保幼激素類似物對煙蚜繭蜂生長發(fā)育、寄生率和蛻皮相關(guān)酶活性的影響

白晶晶, 顧 鋼, 賴榮泉, 周 挺, 吳曉婷, 陳丹明, 舒 靜

(1.福建農(nóng)林大學植物保護學院, 閩臺作物有害生物生態(tài)防控國家重點實驗室, 福州 350002;2.中國煙草總公司福建省公司, 福州 350003)

煙蚜繭蜂Aphidiusgifuensis屬膜翅目(Hymenoptera)蚜繭蜂科(Aphidiidae)，是煙蚜的一種優(yōu)勢寄生蜂。煙蚜繭蜂對煙蚜控制力極強，已被廣泛用于大田煙草生產(chǎn)中防治煙蚜(舒建超等, 2018)。煙蚜Myzuspersicae屬半翅目(Hemiptera)蚜科(Aphididae)，是煙草上重要的害蟲之一，以其口針刺吸取食植物汁液，并傳播黃瓜花葉病毒(cucumber mosaic virus, CMV)、馬鈴薯Y病毒(potato virus Y, PVY)和煙草蝕紋病毒(tobacco etch virus, TEV)等多種植物病毒，危害十分嚴重(郭興啟等, 2002; 任廣偉和張連濤, 2002; Laietal., 2011, 2017a, 2017b, 2019, 2020; 李曉宇等, 2017)。長期以來，生產(chǎn)上主要使用化學措施防治煙蚜，而化學防治不僅造成煙葉農(nóng)藥殘留，還導致煙蚜產(chǎn)生抗藥性。利用煙蚜繭蜂防治煙蚜，可減少或避免化學農(nóng)藥帶來的農(nóng)藥殘留等問題，提高煙葉安全性。但在煙蚜繭蜂規(guī)?；敝尺^程中，常常出現(xiàn)煙蚜繭蜂羽化不一致、不整齊，以及生產(chǎn)上急需煙蚜繭蜂時數(shù)量不夠等一系列問題，嚴重影響煙蚜繭蜂的規(guī)?；a(chǎn)和煙蚜防控。

保幼激素(juvenile hormone, JH)是由咽側(cè)體分泌的一類倍半萜類化合物，是昆蟲體內(nèi)最重要的激素之一。研究發(fā)現(xiàn)保幼激素可有效調(diào)控昆蟲生長、變態(tài)、滯育、壽命及生殖等多種功能(Wyatt and Davey, 1996; Tuetal., 2005; 尹素芬等, 2009)。關(guān)于保幼激素的種類、生物合成、分解代謝途徑、信號轉(zhuǎn)導等機制已經(jīng)基本闡明(Jindraetal., 2013)。目前，不僅可從多種昆蟲體內(nèi)分離提取不同種類的自然存在的保幼激素，還可通過化學合成途徑人工合成一些與保幼激素具有相同功能的保幼激素類似物(juvenile hormone analogs)(Jindraetal., 2013; Dubrovskyetal., 2014)。研究表明，烷基烯羧酸酯類化合物比天然激素活性更高，對害蟲天敵相對安全，對高等動物毒性極低(徐漢虹, 2016)。與保幼激素相比，保幼激素類似物具有更高的活性并且生產(chǎn)成本更加低廉，因此在防治害蟲的過程中，保幼激素類似物具有更大的優(yōu)勢。烯蟲炔酯、烯蟲酯、烯蟲乙酯等都是人工合成的重要保幼激素類似物。其中，烯蟲炔酯對蚜蟲和小粉蚧有效；烯蟲酯對蚊、蠅幼蟲有極強的殺滅作用，而烯蟲乙酯對鱗翅目、半翅目、膜翅目害蟲都有較好的殺傷效果(Collinsetal., 2014; 徐漢虹, 2016)。周冰峰等(2002)研究發(fā)現(xiàn)用保幼激素類似物ZR-512能有效調(diào)控蜜蜂蜂王體重，使蜜蜂交配時間提前、產(chǎn)卵量增多。但保幼激素類似物對煙蚜繭蜂的生長發(fā)育影響未見報道。因此，本研究采用保幼激素類似物對煙蚜繭蜂生長發(fā)育進行調(diào)控，利用紫外分光光度計法測定煙蚜繭蜂體內(nèi)與蛻皮相關(guān)酶含量、活性變化，篩選出較為安全有效的保幼激素類似物，以獲得相對整齊一致、數(shù)量足的煙蚜繭蜂供生產(chǎn)使用，緩解田間需求與供蜂相脫節(jié)的矛盾，更好服務(wù)于生產(chǎn)實踐，對提高煙蚜繭蜂防治煙蚜及探明其對煙蚜繭蜂生長發(fā)育調(diào)控機制具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料及儀器

煙草品種：烤煙K326。

煙蚜蟲源：采自南平市煙草公司邵武市煙蚜繭蜂繁殖基地，并在室內(nèi)飼養(yǎng)2～3代后進行試驗。

煙蚜繭蜂蟲源：采自南平市煙草公司邵武市煙蚜繭蜂繁殖基地，并在室內(nèi)飼養(yǎng)2～3代后進行試驗。

保幼激素類似物：ZR-512(烯蟲乙酯)(純度97.00%)、ZR-777(烯蟲炔酯)(純度96.80%)、ZR-515(烯蟲酯)(純度98.40%)、苯氧威[(對苯氧乙基)氨基甲酸乙酯](純度99.50%)、保幼激素Ⅲ(2,6-壬二烯酸)(濃度97.00%)(德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司)。

主要試劑和儀器：丙酮(純度99.5%, 西隴科學股份有限公司)、L-多巴(純度98.00%, Sigma公司)、考馬斯亮藍G-250(純度100%，索萊寶公司)、幾丁質(zhì)(純度99%，Sigma公司)。智能人工氣候箱(MRC-250B-LED, 寧波普朗特儀器有限公司)、高速冷凍離心機(CR22, 德國IKA公司)、紫外可見分光光度計(T6新世紀，濟南思卓醫(yī)療機械有限公司)、電子天平(AUY120, 日本SHIMADZU公司)、電熱恒溫水槽(DK-8D, 上海-恒科技有限公司)、PH計校準儀(ST5000，福州邁典生物技術(shù)有限公司)。

1.2 保幼激素類似物處理后煙蚜繭蜂羽化率、成蜂壽命和雌蜂比例的觀測

保幼激素類似物處理采用液浸法，參照王俊雅等(2017)的方法進行。處理組用99.5%丙酮配制成10%丙酮作為溶劑，將保幼激素類似物配制成5 000 ng/μL母液后，用蒸餾水將母液稀釋成5個濃度(5 000, 1 000, 200, 40和8 ng/μL)，對照組中丙酮的濃度與處理組相同，共6個處理。將大小一致、同時形成的30頭煙蚜繭蜂蛹浸入配好的對照或處理液中浸5～6 s，取出并用濾紙吸干，置于有蓋塑料罐(直徑9.3 cm，高8.3 cm)中。每個處理(含對照)均用1個塑料罐，重復3次，共18個塑料罐。在溫度25±1℃，相對濕度70%±5%，光周期14L∶10D的條件下進行試驗。處理后每隔12 h觀察記載煙蚜繭蜂的生長發(fā)育情況，即羽化時間、羽化數(shù)量、雌雄蜂數(shù)量和成蜂壽命等，并根據(jù)下列公式分別計算其羽化率和雌蜂比例。

1.3 保幼激素類似物處理后煙蚜繭蜂寄生率的觀測

在1.2節(jié)試驗基礎(chǔ)上，篩選出3種保幼效果較好的特定濃度激素作為處理。在溫度25±1℃，相對濕度70%±5%，光周期14L∶10D的條件下進行試驗。對照為10%丙酮。將大小一致、同時形成的30頭煙蚜繭蜂蛹浸入配好的對照或處理液中浸5～6 s，取出并用濾紙吸干，置于有蓋塑料罐中。重復3次。待煙蚜繭蜂羽化后，在對照或處理中任意挑選3對雌雄進行交配6 h后，分別放入有煙蚜(大小一致2齡若蚜60頭)的煙株上，讓其寄生。于處理后每隔3 d觀察記載及計算煙蚜繭蜂寄生率。寄生率計算公式如下：

1.4 保幼激素類似物處理后煙蚜繭蜂蛻皮相關(guān)酶活性的測定

在1.2節(jié)試驗基礎(chǔ)上，篩選保幼效果最好(即出蜂較遲且寄生率較高)的一種保幼激素類似物的濃度為統(tǒng)一濃度，比較5種保幼激素類似物及對照處理后煙蚜繭蜂蛹體內(nèi)酶的變化。其中，酚氧化酶和幾丁質(zhì)酶在昆蟲蛻皮中起著重要作用(王梅仙, 2015)。因此，采用紫外分光光度計比色法測定處理后煙蚜繭蜂體內(nèi)酚氧化酶含量和活性以及幾丁質(zhì)酶活性。各處理重復3次，共18次。

1.4.1酚氧化酶的提取、含量與活性測定：酶液制備參照劉守柱(2008)的方法進行。每個處理或?qū)φ帐褂么笮∫恢?、同時形成的煙蚜繭蜂蛹30頭，分別加入0.2 mol/L磷酸緩沖液(pH 6.9)1 mL于2 mL離心管中低溫研磨成均漿液，冰浴下靜置15 min后將勻漿液在4℃條件下8 000 r/min高速冷凍離心機離心30 min。然后，除去溶液液面表層的脂類和色素，取上清液作為酶源備用。

酚氧化酶含量測定參照Bradford(1976)及王永剛等(2013)的方法進行?？捡R斯亮藍G-250作指示劑，用比色法(λ=595 nm)測定酚氧化酶蛋白含量并制定標準曲線。

酚氧化酶活性測定參照Benjamin和Montgomery(1973)及張菊華等(2017)的方法進行。在2 mL的測活體系中，包含終濃度為0.1 mol/L磷酸緩沖液(pH 6.9)，1 mmol/L L-DOPA，加入300 μL酶液，振蕩5 s，于紫外分光光度計475 nm下測定光密度隨時間變化的增長曲線，以緩沖液為參比，連續(xù)測定3 min，每分鐘內(nèi)OD475升高0.001為一個單位，并根據(jù)下列公式計算酚氧化酶活性：

式中，ΔA475: 反應時間內(nèi)吸光度的變化；Vt: 酶液提取液總體積；W: 煙蚜繭蜂質(zhì)量(mg)；Vs: 測定酶液總體積；t: 反應時間(min)。以上各指標測定均重復3次，結(jié)果以平均值±標準誤表示。

1.4.2幾丁質(zhì)酶的提取與活性測定：參照任莉(2008)、趙忠偉等(2012)及李世貴等(2009)的方法進行。每個處理或?qū)φ帐褂么笮∫恢?、同時形成的煙蚜繭蜂蛹30頭，分別加入1 mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液后冰浴研磨5 min。將勻漿液在10 000 r/min 4℃條件下離心10 min后，取上清液在15 000 r/min 4℃條件下再次離心20 min。吸取0.5 mL上清液，加入0.5 mL膠狀幾丁質(zhì)，于37℃下溫浴4 h，然后以8 000 r/min的速度離心5 min使酶解反應停止。再次吸取0.5 mL離心上清液，加入濃度為0.8 mol/L四硼酸鉀溶液(pH 9.1)0.1 mL。搖勻之后，沸水浴中反應3 min，迅速用自來水冷卻至室溫，再加入3 mL制備好的1%對二甲氨基苯甲醛(DMAB)試劑，并在37℃下保溫20 min。之后將反應體系冷卻至室溫。于585 nm處測定吸光度，使用N-乙酰氨基葡萄糖建立標準曲線。在上述酶促反應體系中，1 mL酶液每1 h釋放出1 μmol N-乙酰氨基葡萄糖定義為一個酶活力單位。

1.5 數(shù)據(jù)分析

利用Microsoft Excel 2010軟件記錄、整理數(shù)據(jù)和作圖及SPSS 22.0軟件進行線型回歸分析、方差分析(α=0.05)，結(jié)果用平均值±標準誤(SE)表示，采用單因素方差分析(one-way ANOVA)和多重比較(LSD)進行差異顯著性分析。

2 結(jié)果

2.1 保幼激素類似物對煙蚜繭蜂羽化的影響

不同保幼激素類似物對煙蚜繭蜂羽化的影響如表1所示。從表1可知：與對照組相比，ZR-512顯著延遲煙蚜繭蜂羽化時間。隨著濃度增加，煙蚜繭蜂羽化時間延遲8.00～56.00 h，各濃度處理與對照組間的煙蚜繭蜂羽化時間延遲差異極顯著(F5, 12=5.775,P=0.006)。其中，濃度1 000 ng/μL使羽化時間延遲較長，為56.00 h;濃度200 ng/μL使羽化時間延遲較短，為8.00 h。ZR-777引起的煙蚜繭蜂羽化時間延遲程度居中，除5 000 ng/μL處理中羽化時間與對照組相同外，其他濃度均引起羽化時間延遲8.00～44.00 h，各濃度處理與對照組間的羽化時間延遲差異顯著(F5, 12=3.183,P=0.047)。但其他3種保幼激素類似物對煙蚜繭蜂羽化時間具有提早的效果。保幼激素Ⅲ隨著濃度的增加，煙蚜繭蜂羽化時間提早4.00～24.00 h，但各濃度處理與對照組間的羽化時間提早差異不顯著(F5, 12=2.820,P=0.066)；ZR-515使煙蚜繭蜂羽化時間提早8.00～20.00 h，但各濃度處理與對照間的羽化時間提早差異不顯著(F5, 12=0.500,P=0.771)。苯氧威引起煙蚜繭蜂羽化時間提早24.00～52.00 h，各濃度處理與對照間的羽化時間提早差異顯著(F5, 12=4.128,P=0.021)。

表1 保幼激素類似物對煙蚜繭蜂羽化的影響

此外，在不同濃度ZR-777處理下，煙蚜繭蜂的羽化率有顯著差異(F5, 12=4.376,P=0.017)。在不同濃度ZR-512處理下，煙蚜繭蜂的羽化率無顯著差異(F5, 12=0.895,P=0.514)。在不同濃度ZR-515、保幼激素Ⅲ和苯氧威處理下，煙蚜繭蜂的羽化率有極顯著差異(ZR-515:F5, 12=26.923,P=0.000; 保幼激素Ⅲ:F5, 12=14.687,P=0.000; 苯氧威:F5, 12=51.025,P=0.000)。

因此，引起煙蚜繭蜂羽化時間提早最多的激素是200 ng/μL苯氧威，即比對照組的提早52.00 h。而從煙蚜繭蜂的羽化率和延遲羽化時間等整體上看，200 ng/μL ZR-777和1 000 ng/μL ZR-512處理要比其他試劑處理引起的羽化時間延遲更長，分別比對照組延遲了44.00和56.00 h。

2.2 保幼激素類似物對煙蚜繭蜂成蜂壽命的影響

不同保幼激素類似物對煙蚜繭蜂成蜂壽命的影響如圖1所示。由圖1可得，不同濃度ZR-777, ZR-512, ZR-515和苯氧威處理后，各處理濃度與對照間煙蚜繭蜂成蜂壽命均無顯著差異(P>0.05)；保幼激素Ⅲ處理后，總體上各濃度處理及對照間煙蚜繭蜂成蜂壽命無顯著差異(F5, 11=1.965,P=0.163)，但8和40 ng/μL保幼激素Ⅲ處理與5 000 ng/μL保幼激素Ⅲ處理間煙蚜繭蜂成蜂壽命差異顯著(P<0.05)。對照組煙蚜繭蜂成蜂壽命為32.40 h，200 ng/μL ZR-777處理煙蚜繭蜂后成蜂壽命最長，為41.67 h；200 ng/μL苯氧威處理后其成蜂壽命最短，為24.00 h。

圖1 保幼激素類似物對煙蚜繭蜂成蜂壽命的影響

2.3 保幼激素類似物對煙蚜繭蜂雌蜂比例的影響

不同保幼激素類似物對煙蚜繭蜂雌蜂比例的影響如圖2所示。由圖2可得，在不同濃度ZR-777處理下，煙蚜繭蜂的雌蜂比例有顯著差異(F5，12=4.190,P=0.020)。其中，8, 200和5 000 ng/μL ZR-777處理下，煙蚜繭蜂雌蜂比例與對照組相比無顯著差異(P>0.05)，40和1 000 ng/μL ZR-777處理時，煙蚜繭蜂雌蜂比例與對照組相比顯著降低(P<0.05)。在不同濃度ZR-512處理下，隨著濃度的上升，煙蚜繭蜂雌蜂比例先增加后降低，0～1 000 ng/μL濃度間雌蜂比例無顯著差異(F5, 12=1.263,P=0.341)，但與5 000 ng/μL ZR-512處理時煙蚜繭蜂雌蜂比例差異顯著(P<0.05)。在低濃度ZR-515(8～200 ng/μL)處理下，煙蚜繭蜂的雌蜂比例無顯著差異(F5, 12=1.506,P=0.259)，但1 000與5 000 ng/μL ZR-515處理時煙蚜繭蜂雌蜂比例差異顯著(P<0.05)。在不同濃度保幼激素Ⅲ處理下，但隨著濃度的上升，煙蚜繭蜂雌蜂比例逐漸增加，但8～1 000 ng/μL濃度間雌蜂比例無顯著差異(F5, 12=1.531,P=0.252)，而對照、8 ng/μL保幼激素Ⅲ處理時與5 000 ng/μL保幼激素Ⅲ處理時煙蚜繭蜂雌蜂比例差異顯著(P<0.05)。在不同濃度苯氧威處理下，煙蚜繭蜂的雌蜂比例無顯著差異(F5, 7=0.947,P=0.506)。

圖2 保幼激素類似物對煙蚜繭蜂雌蜂比例的影響

2.4 保幼激素類似物對煙蚜繭蜂寄生率的影響

不同保幼激素類似物對煙蚜繭蜂寄生率的影響如圖3所示。由圖3可得，對照組(10%丙酮處理)煙蚜繭蜂的寄生率為69.57%；與對照相比，5 000 ng/μL ZR-512處理后煙蚜繭蜂寄生率增加了2.64%，1 000 ng/μL ZR-512處理后煙蚜繭蜂的寄生率減少了0.32%，200 ng/μL ZR-777處理后煙蚜繭蜂的寄生率減少了5.88%，但各處理組與對照間的寄生率差異不顯著(F3, 8=0.989,P=0.445)。

圖3 保幼激素類似物對煙蚜繭蜂在煙蚜2齡若蚜上的寄生率的影響

2.5 保幼激素類似物對煙蚜繭蜂蛻皮相關(guān)酶的影響

1 000 ng/μL不同保幼激素類似物對煙蚜繭蜂酚氧化酶蛋白含量和活性及幾丁質(zhì)酶活性的影響如表2所示。采用考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質(zhì)含量，求得標準蛋白曲線為y=9.1729x+0.0282(R2=0.991)，并通過計算以此求得1 000 ng/μL不同保幼激素類似物處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)酚氧化酶蛋白含量和活性，如表2所示。經(jīng)方差分析，1 000 ng/μL不同保幼激素類似物處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)酚氧化酶含量達極顯著差異(F5，12=5.161,P=0.009)，其酚氧化酶活性間的差異也達到極顯著(F5,12=25.893,P=0.001)。由表2可知，1 000 ng/μL 5種不同保幼激素類似物對煙蚜繭蜂蛹內(nèi)酚氧化酶含量和活性均存在不同程度抑制或促進作用。其中，ZR-512對煙蚜繭蜂蛹內(nèi)酚氧化酶含量和活性顯著低于對照組，且有明顯的抑制作用(P<0.01)；保幼激素Ⅲ和苯氧威對煙蚜繭蜂蛹內(nèi)酚氧化酶活性均顯著高于對照組，且有明顯的促進作用(P<0.01)；而ZR-777和ZR-515對煙蚜繭蜂蛹內(nèi)酚氧化酶含量和活性表現(xiàn)為既不促進又不抑制，與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。因此，不同保幼激素類似物處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)酚氧化酶含量大小排序為：苯氧威>保幼激素Ⅲ>ZR-777=CK>ZR-515>ZR-512；酚氧化酶活性由高到低排序為：保幼激素Ⅲ>苯氧威>CK>ZR-515>ZR-777>ZR-512。

采用線性回歸分析方法求得幾丁質(zhì)酶活性的回歸方程為：y=0.0098x+0.023(R2=0.9923)，并通過計算得出1 000 ng/μL不同保幼激素類似物處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)幾丁質(zhì)酶活性，如表2所示。經(jīng)方差分析，不同處理對煙蚜繭蜂蛹內(nèi)幾丁質(zhì)酶活性的影響達極顯著差異(F5, 12=13.123,P=0.004)。由表2可知，不同保幼激素類似物處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)幾丁質(zhì)酶活性存在不同程度抑制或促進作用。其中，ZR-777處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)幾丁質(zhì)酶活性顯著高于對照組，且有明顯的促進作用(P<0.01)；ZR-512和保幼激素Ⅲ處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)幾丁質(zhì)酶活性顯著低于對照組，有明顯的抑制作用(P<0.01)；而ZR-515和苯氧威處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)幾丁質(zhì)酶活性與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。因此，1 000 ng/μL不同保幼激素類似物處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)幾丁質(zhì)酶活性由高到低排序為：ZR-777>CK>苯氧威>ZR-515>保幼激素Ⅲ>ZR-512。

表2 1 000 ng/μL保幼激素類似物對煙蚜繭蜂蛹內(nèi)酚氧化酶含量和活性及幾丁質(zhì)酶活性的影響

3 討論

目前關(guān)于繭蜂滯育的研究發(fā)現(xiàn)，低溫和短光照兩者相互作用下可以誘導繭蜂滯育(路子云等, 2014; 余玲等, 2016)；并且在0℃時煙蚜繭蜂滯育率為71.12%，但在常溫下未能誘導出滯育個體(余玲等, 2016)。與低溫處理相比，保幼激素類似物在常溫下就能對煙蚜繭蜂羽化時間以及羽化率產(chǎn)生影響：隨著濃度增加，ZR-777對煙蚜繭蜂羽化時間的延遲程度先增加后減少，低濃度(8, 40和200 ng/μL)ZR-777顯著延遲煙蚜繭蜂羽化時間，而高濃度(1 000和5 000 ng/μL)ZR-777不明顯延遲煙蚜繭蜂羽化時間；ZR-777處理煙蚜繭蜂后，隨著濃度的增加，煙蚜繭蜂羽化率越來越高。這與沈萍(2006)的結(jié)果相似，即保幼激素類似物對斜紋夜蛾幼蟲化蛹率的影響。1 000 ng/μL ZR-512處理后煙蚜繭蜂羽化時間延遲最長，可達56.00 h；高濃度ZR-512(1 000和5 000 ng/μL)處理后煙蚜繭蜂羽化率較高，低濃度(8, 40和200 ng/μL)處理后羽化率相對較低，但與對照組相比差異不顯著(P>0.05)。周冰峰等(1995)研究了ZR512不同劑量對蜜蜂蜂王發(fā)育調(diào)控的影響，研究發(fā)現(xiàn)，ZR512能夠顯著延長蜂王幼蟲期，這與本試驗中1 000 ng/μL ZR-512可以延遲煙蚜繭蜂的羽化時間(表1)相似。ZR-515、保幼激素Ⅲ和苯氧威處理后，反而能夠?qū)熝晾O蜂羽化時間提早，其中200 ng/μL苯氧威可使煙蚜繭蜂羽化時間提早最多，達52.00 h；這3種激素對煙蚜繭蜂羽化率影響大，使其整體羽化率偏低(表1)。苯氧威能引起許多昆蟲從蛹到成蟲的畸形(Morenoetal., 1993)。在蛹的發(fā)育過程中，保幼激素能阻止昆蟲成蟲某些器官芽的發(fā)育分化，會形成永久性蛹或蛹-成蟲中間體而死亡(Dhadiallaetal., 1998)。這可能是經(jīng)過苯氧威處理煙蚜繭蜂后，蚜繭蜂羽化率偏低的原因之一。

保幼激素類似物對昆蟲壽命有一定的影響。例如經(jīng)過保幼激素類似物處理后，導致果蠅和棉鈴蟲Helicoverpaarmigera雌成蟲壽命的縮短(Flatt and Kawecki, 2007; 陳英, 2013)。但是本研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度5種保幼激素類似物處理對煙蚜繭蜂成蜂壽命無影響(圖1)。造成這種結(jié)果的可能原因是由于昆蟲種類不同，以及對保幼激素類似物反應不同的自身差異所引起的。不同濃度的5種保幼激素類似物中ZR-777(1 000和40 ng/μL)處理后會降低雌蜂比例，其他濃度對雌蜂比例的影響不顯著(圖2)。200 ng/μL ZR-777, 1 000 ng/μL ZR-512和5 000 ng/μL ZR-512處理后對煙蚜繭蜂寄生率均沒有顯著影響(圖3)，這說明用保幼激素類似物(200 ng/μL ZR-777, 1 000 ng/μL ZR-512和5 000 ng/μL ZR-512)處理煙蚜繭蜂是安全的，不會對煙蚜繭蜂寄生率產(chǎn)生負面影響。

在1 000 ng/μL 5種保幼激素類似物處理下，ZR-512處理后煙蚜繭蜂蛹內(nèi)酚氧化酶含量和活性以及幾丁質(zhì)酶活性均最低，羽化時間也延遲最多(延遲56.00 h)(表1和2)。此結(jié)果說明，ZR-512處理后的煙蚜繭蜂，羽化時間延遲是由于其體內(nèi)與蛻皮相關(guān)的酶發(fā)生了變化。這與趙忠偉等(2012)報道的3種昆蟲生長調(diào)節(jié)劑濃度達到50 mg/mL時對意大利蝗Calliptamusitalicus3齡蝗蝻幾丁質(zhì)酶活性有抑制作用相一致。馬曉丹(2014)研究了保幼激素類似物蚊蠅醚處理韭菜遲眼蕈蚊Bradysiaodoriphaga幼蟲后，其體內(nèi)酚氧化酶活性會增強，這與本試驗用保幼激素Ⅲ處理后煙蚜繭蜂體內(nèi)酚氧化酶活性與對照組相比明顯增強(表2)，說明有些保幼激素類似物會增強昆蟲體內(nèi)酚氧化酶活性。但該激素調(diào)控煙蚜繭蜂體內(nèi)酶活性、含量等分子機理有待進一步研究。

因此，針對目前煙蚜繭蜂規(guī)?；敝持校捎跓熝晾O蜂發(fā)育歷期較短，羽化不整齊、不一致，且煙葉生產(chǎn)中急需釋放煙蚜繭蜂防控煙蚜時，常常因煙蚜繭蜂數(shù)量不足，貽誤防控的最佳時機。而保幼激素類似物1 000 ng/μL ZR-512不僅能夠有效延遲煙蚜繭蜂的羽化時間，且活性高、相對安全以及毒性低等優(yōu)點。如能合理使用1 000 ng/μL ZR-512調(diào)控煙蚜繭蜂的羽化時間，以獲得相對整齊一致、數(shù)量充足的煙蚜繭蜂，可有效化解田間需求與供蜂需要相脫節(jié)的矛盾，提高煙蚜繭蜂防控煙蚜的效率，減少煙蚜及蚜傳病危害，更好服務(wù)于煙葉生產(chǎn)實踐，提高煙葉安全性、產(chǎn)量和品質(zhì)。