進餐及血樣溶血和靜置時間對變應(yīng)原檢測的影響

陳艷蕾，蘭天飛，石海云，王學(xué)艷

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院變態(tài)反應(yīng)科，北京 100038)

過敏性疾病患病率約占世界總?cè)丝诘?2%，已成為全球重要的公共衛(wèi)生問題之一[1]。變應(yīng)原檢查至關(guān)重要，是過敏性疾病診斷和特異性免疫治療的重要依據(jù)之一[2]。變應(yīng)原的檢測方法主要有體內(nèi)檢測和體外檢測[3]。其中體外檢測指血清學(xué)檢驗，常用于檢測血清特異性免疫球蛋白E(specific immunoglobulin E，sIgE)抗體，其特點為特異性高、安全、可靠、基本不會給患者帶來痛苦，不受用藥影響、儀器自動判讀結(jié)果，可重復(fù)性好[4]。目前普遍認(rèn)為體外檢測無需空腹。但有研究發(fā)現(xiàn)，血脂和過敏之間存在一定的關(guān)聯(lián)，且血脂異常和特應(yīng)性傾向具有相同的免疫通路[5-6]；同時IgE是糖尿病前期的個體危險因素[7]。進餐后人體血糖和血脂是變化的，血脂、血糖和過敏之間存在著一定的關(guān)聯(lián)，因此進餐前后血糖血脂的變化可能影響血中變應(yīng)原sIgE的檢測水平，成為變應(yīng)原檢測的干擾因素。此外，血樣在采集、轉(zhuǎn)運、保存以及檢測過程中，操作不規(guī)范、患者自身或外界因素等影響，也可能會干擾變應(yīng)原檢測結(jié)果。本研究旨在分析空腹血糖血脂正常者和升高者進餐、血樣溶血及采血后血樣靜置時間對血清變應(yīng)原sIgE檢測水平的影響，從而指導(dǎo)臨床實驗室變應(yīng)原檢測并為變應(yīng)原檢測操作規(guī)范的制訂提供支持。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年3月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院變態(tài)反應(yīng)科門診就診的患者(年齡20～65歲)作為研究對象，分別篩選出空腹血糖血脂正常者26例和空腹血糖血脂(兩者任一)升高者12例。其中，空腹血糖血脂正常者男12例、女14例，年齡20～64歲，平均(42±13)歲；空腹血糖血脂升高者男5例、女7例，年齡35～65歲，平均(53±8)歲。所有入組人員均在進餐前后分別采靜脈血，分別將空腹血糖血脂正常者和升高者血樣分為空腹及餐后2組，其中空腹血糖血脂正常者：空腹血樣為A組，餐后血樣為B組，各26例；空腹血糖血脂升高者：空腹血樣為C組，餐后血樣為D組，各12例。所有入組人員(38例)中，隨機抽取26例血樣進行人工溶血(溶血組)，將與之對應(yīng)的26例未溶血血樣予以常規(guī)處理(常規(guī)處理血清組)；隨機抽取12例血樣靜置5 min即離心備檢。

1.2研究方法 分別采集所有入組人員空腹及餐后2 h靜脈血各8 mL置于2個采血管。其中，常規(guī)處理血清組予以常規(guī)處理，利用負(fù)壓緩慢在試管內(nèi)注入血液標(biāo)本，溶血組則將試管帽去除后，將血液標(biāo)本迅速轉(zhuǎn)移至試管內(nèi)，同時來回快速抽吸10次導(dǎo)致標(biāo)本溶血。隨后在室溫下靜置30 min，所有血液標(biāo)本采用SiGMA 3-18K型離心機(北京博勱行儀器有限公司生產(chǎn))，離心半徑為15.5 cm，3 000 r/min離心3.5 min備檢。

所有血樣均采用全自動酶免分析儀(深圳市愛康生物科技有限公司生產(chǎn)，型號：URANUS AE85型)檢測血清sIgE抗體，包括屋塵螨、粉塵螨、艾蒿、普通豚草、蟑螂、貓上皮、犬上皮、屋塵、交鏈孢霉、柳樹，試劑盒購自江蘇浩歐博生物醫(yī)藥股份有限公司(批號：20190101)。采用全自動生化分析儀(美國貝克曼庫爾特有限公司生產(chǎn)，型號：AU5832型)分別檢測空腹血樣血糖、三酰甘油和總膽固醇(均在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院檢驗科進行檢測)，其中葡萄糖和總膽固醇測定試劑盒購自美國貝克曼庫爾特有限公司(批號：5504和5336)，三酰甘油測定試劑盒購自柏定生物工程(北京)有限公司(批號：0822)。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，不服從正態(tài)分布的計量資料數(shù)用中位數(shù)(四分位間距)[M(P25，P75)]表示，采用配對樣本的Wilcoxon秩和檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1空腹與餐后血糖血脂對變應(yīng)原檢測結(jié)果的影響

2.1.1空腹血糖血脂正常者空腹及餐后的變應(yīng)原血清sIgE水平比較 A組和B組的各變應(yīng)原血清sIgE水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 空腹血糖血脂正常者空腹及餐后的變應(yīng)原血清sIgE水平比較 [kUA/L，M(P25，P75)]

2.1.2空腹血糖血脂升高者空腹及餐后的變應(yīng)原血清sIgE水平比較 C組和D組的各變應(yīng)原血清sIgE水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 空腹血糖血脂升高者空腹及餐后的變應(yīng)原血清sIgE水平比較 [kUA/L，M(P25，P75)]

2.2溶血對變應(yīng)原檢測結(jié)果的影響 常規(guī)處理血清組和溶血組的屋塵螨、粉塵螨、艾蒿、普通豚草、蟑螂、犬上皮、屋塵的血清sIgE水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；溶血組貓上皮血清sIgE水平高于常規(guī)處理血清組，交鏈孢霉和柳樹血清sIgE水平低于常規(guī)處理血清組(P<0.05)。見表3。

表3 溶血前后變應(yīng)原血清sIgE水平的比較 [kUA/L，M(P25，P75)]

2.3血樣靜置時間對變應(yīng)原檢測的影響 12例血樣靜置5 min即離心，其中1例血樣出現(xiàn)溶血，9例血樣血清中不同程度出現(xiàn)凝膠塊或凝膠絲，僅2例分離出正常血清。本研究所有靜置30 min后離心的血樣(人工溶血除外)均未出現(xiàn)溶血或凝膠塊(絲)。

3 討 論

過敏性疾病患者的血清總IgE水平往往升高，但不能明確其過敏反應(yīng)的誘發(fā)因素[8]。而對變應(yīng)原sIgE進行檢測，可以初步判斷患者在接觸某變應(yīng)原時可能會出現(xiàn)過敏現(xiàn)象[9]。變應(yīng)原sIgE抗體的檢測對于過敏性疾病的臨床治療及預(yù)防均有積極意義，已被納入多項臨床疾病的診療指南[4]。sIgE水平與部分過敏性疾病的嚴(yán)重程度具有相關(guān)性，可協(xié)助疾病分型及精準(zhǔn)治療[4]。研究證實，血清sIgE/總IgE比值>16.2%可以很好地預(yù)測變應(yīng)原特異性免疫治療的臨床療效[10-11]。這些均對變應(yīng)原sIgE和總IgE定量檢測的精準(zhǔn)性提出了更高的要求。

目前一系列研究發(fā)現(xiàn)，血糖、血脂和過敏之間可能存在一定的關(guān)聯(lián)。如7歲兒童的血脂水平與哮喘、氣道阻塞、支氣管反應(yīng)性和空氣變應(yīng)原致敏有關(guān)[6]。總膽固醇可能增加變應(yīng)原sIgE的產(chǎn)生，進而加重過敏癥狀[12]。母親孕期糖尿病增加了嬰兒過敏性疾病的患病風(fēng)險；與正常孕婦相比，孕期糖尿病患者存在更為明顯的輔助性T細(xì)胞(helper T cell，Th)1下調(diào)和Th2上調(diào)，即Th1/Th2比值下降[13]。進餐會影響機體血糖、血脂水平的變化，因此其有可能影響血液中sIgE的定量檢測結(jié)果。本研究中，無論是空腹血糖血脂正常者還是空腹血糖血脂升高者，其空腹和餐后各變應(yīng)原血清sIgE水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示雖然血脂異常和特應(yīng)性傾向具有相同的免疫通路，但血糖血脂的變化在短時間內(nèi)不易引起體內(nèi)免疫系統(tǒng)發(fā)生變化，Th1和Th2細(xì)胞的失衡在血糖血脂的長期異常后出現(xiàn)，繼而使血液sIgE水平發(fā)生改變。另有研究發(fā)現(xiàn)，美國人群血清總膽固醇與特應(yīng)性之間存在明顯的種族差異[14]。而本研究所采血樣sIgE空腹和餐后檢測值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義可能與研究人群有關(guān)。

標(biāo)本溶血是指標(biāo)本因各方面因素的影響而導(dǎo)致紅細(xì)胞發(fā)生破裂[15]，主要分為體外溶血及體內(nèi)溶血[16]。檢測對象長期服用易導(dǎo)致溶血的藥物，或患有惡性疾病，則易引發(fā)體內(nèi)溶血；血液標(biāo)本在采集、分離、運送以及保存過程中，若操作不當(dāng)，易導(dǎo)致體外溶血[15]。體外溶血是血液檢驗中血樣最常出現(xiàn)的一種不良現(xiàn)象。諸多研究認(rèn)為發(fā)生溶血后，血樣中的血小板、紅細(xì)胞以及白細(xì)胞會釋放諸多對結(jié)果造成影響的物質(zhì)，進而影響血常規(guī)和血生化檢測結(jié)果，如K+、乳酸脫氫酶等顯著升高[17-19]。研究發(fā)現(xiàn)，血清內(nèi)乳酸脫氫酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、CD4+等水平均與支氣管哮喘患兒的病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[20]；血清總IgE、變應(yīng)原sIgE、乳酸脫氫酶等血清生物標(biāo)志物與特應(yīng)性皮炎病情嚴(yán)重程度、病情活動度相關(guān)[21]，提示乳酸脫氫酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶等可能與機體免疫系統(tǒng)存在交互作用，從而影響sIgE水平。本研究結(jié)果顯示，正常處理血清組和溶血組部分變應(yīng)原血清sIgE水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但貓上皮、交鏈孢霉及柳樹變應(yīng)原血清sIgE水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，考慮可能為溶血后細(xì)胞內(nèi)成分釋放入血或使血清嚴(yán)重稀釋，引發(fā)變應(yīng)原檢測結(jié)果的異常，具體機制尚需進一步探討。因此，建議血液標(biāo)本在采集、分離、運送以及保存過程中一定嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，防止溶血現(xiàn)象的發(fā)生，以保證變應(yīng)原檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究中，隨機抽取12例血樣靜置5 min即離心，其中1例血樣出現(xiàn)溶血，9例血樣血清中不同程度出現(xiàn)凝膠塊或凝膠絲，僅2例分離出正常血清?？紤]是由于靜置時間過短，不能保證血樣徹底凝固，對凝固不全的血樣進行離心時，極易出現(xiàn)纖維蛋白形成，一方面增加了血清和紅細(xì)胞的粘連，使血清不易和紅細(xì)胞分離從而導(dǎo)致溶血；另一方面則易在血清中形成凝膠塊或凝膠絲，這種血樣在檢測過程中由于血清量較少，不能滿足變應(yīng)原檢測所需血清量，無法完成變應(yīng)原檢測，同時其凝膠塊或凝膠絲會造成儀器檢測取樣時堵塞探針，影響檢測進程及結(jié)果。而靜置30 min后離心的血樣均未出現(xiàn)溶血或凝膠塊(絲)，故建議采集血樣靜置30 min后再行離心檢測，以保證變應(yīng)原檢測的順利進行和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上可知，變應(yīng)原檢測無論空腹血糖血脂正常與否均不受空腹和進餐的影響，但血樣溶血及靜置時間過短則是變應(yīng)原檢測的常見干擾因素，這就要求醫(yī)護及檢驗人員在血液標(biāo)本采集、分離、運送、保存以及檢測過程中一定要嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，從而使檢驗結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。但本研究樣本量有限，需加大樣本量進一步研究證實。