HPVE6/E7mRNA聯(lián)合P16Ki-67預(yù)測低級別宮頸鱗狀上皮的臨床價(jià)值評估

江強(qiáng)

【摘要】 目的：探討HPVE6/E7mRNA聯(lián)合P16Ki-67預(yù)測低級別宮頸鱗狀上皮的臨床價(jià)值。方法：選取2017年1月-2019年4月在本院進(jìn)行婦科檢查的低級別宮頸鱗狀上皮病變患者220例，以宮頸病理學(xué)為標(biāo)準(zhǔn)，對患者進(jìn)行HPVE6/E7mRNA檢測、P16Ki-67雙染色及聯(lián)合檢測，比較P16Ki-67與HPVE6/E7mRNA的陽性檢測率以及單一檢測與聯(lián)合檢測對高級別宮頸鱗狀上皮病變及以上患者的診斷效能。結(jié)果：HPVE6/E7mRNA宮頸炎、LSIL檢測陽性率分別為13.64%、22.34%，P16Ki-67宮頸炎、LSIL檢測陽性率分別為4.55%、10.64%，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HPVE6/E7mRNA HSIL、宮頸癌檢測陽性率分別為80.00%、100%，P16Ki-67 HSIL、宮頸癌檢測陽性率分別為77.14%、100%，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。聯(lián)合檢測靈敏度明顯高于單一檢測，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且聯(lián)合檢測約登指數(shù)較高，且特異性較高，其綜合性最強(qiáng)。結(jié)論：HPVE6/E7mRNA聯(lián)合P16Ki-67能夠更好預(yù)測低級別宮頸鱗狀上皮病變的進(jìn)展，且針對高級別宮頸病變具有更強(qiáng)的敏感性，減少陰道鏡轉(zhuǎn)診率，有效避免了因短暫性HPV感染的過度治療，從而降低了監(jiān)測以及治療成本。

【關(guān)鍵詞】 HPVE6/E7mRNA檢測 P16Ki-67檢測 低級別宮頸鱗狀上皮病變

Evaluation of Clinical Value of HPVE6/E7mRNA Combined with P16Ki-67 in Predicting Low Grade Cervical Squamous Epithelium/JIANG Qiang. //Medical Innovation of China， 2020， 17（22）： 0-067

[Abstract] Objective： To investigate the clinical value of HPVE6/E7mRNA combined with P16Ki-67 in the prediction of low grade cervical squamous epithelium. Method： From January 2017 to April 2019 in our hospital of department of gynaecology the less of cervical squamous epithelial lesions of 220 cases were selected. On the basis of cervical pathology，they were given HPVE6/E7mRNA test， P16Ki-67 double staining and joint detection. P16Ki-67 with HPVE6/E7mRNA positive detection rate， and a single detection with joint detection in patients with high level cervical squamous epithelial lesions and above diagnostic efficiency of patients were compared. Result： The positive rates of HPVE6/E7mRNA cervicitis and LSIL were 13.64% and 22.34%， respectively， the positive rates of P16Ki-67 cervicitis and LSIL were 4.55% and 10.64%， respectively， with significant differences between the two groups （P>0.05）. The positive rates of HPVE6/E7mRNA HSIL and cervical cancer detection were 80.00% and 100%， respectively， the positive rates of P16Ki-67 HSIL and cervical cancer detection were 77.14% and 100%， respectively， with no statistical difference between the two groups （P>0.05）. The sensitivity of the combined test was significantly higher than that of the single test， with a significant difference （P<0.05）. Moreover， the combined test had a higher Yoden index， higher specificity， and the most comprehensive. Conclusion： HPVE6/E7mRNA combined with P16Ki-67 can better predict the progress of low grade cervical squamous lesions， and has a stronger sensitivity for high grade cervical lesions， reduce the colgoscopy referral rate， effectively avoid over treatment due to transient HPV infection， thereby reducing the monitoring and treatment costs.

[Key words] HPVE6/E7mRNA detection P16Ki-67 detection Low grade cervical squamous epithelial lesions

First-authors address： Taian Cancer Prevention and Treatment Hospital， Taian 271000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.22.017

宮頸癌發(fā)病率在婦女惡性腫瘤位居第二，據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)全世界每年大約有50萬女性罹患宮頸癌，我國每年約新增宮頸癌患者13萬例，約占全球1/3發(fā)病量[1-2]。據(jù)相關(guān)研究顯示，宮頸癌以及癌前病變均與HPV感染有關(guān)[3]。而相關(guān)學(xué)者進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，宮頸上皮內(nèi)瘤變并非一種程度不同連續(xù)的單一病變，而是具有明顯差異的兩類不同臨床病理過程，臨床將其分為低級別鱗狀上皮病變和高級別鱗狀上皮病變[4]。低級別鱗狀上皮病變是致癌性或者非致癌性HPV感染的組織病理學(xué)表現(xiàn)，臨床主要通過隨訪為主;而高級別病變則被認(rèn)為癌變病變，此類患者通常需要通過手術(shù)進(jìn)行治療。而臨床對于低級別鱗狀上皮病變的診斷具有一定難度，因缺乏客觀依據(jù)，通常會導(dǎo)致診斷結(jié)果出現(xiàn)偏差，從而出現(xiàn)漏診或過度治療，因此提高低級別宮腔鱗狀上皮病變準(zhǔn)確性具有重要的臨床價(jià)值。文獻(xiàn)[5-6]顯示，HPVE6/E7mRNA與P16Ki-67檢測在低級別宮腔鱗狀上皮病變的評估中均有一定的臨床價(jià)值，但對于二者聯(lián)合預(yù)測低級別宮腔鱗狀上皮病變的研究較為罕見，需進(jìn)一步探討。本研究旨在通過對低級別宮腔鱗狀上皮病變患者使用HPVE6/E7mRNA聯(lián)合P16Ki-67檢測，評估二者聯(lián)合在預(yù)測低級別宮腔鱗狀上皮病變的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年1月-2019年4月在本院進(jìn)行婦科檢查，經(jīng)TCT檢測為低級別宮頸鱗狀上皮病變患者220例，年齡21～62歲，平均（40.43±4.61）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：有性生活史，在入院前3 d未進(jìn)行陰道沖洗或用藥;排除妊娠、HIV感染或者免疫缺者，有子宮腔疫苗接種、盆腔手術(shù)、子宮頸病變的治療史。本研究患者均知情同意并簽署知情同意書，同時(shí)獲得本院倫理委員會的批準(zhǔn)下進(jìn)行。

1.2 方法 所有患者均先行TCT檢測，之后進(jìn)行P16Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染色檢測以及HPVE6/E7mRNA檢測。標(biāo)本的采集：分別采集每位患者宮頸標(biāo)本2份。取膀胱截石位，窺陰器暴露宮頸，使用無菌鹽水棉球拭去宮頸口多余分泌物以及黏液，將宮頸刷置于宮頸口順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5周后取出，將標(biāo)本放入相對應(yīng)的取樣試管中進(jìn)行相應(yīng)的檢測。P16Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染色檢測方法：（1）制作液基細(xì)胞學(xué)基片，將其用950 mL/L酒精固定20 min，使其自然干燥;（2）在免疫組織化學(xué)染色儀中進(jìn)行P16Ki-67雙染色檢測;（3）設(shè)置陽性與陰性對照：即P16核呈現(xiàn)棕黃色或者胞質(zhì)及核均為棕黃色，且在同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)Ki-67核呈現(xiàn)棕紅色則為陽性，其他則為陰性[7]。HPVE6/E7mRNA檢測方法：（1）離心處理后棄去上清液，使標(biāo)本同質(zhì)化;（2）在沉淀細(xì)胞團(tuán)中加入200 μL的裂解液與400 μL DDH2O，混合后再加入5 μL蛋白酶K，在65 ℃環(huán)境中孵育60 min;（3）配置空白以及陽性質(zhì)控緩沖液2份，每份98 μL，標(biāo)本反應(yīng)體系50 μL;（4）使用含特殊捕獲探針的96孔板常溫復(fù)溫后，進(jìn)行雜交捕獲mRNA;（5）按照3︰1 000比例配置底物催化劑與底物的混合液，將96孔板取出，棄置標(biāo)記探針混合液，IX洗脫液洗板3次，200 μL/次，每孔加入混合液100 μL，封板后置于46 ℃恒溫箱反應(yīng)20 min后判斷結(jié)果;（6）HPVE6/E7mRNA拷貝數(shù)>1 copy/mL為陽性，反之為陰性[8]。組織病理學(xué)檢測：為能夠準(zhǔn)確評估檢測方法的特異性，本研究對所有患者進(jìn)行陰道鏡下子宮頸活檢，其結(jié)果分為低級別宮腔鱗狀上皮（LSIL）及以下病變：宮頸炎及CINⅠ，高級別宮腔鱗狀上皮（HSIL）及以上病變，CINⅡ、CINⅢ以及宮頸癌。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 19軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料采用率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，一致性采用Kappa值衡量，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織病理學(xué)結(jié)果 220例患者中宮頸炎88例（40.00%），LSIL為94例（42.73%），HSIL為35例（15.91%），宮頸癌為3例（1.36%）。

2.2 P16Ki-67與HPVE6/E7mRNA的宮頸炎、LSIL、HSIL、宮頸癌檢測情況比較 HPVE6/E7mRNA宮頸炎、LSIL檢測陽性率分別為13.64%、22.34%，P16Ki-67宮頸炎、LSIL檢測陽性率分別為4.55%、10.64%，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HPVE6/E7mRNA HSIL、宮頸癌檢測陽性率分別為80.00%、100%，P16Ki-67 HSIL、宮頸癌檢測陽性率分別為77.14%、100%，比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.3 P16Ki-67檢測、HPVE6/E7mRNA檢測及聯(lián)合檢測對HSIL診斷效能比較 聯(lián)合檢測靈敏度明顯高于單一檢測，比較差異顯著（P<0.05），且聯(lián)合檢測的約登指數(shù)較高，但三者比較無顯著差異（P>0.05）。見表2～5。

3 討論

宮頸癌是危害女性健康的惡性腫瘤之一，近幾年隨著宮頸細(xì)胞學(xué)篩查技術(shù)的發(fā)展，逐漸普及于臨床后，使宮頸癌的發(fā)生率與死亡率得到明顯改善。研究顯示，低級別宮頸鱗狀上皮病變在臨床診斷中具有相當(dāng)大的挑戰(zhàn)，與觀察者之間重復(fù)性較差及過度診斷有關(guān)，導(dǎo)致低級別宮頸鱗狀上皮病變在治療中存在較多的分歧[9-10]。相關(guān)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，約15%的低級別宮頸鱗狀上皮病變可能會發(fā)展為宮頸癌。在低級別宮頸鱗狀上皮病變中，HPV高感染率現(xiàn)狀導(dǎo)致DNA的分流能力受到影響，若將所有感染HPV的低級別宮頸鱗狀上皮病變患者轉(zhuǎn)為陰道鏡檢查會給患者帶來較大的經(jīng)濟(jì)壓力及心理負(fù)擔(dān)[11-12]。因此如何將有進(jìn)展性的高?；颊邚拇罅繒簳r(shí)性感染人群中分流出來成為當(dāng)務(wù)之急。文獻(xiàn)[13]顯示，HPVE6/E7致癌基因的表達(dá)是HPV感染與高級別宮頸鱗狀上皮病變進(jìn)展的一項(xiàng)重要標(biāo)志。HPVE6/E7致癌基因的上調(diào)降解了p53及pRb蛋白，解除細(xì)胞周期，最終形成子宮頸癌[14]。

本研究顯示，220例低級別宮頸鱗狀上皮病變患者通過組織病理進(jìn)一步檢測，其中炎癥患者占40%，低級別宮頸鱗狀上皮病變患者占42.73%，高級別宮頸鱗狀上皮病變患者占15.91%，宮頸癌患者占1.36%。使用HPVE6/E7mRNA檢測其炎癥、低級別宮頸鱗狀上皮病變、高級別宮頸鱗狀上皮病變及宮頸癌陽性率分別為13.64%、22.34%、80.00%、100%，而P16Ki-67雙染色檢測在上述病變中的陽性率分別為4.55%、10.64%、77.14%、100%。由此可見，隨著患者病變程度的加重，兩種檢測方法檢測陽性率隨之增加。而在炎癥與低級別宮頸病變中，HPVE6/E7mRNA檢測陽性率明顯高于P16Ki-67，而在高級別病變與宮頸癌中，兩種檢測陽性率則無顯著差異，與相關(guān)文獻(xiàn)[15]結(jié)論一致。

另有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，HPVE6/E7mRNA出現(xiàn)的時(shí)間要早于P16Ki-67，特別是在宮頸病變較輕的組織中表現(xiàn)較為明顯，而在病變較為嚴(yán)重的組織中，HPVE6/E7mRNA與P16Ki-67則幾乎同時(shí)表達(dá)[16-17]。文獻(xiàn)[18]顯示，P16Ki-67雙染色檢測可有效提高宮頸癌的準(zhǔn)確性，并且對于在低級別宮頸上皮病變中的分流診斷中有重要價(jià)值。國外則有報(bào)道認(rèn)為HPVE6/E7mRNA可有效提高宮頸癌篩查的效能，同時(shí)可彌補(bǔ)TCT檢測的不足[19-20]。

本研究通過分析HPVE6/E7mRNA、P16Ki-67及二者聯(lián)合檢測在低級別宮頸病變患者的分流效果進(jìn)行評估，筆者以組織病理學(xué)為診斷結(jié)果的金標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測診斷高級別宮頸病變以上的靈敏度明顯高于單一檢測，且聯(lián)合檢測的約登指數(shù)最高，說明聯(lián)合檢測的真實(shí)性為最好。相比于HPVE6/E7mRNA、P16Ki-67單一檢測，二者聯(lián)合檢測不僅提高了診斷的靈敏度，同時(shí)也保持了較高的特異度，且綜合性最好。

綜上所述，HPVE6/E7mRNA聯(lián)合P16Ki-67能夠更好預(yù)測低級別宮頸鱗狀上皮病變的進(jìn)展，且針對高級別宮頸病變具有更強(qiáng)的敏感性，減少陰道鏡轉(zhuǎn)診率，有效避免了因短暫性HPV感染的過度治療，從而降低了監(jiān)測以及治療成本。

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（收稿日期：2019-12-02） （本文編輯：周亞杰）