小麥蛋白水解物對(duì)腸道上皮細(xì)胞抵御氧化應(yīng)激損傷的作用

岳 穎 嚴(yán) 斌，2 劉麗婭 龐淑婕 周閑容 佟立濤 王麗麗 周素梅*

（1 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 北京100193 2 湖南省農(nóng)林工業(yè)勘察設(shè)計(jì)研究總院 長(zhǎng)沙410007）

近年來，伴隨著人們生活水平的提高及飲食習(xí)慣的變化，腹瀉等腸道疾病的發(fā)生率逐年增加。研究發(fā)現(xiàn)，腹瀉的發(fā)生與腸道屏障受損（腸上皮損傷）密切相關(guān)[1]。Caco-2 細(xì)胞源于人結(jié)腸癌細(xì)胞，結(jié)構(gòu)和功能與人體腸上皮細(xì)胞類似，是研究某些食品或藥品對(duì)腸道屏障保護(hù)作用的經(jīng)典模型[2]。機(jī)體受到外界嚴(yán)重刺激后，體內(nèi)的活性氧等因子劇增，氧化還原體系失衡，導(dǎo)致機(jī)體組織發(fā)生氧化應(yīng)激損傷[3]。腸道是機(jī)體受到外界刺激最為頻繁的器官之一。氧化應(yīng)激能通過多種途徑破壞腸上皮細(xì)胞，導(dǎo)致腸上皮屏障功能障礙。

值得關(guān)注的是，小麥蛋白中富含谷氨酰胺（Gln），而Gln 在維持腸道粘膜結(jié)構(gòu)完整性、促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖中發(fā)揮著不可替代的作用[4]。天然小麥蛋白溶解性和消化吸收性差，通過體外生物酶解技術(shù)可有效提高其生物利用性[5]。以往的研究表明小麥蛋白經(jīng)酶解制備的低聚肽對(duì)腸上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷具有一定的保護(hù)作用[2]。

蛋白水解物被人體攝入后，體內(nèi)的蛋白酶會(huì)對(duì)其進(jìn)一步消化降解，進(jìn)而可能會(huì)影響其生物活性[6]。然而，目前對(duì)于小麥蛋白水解物消化前、后抵御腸上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激能力的變化未見報(bào)道。本文采用H2O2誘導(dǎo)Caco-2 細(xì)胞建立氧化應(yīng)激損傷模型，用富含Gln 的小麥蛋白水解物樣品及其體外模擬消化產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，通過對(duì)細(xì)胞存活率和CAT，GSH，MDA，SOD 等細(xì)胞抗氧化指標(biāo)的檢測(cè)，研究不同小麥蛋白水解物及其體外模擬消化產(chǎn)物對(duì)腸上皮細(xì)胞抵御氧化應(yīng)激損傷的作用效果。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

小麥蛋白 （俗稱谷朊粉），粗蛋白含量為74.10%，安徽瑞福祥食品有限公司。

XS 蛋白酶（食品級(jí)），寧夏夏勝實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司；Protamex 蛋白酶（食品級(jí)）、Alcalase 蛋白酶（食品級(jí)），諾維信（中國(guó)）生物技術(shù)有限公司；Caco-2 細(xì)胞，中科院細(xì)胞庫(kù)；過氧化氫（H2O2）（分析純級(jí)），天津市大茂化學(xué)試劑廠；DMEM/F12 培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）均為分析純級(jí)，美國(guó)Gibco 公司；細(xì)胞培養(yǎng)瓶/板，美國(guó)Corning 公司；超氧化物歧化酶 （SOD） 試劑盒、微量還原型谷胱甘肽（GSH）試劑盒、過氧化氫酶（CAT）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒均為分析純級(jí)，南京建成生物工程研究所；其它試劑均為分析純級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

MCO-20AIC 二氧化碳培養(yǎng)箱、MLS-3750 高壓蒸汽滅菌鍋，日本SONYA 公司；ZHJH-C 超凈工作臺(tái)，上海智城分析儀器制造有限公司；BX50熒光顯微鏡，日本Olympus 公司；CKX41SF 倒置顯微鏡，日本Olympus 公司；BS-2F 振蕩培養(yǎng)箱，常州國(guó)華電器有限公司；BIORAD iMark 酶標(biāo)儀，美國(guó)BIO-RAD 公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 小麥蛋白水解物的制備及組成分析

1）小麥蛋白水解物的制備 錐形瓶中加入蒸餾水，添加蛋白酶后封口，于50 ℃磁力攪拌器內(nèi)預(yù)熱10 min；打開封口并在攪拌過程中緩慢加入一定量的小麥蛋白，20 min 內(nèi)加完，形成一定底物濃度的蛋白溶液；以實(shí)驗(yàn)室前期研究為基礎(chǔ)，采用雙酶及三酶復(fù)合酶解工藝分別制備小麥蛋白水解產(chǎn)物PWGH 和AWGH。具體工藝流程為：PWGH 酶解工藝：XS 蛋白酶（1.00%）+Protamex蛋白酶 （0.25%）；AWGH 酶解工藝：XS 蛋白酶（1.00%）+Protamex 蛋白酶（0.25%）+Alcalase蛋白酶（0.30%）；底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%，加酶量以酶與底物的質(zhì)量比計(jì)。在雙酶酶解時(shí)，XS 和Protamex 同步加入，無需調(diào)節(jié)體系pH 值；三酶酶解時(shí)，先加入XS 和Protamex，在自然pH 值下反應(yīng)3 h 后，調(diào)節(jié)pH 值至8.5 后加入Alcalase。酶解結(jié)束后，100 ℃沸水浴滅酶10 min，冰水浴中迅速冷卻，酶解產(chǎn)物先經(jīng)4 000 r/min 離心10 min 后取上清液凍干，備用。

2）小麥蛋白水解物基本指標(biāo)測(cè)定 短肽含量的測(cè)定參考GB/T 22492-2008《大豆肽粉》中附錄B《肽含量的測(cè)定方法》并略有修改；Gln 含量測(cè)定采用BTI 衍生法[7]。

1.3.2 小麥肽體外模擬消化產(chǎn)物的制備及水解產(chǎn)物分子質(zhì)量分布

1.3.2.1 體外模擬消化流程 樣品溶液（5%，質(zhì)量分?jǐn)?shù)）→1 mol/L HCl 調(diào)節(jié)pH 值至2.0→加胃蛋白酶（2%，質(zhì)量分?jǐn)?shù)） 在37 ℃消化2 h→0.9 mol/L NaHCO3調(diào)節(jié)pH 值至5.3 →1 mol/L NaOH 調(diào)pH 值至7.5→加胰蛋白酶（4%，質(zhì)量分?jǐn)?shù)），在37℃消化2 h→100 ℃滅酶10 min→4 000 r/min 離心10 min→取上清冷凍干燥→消化后樣品。

1.3.2.2 分子質(zhì)量分布測(cè)定 分子質(zhì)量分布測(cè)定采用凝膠過濾色譜法[7]。稱取適量樣品用去離子水溶解，經(jīng)0.45 μm 微孔膜過濾后上凝膠色譜柱，色譜條件如下：

色譜柱：TSKgel G2000 SWXL （300 mm×7.8 mm）；流動(dòng)相：乙腈∶水∶TFA=45∶55∶0.1（體積比）；檢測(cè)：UV 220 nm；流速：0.5 mL/min；柱溫：30 ℃。

以Gly-Gly-Gly （Mw 189 u）、Gly-Gly-Tyr-Arg（Mw 451 u）、桿菌肽（Mw 1 450 u）、抑肽酶（Mw 6 500 u）、細(xì)胞色素C（Mw 12 500 u）為標(biāo)準(zhǔn)品，通過色譜柱后記錄保留時(shí)間，作相對(duì)分子質(zhì)量校正曲線，得到相對(duì)分子質(zhì)量與保留時(shí)間的回歸方程y=-0.2378x+6.9472（R2=0.9866），進(jìn)而預(yù)測(cè)樣品的相對(duì)分子質(zhì)量分布。

1.3.3 細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng) 參考文獻(xiàn)[8-9]方法，并做適當(dāng)調(diào)整。將凍存細(xì)胞于37 ℃恒溫水浴鍋中盡快融化，徹底融化后轉(zhuǎn)移至無菌離心管中，2 000 r/min 離心，棄上清，用含20%胎牛血清的完全培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中并補(bǔ)全液體，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼瓶后換液1次，繼續(xù)培養(yǎng)。

待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底80%左右，棄去舊培養(yǎng)液，用D-Hanks 平衡鹽溶液進(jìn)行漂洗后，加入0.25%的胰蛋白酶消化至細(xì)胞皺縮變圓，棄去胰蛋白酶液，用DMEM/F12 培養(yǎng)基（10%胎牛血清）吹打細(xì)胞制成懸液，并接種至2 個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)全液體，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，消化細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液并調(diào)整密度至5×105個(gè)/mL。將細(xì)胞懸液充分吹打混勻后，接種至24 孔培養(yǎng)板（1 mL/孔）或96 孔培養(yǎng)板（200 μL/孔），置于37 ℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔2 d 換液1 次，直至細(xì)胞相互融合，長(zhǎng)滿單層。

1.3.4 H2O2誘導(dǎo)的Caco-2 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型建立 通過顯微觀察和細(xì)胞存活率測(cè)定，確定模型建立所需要的H2O2濃度。方法如下：

24 孔培養(yǎng)板細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期后，分別添加含不同濃度H2O2的DMEM/F12 培養(yǎng)基（10%胎牛血清）進(jìn)行處理（H2O2添加濃度為0～2 000 μmol/L），置于37 ℃，5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2～8 h，顯微鏡觀察。

96 孔培養(yǎng)板細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期后，分別添加含不同濃度H2O2的DMEM/F12 培養(yǎng)基（10%胎牛血清）進(jìn)行處理（H2O2添加濃度分別0，200，400，800，1 600，3 200 μmol/L）。置于37 ℃，5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h，然后用MTT 法測(cè)定細(xì)胞存活率。

1.3.5 小麥肽對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞存活率的影響接種后細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，加入5 種小麥肽（PWGH，PWGHH，AWGH，WGHH，WGH），添加終質(zhì)量濃度分別為0，0.5，1，2，4 mg/mL 的DMEM/F12 培養(yǎng)基（10%胎牛血清），置于37 ℃，5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，用PBS 洗滌細(xì)胞以去除殘留樣品，然后添加含2 mmol/L H2O2的DMEM/F12培養(yǎng)基（10%胎牛血清）進(jìn)行處理（空白對(duì)照組不添加H2O2），置于37 ℃，5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h，用MTT 法測(cè)定細(xì)胞存活率[9]。

1.3.6 小麥肽對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞抗氧化能力的影響 接種后細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期后，加入5 種小麥肽（PWGH，PWGHH，AWGH，AWGHH，WGH），添加終質(zhì)量濃度分別為0，2 mg/mL 的DMEM/F12培養(yǎng)基（10%胎牛血清），置于37 ℃，5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，用PBS 洗滌細(xì)胞以去除殘留樣品，然后添加含2 mmol/L H2O2的DMEM/F12培養(yǎng)基（10%胎牛血清）進(jìn)行處理（空白對(duì)照組不添加H2O2），置于37 ℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去舊培養(yǎng)液，用PBS 洗滌細(xì)胞以去除殘留的H2O2后，收集細(xì)胞，將細(xì)胞超聲破碎后取得細(xì)胞裂解液。采用南京建成試劑盒對(duì)細(xì)胞裂解液的抗氧化指標(biāo) （CAT，GSH，MDA，SOD 等）進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.7 數(shù)據(jù)處理 采用Microsoft Excel 進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，用SPSS 20.0 和Origin 8.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和作圖，用t 檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。試驗(yàn)重復(fù)次數(shù)n≥3。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶解產(chǎn)物基本指標(biāo)分析

通過雙酶和三酶酶解工藝制備的小麥蛋白酶解產(chǎn)物的相關(guān)指標(biāo)如表1所示。

表1 小麥蛋白水解物基本指標(biāo)Table 1 The basic indexes of wheat gluten hydrolysate

由表1可知，采用三酶酶解工藝所獲得的AWGH 短肽含量高于PWGH。由于反應(yīng)過程中需要調(diào)節(jié)體系的酸堿度以達(dá)到堿性酶較合適的pH值，從而引入了較多的鹽離子，導(dǎo)致灰分增加，蛋白含量有所降低。同時(shí)，由于三酶酶解工藝中小麥蛋白酶解程度加深，Gln 含量有所下降。

2.2 小麥蛋白及其水解產(chǎn)物體外消化前、后分子質(zhì)量分布

采用高效凝膠過濾色譜法檢測(cè)小麥蛋白酶解物體外消化前、后的分子質(zhì)量組成，并與小麥蛋白體外消化產(chǎn)物進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果見表2。

表2 小麥蛋白及其水解產(chǎn)物體外消化前、后分子質(zhì)量分布Table 2 The change of molecular weight distribution of wheat protein and hydrolysatesas affected by digestion in vitro

一般而言，分子質(zhì)量低于1 ku 的肽類稱為低聚肽，主要含有3～6 個(gè)氨基酸?，F(xiàn)代消化理論的觀點(diǎn)認(rèn)為，低聚肽可以被動(dòng)物體消化道直接吸收利用，具有耗能低，轉(zhuǎn)運(yùn)速度快等特點(diǎn)，與游離氨基酸不存在吸收競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)，有效提高了蛋白質(zhì)的吸收利用率[10]。小麥蛋白雙酶酶解產(chǎn)物中低聚肽（Mw 181～1 000 u）含量占總量的60%，三酶復(fù)合酶解工藝相對(duì)于雙酶酶解工藝水解程度深。而2種小麥蛋白水解物中Mw>5 000 u 的部分均低于15%。小麥蛋白直接經(jīng)過體外模擬消化后的產(chǎn)物中低聚肽含量?jī)H為40%，Mw > 5 000 u 的部分約占總量的20%；而2 種小麥蛋白復(fù)合酶解產(chǎn)物經(jīng)過體外完全消化后的產(chǎn)物中低聚肽含量均高達(dá)80%以上，不含Mw>5 000 u 的部分。因此經(jīng)小麥蛋白復(fù)合酶酶解的產(chǎn)物與小麥蛋白相比可能更易被人體消化吸收。

2.3 不同濃度H2O2 處理下Caco-2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

不同濃度H2O2處理Caco-2 細(xì)胞4 h 后，在光鏡下觀察Caco-2 細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，如圖1所示。200～600 μmol/L 的H2O2處理后細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和貼壁能力與空白對(duì)照組相比無明顯的變化；1 000 μmol/L 的H2O2處理后細(xì)胞開始皺縮、變圓，少量細(xì)胞皺縮成團(tuán)；當(dāng)1 600～2 000 μmol/L 的H2O2處理后細(xì)胞皺縮程度明顯加深，甚至出現(xiàn)部分脫落現(xiàn)象，說明在此H2O2濃度處理下，細(xì)胞受到了強(qiáng)烈的氧化損傷。

圖1 Caco-2 細(xì)胞在光鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)（200×）Fig.1 Morphology of Caco-2 cells under light microscope （200×）

2.4 不同濃度H2O2 處理下Caco-2細(xì)胞存活率

不同濃度H2O2處理Caco-2 細(xì)胞4 h 后，采用MTT 法測(cè)定Caco-2 細(xì)胞的存活率，根據(jù)寇氏法計(jì)算得到H2O2處理Caco-2 細(xì)胞4 h 的半致死率濃度為2.07 mmol/L。因此選擇濃度為2 mmol/L 的H2O2作為Caco-2 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型的建立條件。

2.5 小麥蛋白水解物預(yù)處理下氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞的存活率變化

添加不同質(zhì)量濃度的小麥蛋白水解物預(yù)處理細(xì)胞，用H2O2使細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷，測(cè)定每組細(xì)胞的存活率，結(jié)果如圖2所示。添加0.5 mg/mL PWGH 預(yù)處理的細(xì)胞與模型對(duì)照組相比，細(xì)胞存活率顯著提高（P<0.05），添加1 mg/mL 及以上濃度的PWGH 和AWGH 預(yù)處理的細(xì)胞存活率與模型對(duì)照組相比均有極顯著提高（P<0.01），添加1 mg/mL 及以上濃度的PWGHH 和AWGHH 預(yù)處理的細(xì)胞存活率與模型對(duì)照組相比均有顯著提高（P<0.05），而添加WGH 預(yù)處理的細(xì)胞存活率與模型對(duì)照組相比沒有顯著差異。

表3 Caco-2 細(xì)胞存活率測(cè)定結(jié)果Table 3 The results of Caco-2 cells survival rate

圖2 小麥蛋白水解物對(duì)氧化損傷細(xì)胞存活率的影響Fig.2 The effects of wheat gluten hydrolysates on the survival rate of oxidative damage cell

圖3 小麥蛋白水解物對(duì)氧化損傷細(xì)胞CAT 活力的影響Fig.3 The effects of wheat gluten hydrolysates on the CAT activity of oxidative damage cell

2.6 小麥蛋白預(yù)處理下氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞的抗氧化能力

2.6.1 過氧化氫酶活力 過氧化氫酶（CAT）是機(jī)體細(xì)胞內(nèi)主要清除過氧化氫的酶，能使細(xì)胞免除H2O2的侵害，是生物防御體系中的關(guān)鍵酶之一。研究表明[11]，氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞的CAT 活力會(huì)明顯下降。

添加2 mg/mL 的小麥蛋白水解物預(yù)處理細(xì)胞，用H2O2使細(xì)胞發(fā)生氧化損傷，測(cè)定每組細(xì)胞裂解液的CAT 活力，結(jié)果如圖3所示。正常組（Control）細(xì)胞的CAT 活力最高，H2O2處理后細(xì)胞的CAT 活力顯著下降（P<0.01），與模型對(duì)照組相比，添加PWGH 及其體外消化產(chǎn)物（PWGHH）和AWGH，細(xì)胞CAT 活力均顯著提高（P<0.01）。添加AWGH 的體外消化產(chǎn)物（AWGHH）或小麥蛋白體外消化產(chǎn)物（WGH），細(xì)胞的CAT 活力與模型對(duì)照組相比沒有顯著差異。

圖4 小麥蛋白水解物對(duì)氧化損傷細(xì)胞GSH 含量的影響Fig.4 The effects of wheat gluten hydrolysates on the GSH content of oxidative damage cell

2.6.2 GSH 含量 研究表明，利用H2O2使細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷，氧化損傷細(xì)胞內(nèi)的GSH 含量將明顯下降[12]。而Gln 是GSH 合成的前體物質(zhì)[13]，小麥蛋白通過人體腸道后能夠快速被吸收利用釋放Gln，能為細(xì)胞GSH 的合成提供底物來源。每組細(xì)胞裂解液的GSH 含量如圖4所示。正常組細(xì)胞的GSH 含量最高，H2O2處理后細(xì)胞的GSH 含量顯著下降（P<0.01），說明細(xì)胞受到了強(qiáng)烈的外界刺激，加快了細(xì)胞內(nèi)GSH 的消耗，抗氧化能力明顯下降；與模型對(duì)照組相比，添加PWGH 及其體外消化產(chǎn)物PWGHH 和AWGH，GSH 含量顯著提高（P<0.01），添加AWGH 消化產(chǎn)物的細(xì)胞，GSH 含量與模型組相比沒有顯著差異，而添加WGH 細(xì)胞的GSH 含量低于模型對(duì)照組（P<0.01）。

2.6.3 SOD 活力 超氧化物歧化酶（SOD）是機(jī)體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，主要用來清除體內(nèi)的自由基，廣泛分布在各種細(xì)胞內(nèi)[14]，其活力的高低受多種因素影響[15]。每組細(xì)胞裂解液的SOD 活力如圖5所示。正常組細(xì)胞的SOD 活力和H2O2處理組細(xì)胞稍有差異（P<0.05），添加復(fù)合酶酶解產(chǎn)物（PWGH，AWGH） 及二者的體外消化產(chǎn)物（PWGHH、AWGHH）、WGH 的細(xì)胞SOD 活力極顯著下降（P<0.01）。這與文獻(xiàn)[16]報(bào)道相似，說明通過H2O2刺激細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷不會(huì)使胞內(nèi)SOD 活力大幅度下降，小麥蛋白水解物也不能通過提高氧化損傷細(xì)胞的SOD 活力來提高細(xì)胞的抗氧化能力。

2.6.4 MDA 含量 丙二醛（MDA）是機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的重要產(chǎn)物之一，能加劇細(xì)胞的損傷，具有細(xì)胞毒性。研究表明[17]，H2O2使細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激會(huì)造成脂質(zhì)過氧化，從而使細(xì)胞內(nèi)MDA 含量增加。因此，胞內(nèi)MDA 濃度的變化可作為細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷的評(píng)判指標(biāo)之一。每組細(xì)胞裂解液的MDA 含量如圖6所示。H2O2處理后細(xì)胞的MDA 含量極顯著上升（P<0.01），表明細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)發(fā)生了強(qiáng)烈的過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生了大量的MDA，細(xì)胞發(fā)生了嚴(yán)重的氧化損傷；與模型對(duì)照組相比，添加PWGH 和AWGH 及其體外消化產(chǎn)物和小麥蛋白體外消化產(chǎn)物預(yù)處理細(xì)胞的MDA 含量均有明顯下降（P<0.01），表明5 種樣品均能在一定程度上緩解氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞的脂質(zhì)氧化現(xiàn)象，減少細(xì)胞損傷程度。

圖5 小麥蛋白水解物對(duì)氧化損傷細(xì)胞SOD 活力的影響Fig.5 The effects of wheat gluten hydrolysates on the SOD activity of oxidative damage cell

圖6 小麥蛋白水解物對(duì)氧化損傷細(xì)胞MDA 含量的影響Fig.6 The effects of wheat gluten hydrolysates on the MDA content of oxidative damage cell

3 結(jié)論

本研究采用雙酶和三酶對(duì)小麥蛋白進(jìn)行復(fù)合酶水解后，其體外模擬消化產(chǎn)物均能在一定程度上緩解腸上皮細(xì)胞因氧化應(yīng)激損傷導(dǎo)致的存活率降低，減少細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激的損傷程度，且能在一定程度上緩解細(xì)胞因H2O2過量導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷和抗氧化能力降低。研究表明，水解產(chǎn)物經(jīng)模擬消化后其抗氧化功能受到酶制劑種類的影響。小麥蛋白直接經(jīng)體外模擬消化后，其水解產(chǎn)物雖能在一定程度上減少腸上皮細(xì)胞損傷細(xì)胞的脂質(zhì)氧化，但對(duì)損傷細(xì)胞的抗氧化能力和GSH 水平均無顯著影響。