王冬生
(河南工業(yè)和信息化職業(yè)學院,河南 焦作 454002)
白靈菇(Pleurotus ferulae) 為真菌門(Enmycophyta) 擔子菌綱 (Basidiomycetes) 傘菌目 (Agaricales) 側耳科 (Pleurotaceae) 側耳屬 (Pleurotus)[1]真菌,因其外形與靈芝相似,但卻通體白色因而得名。白靈菇通體潔白,菇體肥大、菌蓋肥厚、菌柄短粗、肉質鮮美營養(yǎng)成分十分豐富,具有調節(jié)人體生理平衡,增強人體免疫力的作用,是一種食用和藥用價值都很高的珍稀食用菌[2]。白靈菇多糖對增強人體免疫力,提高人體的抗氧化性和疲勞恢復有很好的效果[3]。
長跑運動員在運動訓練時,體內新陳代謝和血液循環(huán)加快,能量消耗增加,肌肉組織內會產(chǎn)生乳酸等代謝產(chǎn)物,引起肌肉酸痛、神經(jīng)系統(tǒng)反應緩慢等身體疲勞現(xiàn)象,同時也會產(chǎn)生身心疲勞等心理性疲勞的感覺[4]。如何盡快消除疲勞,快速恢復身體機能成為了一個值得研究的問題[5]。針對白靈菇多糖對長跑運動員的疲勞恢復作用進行試驗,為探討白靈菇多糖對長跑運動員生理和心理疲勞的恢復作用。
白靈菇一級品干品(雜質含量<0.1%),購自四川大灣山食品有限公司。
主要試劑:DEAE-52,Sigma公司;SephdexG-100,Wolsen公司;乙醇、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鈉(分析純),天津市天大化學試劑廠;濃硫酸、苯酚、葡萄糖(分析純),上海試劑一廠綜合經(jīng)營公司。
主要儀器設備:佳明(Garmin) HRM 4-run跑步心率帶,上海佳明速達航電科技有限公司;WBZS801-7鼓風電熱烘箱,蘇州王品工業(yè)烘箱設備有限公司;HL-2恒流泵,上海亞榮有限公司;756 PC紫外可見分光光度計,上海醫(yī)用激光儀器廠;HHW 420型電熱恒溫水浴鍋,濟南歐萊博科學儀器有限公司;傅立葉紅外光譜儀VECTOR-22,德國BRUKER公司;HF 240-300全自動生化分析儀,山東濟寧正豐醫(yī)療科技有限公司。
取白靈菇干品,洗凈后在35℃的烘箱中烘干30 min,上粉碎機打成粉末過80目篩,按1∶10的料液比與80%乙醇混合進行脫脂,去除雜質后得白靈菇粗多糖提取液。
將白靈菇粗多糖提取液采用纖維素DEAE-52進行分離純化,具體按以下步驟進行。
1) 取DEAE-52型纖維素離子交換劑30 g,加入450 mL的去離子水浸泡24 h,倒掉多余的水后再用去離子水洗3次;最后一次水洗倒掉多余水后,加4倍體積的0.5 mol·L-1鹽酸浸泡4 h;抽濾,用水洗至濾液至中性。然后用0.5 mol·L-1鹽酸浸泡4 h,抽濾,用水除去游離鹽酸。再用氫氧化鈉洗滌,進而用水洗去堿液,至濾液成中性。最后重復一次鹽酸洗滌,使DEAE-52纖維素離子交換劑帶上氯離子。將濕的DEAE-52與水的混懸液傾入柱中,制備纖維素層析柱。
2)將層析柱垂直架好,采用橫流泵提供動力進行連續(xù)進樣。層析具體過程是將白靈菇粗多糖溶液加熱充分溶解,上離心機4 000 r·min-1離心10 min除去不溶顆粒后,上樣,以0~0.5 mol·L-1氯化鈉進行洗脫,流速為1.0 mL·min-1,分步收集。經(jīng)苯酚-硫酸法檢測后收集多糖提取液。
纖維素DE-52分離得到的白靈菇多糖純度采用Sephadex-100進行檢測[6],具體步驟如下。
1) 將 Sephadex-100凝膠裝柱 (Φ1.6 cm×60 cm)進行預處理,以減少碎屑使凝膠沉降,將柱底出口關閉,用0.1 mol·L-1的氯化鈉溶液以1 mL·min-1的流速平衡。
2)層析過程:將白靈菇多糖提取液加熱溶解,離心機4 000 r·min-1離心10 min除去不溶顆粒,上樣。用0.1 mol·L-1的氯化鈉洗脫液,按流速1.0 ml·min-1、5 mL管進行洗脫,分部收集,用苯酚-硫酸法檢測多糖純度。
3)多糖的純化采用Sephadex進行分析,進行的同時監(jiān)測不同管子中多糖的濃度,并以此繪制多糖在Sephadex柱中分離曲線。結果顯示曲線洗脫峰為對稱形狀,因此可以確定分離的白靈菇提取液多糖為純品,即均一多糖。
4) 將白靈菇提取液多糖配置成一定濃度的溶液,使用紅外光譜儀分別在不同波長處掃描,結果顯示白靈菇多糖中含有葡萄糖和鼠李糖等成分。
選取本校體育大學田徑專業(yè)的30名中長跑運動員為試驗對象,這30人均長期從事長跑專項訓練。其中男運動員21人,女性9人。按性別隨機分成3組,每組10人(7男3女):試驗1組、試驗2組和對照組。研究對象的基本情況如下:試驗1組平均年齡19.4歲、身高170.2 cm、體重62.9 kg;試驗2組平均年齡20.2歲、身高173.4 cm、體重68.3 kg;對照組平均年齡20.5歲、身高171.6 cm、體重66.9 kg。
采用靜息心率 RHR(resting heart rate,RHR)比較試驗法和血液指標試驗法,研究白靈菇多糖對長跑運動員疲勞恢復的作用。
提取白靈菇多糖提取液備用。在試驗開始第1天起,每天晨起時測量研究對象的靜息心率,連續(xù)測量30 d;在試驗開始第1天早上空腹抽血1次進行血液指標測定,在試驗結束的最后一天再空腹抽血1次測定血液指標。從開始試驗第1天起,試驗1組和2組在每天正常飲食的基礎上,分別服用100 mL和200 mL的白靈菇多糖提取液,連續(xù)服用30 d;對照組不服用任何補劑。全體研究對象在試驗期間每天正常飲食,不得添加其它藥品、保健品、營養(yǎng)品和運動功能性飲料等額外飲食。
2.2.1 靜息心率RHR比較試驗法
開始試驗的前1天就寢前,要求在胸部佩戴佳明(Garmin) HRM4-run跑步心率帶,用于靜息心率的測量。從第1天早上晨起時測量靜息心率數(shù)據(jù),要求不起床,不坐起、不說話,不做任何運動的初醒狀態(tài)下進行測量,以平躺1 min記錄的靜息心率數(shù)據(jù)為準。
2.2.2 血液指標測定試驗
試驗兩次的血樣采集均應在空腹狀態(tài)下進行,主要涉及全血乳酸(LD)、肌酸激酶(CK)、血尿素氮(BUN)含量等測定,統(tǒng)一由校醫(yī)院的醫(yī)護人員完成采血和血液指標測定。
3組人員的30天靜息心率變化情況見圖1。
如圖1所示,前10天3組研究對象的RHR均處于一個上升期,其中第9天的RHR最高,試驗1組、2組和對照組的平均RHR分別為45.03、43.93和44.18。因為第1周按訓練計劃是超負荷運動量集訓,從第2周開始進行為期3周的保持期訓練,運動負荷不再加大,只是維持在第1周的運動量水平。3組研究對象平均RHR變化曲線可以看出,試驗1組RHR數(shù)值也有上升;試驗2組前10天也有上升,但中期處于持平狀態(tài),后期反而有所下降;總體上2個試驗組的平均RHR均要低于對照組,試驗2組在試驗中后期的RHR均處于試驗1組之下。
靜息心率反映了人在安靜狀態(tài)下,一般是指在清醒、不活動的狀態(tài)下每分鐘心跳的次數(shù)。這一指標不僅能在一定程度上反映一個人的健康程度(心臟機能),還是一項訓練疲勞程度與恢復情況的晴雨表。
本次試驗中,第1周的大負荷運動量使全體研究對象的RHR均升高,特別是對照組靜息心率曲線上升很快。但是從第2周開始不再增加運動量,這時心臟和肌肉等運動組織已經(jīng)適應了這種強度。疲勞感慢慢在減輕,心率恢復速度也明顯加快。運動結束后平靜下來的靜息心率也增加緩慢,對照組的心率曲線也趨于平穩(wěn)。試驗1組因為服用了白靈菇多糖提取液,其心率上升幅度與對照組相比更?。辉囼?組由于服用了更多的白靈菇多糖提取液,心率曲線在試驗后期甚至出現(xiàn)了緩慢下降的趨勢。這說明增加白靈菇提取液的服用量對降低靜息心率有一定的功效,從而降低RHR的數(shù)值。需要注意的是,對于常人來說,過低的靜息心率也容易引起頭暈、氣短等問題。本試驗中長跑運動員的靜息心率降低是建立在長期的運動訓練基礎上的,因此低心率屬于合理的數(shù)值范圍。
試驗開始和最后一天服用白靈菇提取液后采血,使用全自動生化分析儀進行全血乳酸、肌酸激酶和血尿素氮測定。測定結果如表1所示。
表1 血液指標檢測結果Tab.1 Results of blood index test
由表1可知,試驗1組和試驗2組在試驗后與對照組相比,全血乳酸含量均有所上升。對照組在試驗前后全血乳酸含量增加了15.29%;試驗1組在試驗前后全血乳酸含量增加了10.48%;試驗2組在試驗前后全血乳酸含量增加了3.97%。在減少血乳酸的生成和積累方面效果不顯著。試驗2組的乳酸含量在同等條件下增加幅度最小,說明服用白靈菇提取液能夠有效緩解肌肉酸痛、降低疲勞感;而且從試驗1組和對照組的增幅來看,服用量與抗乳酸抗疲勞程度呈現(xiàn)正比關系。
試驗1組和試驗2組在試驗后與對照組相比,肌酸激酶含量均有所上升。對照組在試驗前后肌酸激酶含量增加了42.40%;試驗1組在試驗前后肌酸激酶含量增加了16.95%;試驗2組在試驗前后肌酸激酶含量增加了10.22%。肌酸激酶通常存在于肌肉以及腦等組織的細胞漿和線粒體中,一般肌肉細胞的損傷會使肌酸激酶含量升高;而長跑屬于耐力訓練,長時間的跑步運動會導致肌肉細胞的勞損;同時,第1周運動量的加大,劇烈運動也會使肌酸激酶增高,肌酸分泌過多,人就會覺得酸痛而產(chǎn)生疲勞感。本試驗中,對照組肌酸激酶含量增加幅度很大,而試驗1組、2組肌酸激酶含量在同等條件下增加幅度較小,說明服用白靈菇提取液能夠降低血液中肌酸激酶的含量,減少肌酸分泌就能夠減輕肌肉的酸痛,減輕肌肉疲勞。
與對照組相比,試驗1組和試驗2組血尿素氮含量均有所升高。對照組血尿素氮含量增加了12.26%;試驗1組血尿素氮含量增加了14.81%;試驗2組血尿素氮含量增加了57.18%。本試驗中,2個試驗組均服用了白靈菇多糖,補充了大量的高蛋白物質。雖然多糖對血尿素氮的產(chǎn)生有一定的抑制作用,可以修復受損細胞,以緩解機體對負荷的不適應。由于血尿素氮水平受飲食的影響較大,本次試驗中白靈菇提取液服用量過大,可能引起蛋白質供給過剩,造成血中尿素氮出現(xiàn)非生理性升高,這從試驗2組的血尿素氮值要高于試驗1組就可以看出。而對照組的血尿素氮升高可能是因為運動量的增加而引起的。
白靈菇多糖能夠有效減少疲勞感,通過靜息心率的試驗和血液指標檢測結果均顯示出其抗疲勞的功效。對長跑運動員的試驗研究顯示,白靈菇多糖的緩解疲勞作用機理,可能是對運動肌肉細胞的修復作用和蛋白質等營養(yǎng)物質的補充作用,減輕了肌肉的酸痛感,降低了乳酸過度堆積。從而減輕了人體的疲勞感,有助于運動員體力的恢復。但試驗中運動員的血尿素氮指標有所升高,分析其原因可能是白靈菇多糖提取液攝入量過大,多余的蛋白質不能被人體吸收。后期需要在多糖的攝入量上再進一步研究,為白靈菇多糖在運動保健、醫(yī)藥等領域的廣泛應用奠定理論基礎。