藝提高臍橙渣的蛋白含量,可提升臍橙渣的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。宋睿等[2]利用響應(yīng)面法研究冰糖橙皮固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)菌體蛋白技術(shù),冰糖橙皮真蛋白含量由19.93%提高到23.85% 。陳卓男[1]、Crosswhite[3]和Noh[4]在育肥豬日糧中分別添加贛南臍橙皮、青貯柑橘渣、發(fā)酵柑橘渣等成分,發(fā)現(xiàn)均能顯著提高肥育豬的飼料轉(zhuǎn)化率。另外,飼料微生物具有維護(hù)畜禽腸道微生態(tài)平衡、增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功能[5~6]。因此,將臍橙渣開發(fā)成益生菌發(fā)酵飼料,即可增加植物蛋白飼料來(lái)源,又能增強(qiáng)動(dòng)物免疫力,促進(jìn)畜牧行業(yè)可持續(xù)健康發(fā)展。目前,關(guān)于臍橙渣制作生物發(fā)酵飼料的文獻(xiàn)報(bào)道較少。本試驗(yàn)研究了麩皮添加比例、菌種、尿素和磷酸二氫鉀對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料的蛋白含量的影響,旨在提高臍橙渣發(fā)酵飼料的真蛋白含量。

    1 材料與方法

    1.1 原料與菌種

    臍橙渣:含水量約12%,購(gòu)置于青島科奈爾農(nóng)產(chǎn)品有限公司;麩皮、尿素:市售;碳酸鈣:天津市北辰方正試劑廠,分析純;磷酸二氫鉀:天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司,分析純。

    安琪高活性干酵母:安琪酵母股份有限公司;乳酸菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌:河南君安生物科技有限公司;產(chǎn)朊假絲酵母:無(wú)錫拜弗德生物科技有限公司;黑曲霉:濟(jì)寧玉園生物科技有限公司;纖維素酶:濟(jì)南天天香有限公司。以上菌種和酶均為細(xì)顆粒或粉末形態(tài)。

    1.2 主要試劑及儀器

    試劑:濃硫酸、硫酸銅、氫氧化鈉:西隴化工股份有限公司,分析純;硫酸鉀:中國(guó)醫(yī)藥上海化學(xué)試劑公司,分析純。

    儀器:LAC-5080S 高壓滅菌鍋:上海博訊儀器儀表有限公司;粉碎機(jī):河北金琦機(jī)械廠;GZX-GF101-3-BS-Ⅱ電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司;FA2004 電子天平:上海上平儀器有限公司;250 mL 凱氏燒瓶:蜀牛;半微量定氮蒸餾器:上海昕滬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;DK-98-Ⅱ電爐:天津市泰斯特儀器有限公司。

    1.3 試驗(yàn)方案

    1.3.1 麩皮添加比例試驗(yàn)。本試驗(yàn)的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配方包含:2%尿素,1%碳酸鈣,36.79%水,0.1%安琪酵母,0.1%乳酸菌,0.01%纖維素酶,以及麩皮和臍橙渣。各試驗(yàn)組配方中麩皮和臍橙渣的含量,見表1。

    表1 麩皮添加比例試驗(yàn)配方中麩皮和臍橙渣的百分含量 %

    1.3.2 不同菌種試驗(yàn)。本試驗(yàn)的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配方包含:54%臍橙渣,6%麩皮,2%尿素,1%碳酸鈣,以及菌種和水。各試驗(yàn)組配方中菌種和水的含量,見表2。

    表2 不同菌種試驗(yàn)配方中菌種的添加種類與百分含量 %

    1.3.3 尿素濃度試驗(yàn)。本試驗(yàn)的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配方包含:54%臍橙渣,6%麩皮,1%碳酸鈣,0.1%安琪酵母,0.1%乳酸菌,0.01%纖維素酶,以及尿素和水。各試驗(yàn)組配方中尿素和水的含量,見表3。

    表3 尿素濃度試驗(yàn)配方中尿素的添加濃度 %

    1.3.4 磷酸二氫鉀濃度試驗(yàn)。本試驗(yàn)的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配方包含:54%臍橙渣,6%麩皮,2%尿素,1%碳酸鈣,0.1%安琪酵母,0.1%乳酸菌,0.01%纖維素酶,以及磷酸二氫鉀和水。各試驗(yàn)組配方中磷酸二氫鉀和水的含量,見表4。

    表4 磷酸二氫鉀濃度試驗(yàn)配方中磷酸二氫鉀的添加濃度 %

    1.4 操作方法

    配制含菌劑的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基,30±1 ℃下發(fā)酵3 d,將發(fā)酵產(chǎn)物烘干(溫度102℃),粉碎,進(jìn)行真蛋白含量測(cè)定,每個(gè)處理3 次平行試驗(yàn)。

    1.5 真蛋白含量測(cè)定

    將樣品加入蒸餾水中煮沸,依次加入過(guò)量的硫酸銅水溶液、氫氧化鈉溶液。在一定堿性條件下,蛋白質(zhì)被氫氧化銅沉淀,用水洗去水溶性含氮物,沉淀部分按粗蛋白的測(cè)定方法測(cè)定其含氮量[7]。

    1.6 數(shù)據(jù)處理

    采用SPSS 17.0 軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示,多重比較采用Duncan 新復(fù)極差法分析,P<0.05 為有顯著性差異。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 麩皮添加比例試驗(yàn)

    本試驗(yàn)研究麩皮添加比例對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物真蛋白含量的影響。

    圖1 麩皮添加比例對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料真蛋白含量的影響

    結(jié)果顯示,發(fā)酵3 d 后,2 組和3 組的真蛋白含量提高較顯著(P<0.05),相對(duì)于自身未發(fā)酵的樣品,真蛋白分別提高了7.69%、11.37%。為更好的了解臍橙渣的發(fā)酵特性,本試驗(yàn)選取輔料配比更低的組合進(jìn)行研究,故優(yōu)化后的麩皮添加比例是6%(臍橙渣添加比例是54%)。

    2.2 不同菌種試驗(yàn)

    本試驗(yàn)將安琪酵母與不同菌種配合來(lái)發(fā)酵臍橙渣飼料,考察不同菌種組合對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物真蛋白含量的影響。

    圖2 不同菌種對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料真蛋白含量的影響

    結(jié)果顯示,6 個(gè)試驗(yàn)組的真蛋白含量,與對(duì)照組相比有顯著提升(P<0.05)。1 組、2 組、3 組、4 組之間的真蛋白含量無(wú)顯著差異(P>0.05);1 組、2 組、3組、4 組的真蛋白含量,比5 組、6 組的更高,且差異顯著(P<0.05)。以上說(shuō)明,1 組、2 組、3 組、4 組是較優(yōu)的菌種或菌種組合。由于乳酸菌具有較多的優(yōu)良特性,如潘小梅等[8]利用乳酸菌產(chǎn)生果膠酶等水解酶,降低柑橘皮渣中抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)含量。且乳酸菌應(yīng)用廣泛,具有保護(hù)動(dòng)物(人體)腸道、提高機(jī)體免疫力等功效,所以采用安琪酵母與乳酸菌雙菌組合的方案對(duì)臍橙渣飼料進(jìn)行微生物發(fā)酵。

    2.3 尿素濃度試驗(yàn)

    本試驗(yàn)以尿素為無(wú)機(jī)氮源,配置成0%、1%、2%和3%等4 種尿素添加比例的臍橙渣發(fā)酵培養(yǎng)基,研究不同濃度的尿素對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料真蛋白含量的影響。

    結(jié)果顯示,發(fā)酵3 d 后,3 個(gè)試驗(yàn)組的真蛋白含量與對(duì)照組相比,均有顯著提升(P<0.05)。其中,2組(添加2%尿素)的真蛋白含量約為7.06%,比對(duì)照組提高了9.29%;3 組(添加3%尿素)的真蛋白含量約為6.97%,比對(duì)照組提高了7.89%。說(shuō)明添加2%尿素是該固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配方中尿素的較優(yōu)添加濃度。

    圖3 尿素濃度對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料真蛋白含量的影響

    2.4 磷酸二氫鉀濃度試驗(yàn)

    本試驗(yàn)研究不同濃度的磷酸二氫鉀對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料真蛋白含量的影響。

    圖4 磷酸二氫鉀濃度對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料真蛋白含量的影響

    結(jié)果顯示,發(fā)酵3 d 后,3 個(gè)試驗(yàn)組的真蛋白含量與對(duì)照組相比,均無(wú)顯著差異(P>0.05),可能原因是輔料麩皮中磷源含量豐富。1 組的真蛋白含量是7.21%,與對(duì)照組(7.03%)相比提高了2.56%;3組的真蛋白含量是6.91%,略低于對(duì)照組。以上試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,在配方中添加0.1%磷酸二氫鉀對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料真蛋白的合成起到一定的促進(jìn)作用。

    進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn),1 組的真蛋白含量(7.21%)與其本身未發(fā)酵的樣品(6.34%)對(duì)比提高了13.72%。經(jīng)過(guò)對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料的固態(tài)發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化,臍橙渣飼料的真蛋白含量獲得較大的提升。

    3 討論

    3.1 麩皮添加比例試驗(yàn)

    6%麩皮是臍橙渣發(fā)酵飼料較優(yōu)的輔料添加比例。如果麩皮添加比例過(guò)高,那么微生物將更多的利用有機(jī)氮源麩皮,由無(wú)機(jī)氮源尿素合成蛋白質(zhì)的量則減少,產(chǎn)物中真蛋白含量提高不顯著。曾柏全等[9]進(jìn)行了類似的研究,采用15%麩皮作為固態(tài)發(fā)酵冰糖臍橙皮渣培養(yǎng)基最優(yōu)輔料濃度。

    3.2 不同菌種試驗(yàn)

    確定采用安琪酵母與乳酸菌雙菌組合方案發(fā)酵臍橙渣飼料。酵母菌是高產(chǎn)蛋白菌種,本試驗(yàn)中乳酸菌與安琪酵母組合發(fā)酵產(chǎn)物真蛋白含量較高,說(shuō)明可用乳酸菌和安琪酵母組合發(fā)酵臍橙渣飼料。在柑橘皮渣文獻(xiàn)中也有菌種組合發(fā)酵的研究,如:程錦等[10]研究確定采用米曲霉/康寧木霉/熱帶假絲酵母三菌組合方案且比例為1:2:2 時(shí),柑橘皮渣發(fā)酵產(chǎn)物中粗蛋白最高。

    3.3 尿素濃度試驗(yàn)

    添加2%尿素可使臍橙渣發(fā)酵飼料的真蛋白含量獲得大幅提升。一般微生物適宜的碳氮比是25:1,本文添加2%尿素培養(yǎng)基的碳氮比接近25:1,較適合微生物生長(zhǎng)。

    3.4 磷酸二氫鉀濃度試驗(yàn)

    0.1%磷酸二氫鉀是臍橙渣發(fā)酵飼料優(yōu)化的磷源添加比例。臍橙渣中磷源含量(0.22%)較低,添加適宜的磷酸二氫鉀能促進(jìn)臍橙渣飼料菌體蛋白合成。類似文獻(xiàn)[11]報(bào)道,10 g 發(fā)酵底物(不包括水含量)中添加0.04 g 磷酸二氫鉀,蛋白質(zhì)產(chǎn)量較高,且添加量在0.04~0.06 g 范圍時(shí),蛋白質(zhì)產(chǎn)量呈負(fù)相關(guān)。

    4 結(jié)論

    通過(guò)研究麩皮添加比例、菌種、尿素和磷酸二氫鉀對(duì)臍橙渣發(fā)酵飼料的蛋白含量的影響,臍橙渣發(fā)酵飼料真蛋白含量達(dá)到7.21%,與發(fā)酵前樣品對(duì)比提高了13.72%。本次試驗(yàn)確定臍橙渣發(fā)酵飼料優(yōu)化后配方的主要成分為:54%臍橙渣,6%麩皮,2%尿素,1%碳酸鈣,0.1%磷酸二氫鉀,0.1%安琪酵母,0.1%乳酸菌,0.01%纖維素酶,36.69%水。

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