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    安順市平壩區(qū)2020年春季散養(yǎng)戶豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測分析

    2020-10-29 13:33:08班榮香
    貴州畜牧獸醫(yī) 2020年5期
    關(guān)鍵詞:平壩免疫抗體O型

    班榮香

    (貴州省安順市平壩區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心,貴州 平壩 561100)

    口蹄疫(Foot and mouth disease,F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起偶蹄動物的1種急性、熱性、高度接觸性傳染病,臨床癥狀以蹄部水皰為典型特征,發(fā)病急,傳播迅速。該病除通過感染的動物及排泄物傳播外,還能以氣溶膠的形式通過空氣遠(yuǎn)距離傳播。哺乳仔豬發(fā)病多呈急性胃腸炎和心肌炎,突然死亡,病死率可達(dá)100%[1]。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將該病列為15個A類動物疫病名單之首;我國也將其排在一類動物疫病的第1位,并規(guī)定所有生豬實行強制免疫[2,3]。平壩區(qū)用于免疫生豬的口蹄疫疫苗為O型口蹄疫合成肽疫苗,每年集中免疫時間為春、秋兩季,平時采取隨進(jìn)隨補的補免政策,最大限度保障平壩區(qū)生豬養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前生豬散養(yǎng)戶占平壩區(qū)生豬養(yǎng)殖總量的30%左右,在平壩區(qū)生豬養(yǎng)殖業(yè)中起著舉足輕重的作用。

    本次檢測對平壩區(qū)9個鄉(xiāng)鎮(zhèn)送檢的164份豬血清樣品采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(iELISA),分析豬O型口蹄疫合成肽苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫抗體水平及免疫效果,為區(qū)域疫情預(yù)警、免疫防控提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 疫苗豬O型口蹄疫合成肽疫苗(多肽TC98+7309+TC07),購自新疆天康生物技術(shù)股份有限公司(批號2019017)。

    1.1.2 血清樣品來源于平壩區(qū)9個鄉(xiāng)鎮(zhèn)82個村免疫豬O型口蹄疫合成肽疫苗的散養(yǎng)戶生豬,免疫28 d后采集豬血清樣品,每村采集2頭份,共164份。

    1.1.3 主要試劑豬O型口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體iELISA檢測試劑盒,購自無錫優(yōu)聯(lián)生物科技有限公司(批號191010)。

    1.1.4 主要儀器普通離心機(TG16B)、酶標(biāo)儀(DNM-9606)、微型振蕩器(PR-WZT-2)、恒溫培養(yǎng)箱(PR-BYX-9082)。

    1.2 方法

    1.2.1 疫苗接種春防期間各村動物防疫員統(tǒng)一對轄區(qū)村寨的生豬散養(yǎng)戶進(jìn)行豬O型口蹄疫合成肽疫苗免疫,按照說明書進(jìn)行豬耳根后肌肉注射,每頭豬注射1 mL。平壩區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心進(jìn)行入村入戶防疫督查,以確保防疫工作真實有效地開展。

    1.2.2 血清樣品采集免疫工作結(jié)束以后28 d,在鄉(xiāng)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)技術(shù)干部的指導(dǎo)下,各村動物防疫員參與,用一次性采血器隨機到各村采集免疫生豬的全血樣品,每村2頭份。然后統(tǒng)一用普通離心機1 500 r/min 離心5 min分離血清,分裝于1.5 mL EP管中,并在每份血清樣品上標(biāo)注樣品信息編號。

    1.2.3 血清免疫抗體檢測按照豬O型口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體iELISA檢測試劑盒說明書進(jìn)行。(1)血清稀釋:對照血清進(jìn)行1∶4稀釋,待檢血清進(jìn)行1∶40稀釋。(2)洗滌抗原包被板:洗滌液按照1∶20倍稀釋進(jìn)行配制,根據(jù)檢測樣品數(shù)量取出對應(yīng)的檢測板條共計172孔,每孔加入稀釋好的工作洗滌液200 μL,重復(fù)洗板2次,最后1次在吸水材料上拍干。(3)加陰性、陽性對照血清:陰性、陽性對照各設(shè)2孔,每孔加入對照血清100 μL。(4)加待檢血清:每份待檢血清樣品設(shè)立1孔,每孔加入待檢血清100 μL。(5)振勻:將反應(yīng)板放置于微型振蕩器上輕輕振蕩混勻。(6)溫育:反應(yīng)板置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱溫育30 min。(7)洗板:甩掉孔中的反應(yīng)液,每孔加入稀釋好的工作洗滌液 200 μL,重復(fù)洗板5次,最后1次在吸水材料上拍干。(8)加酶標(biāo)二抗:每孔加入酶標(biāo)二抗100 μL。(9)二次溫育:反應(yīng)板置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中溫育30 min。(10)再次洗板:甩掉孔中的反應(yīng)液,每孔加入稀釋好的工作洗滌液200 μL,重復(fù)洗板5次,最后1次在吸水材料上拍干。(11)加顯色液:每孔先加入顯色液A 50 μL,再加入顯色液B 50 μL。(12)避光顯色:輕輕振蕩混勻后,置于室溫下避光顯色10 min。(13)加終止液:每孔加入終止液50 μL。(14)結(jié)果檢測:在酶標(biāo)儀上測定各孔D630 nm值。

    試驗過程中要注意幾點:試驗用的血清必須清亮無溶血;使用血清前最好置于離心機上進(jìn)行瞬時離心,以避免打開血清管蓋時有血清樣品飛濺,造成不必要的污染;所有試劑及血清使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫(20~25 ℃);實驗結(jié)束后所有試劑耗材進(jìn)行無害化處理。

    1.2.4 結(jié)果判定

    1.2.4.1 結(jié)果的有效性判定成立條件:陽性對照與陰性對照平均D630 nm值之差>0.5(本次試驗滿足成立條件)。

    1.2.4.2 檢驗結(jié)果計算S/P=樣品D630 nm值/陽性對照平均D630 nm值

    1.2.4.3 結(jié)果判定S/P≥0.20,樣品免疫抗體判為合格;S/P<0.20,樣品免疫抗體判為不合格。

    2 結(jié)果

    根據(jù)各樣品檢測結(jié)果:154份樣品免疫抗體合格,合格率93.9%;10份樣品免疫抗體不合格,不合格率6.1%(見表1、表2)。經(jīng)計算樣品D630 nm值離散度為0.947。

    表1 各檢測樣品D630 nm值統(tǒng)計

    表2 免疫抗體判定情況

    3 結(jié)論與討論

    3.1試驗結(jié)果顯示,平壩區(qū)散養(yǎng)生豬O型口蹄疫VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體合格率為93.9%,達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定≥70%的要求,說明O型口蹄疫合成肽苗能夠誘導(dǎo)生豬產(chǎn)生較高水平的O型口蹄疫免疫抗體,具有較好的免疫保護力。

    3.2檢測樣品D630 nm值離散度(0.947)較大,說明各個體之間、各個鄉(xiāng)鎮(zhèn)之間的免疫抗體參差不齊。由于實驗室檢測均為同一人操作,且試劑為同一廠家、同一批號,可排除實驗室因素。分析抗體水平參差不齊的原因可能有以下幾點:一是各鄉(xiāng)鎮(zhèn)防疫人員技術(shù)水平不一,免疫劑量、注射方法掌握不一致;二是生豬個體之間的差異,導(dǎo)致產(chǎn)生的抗體水平各有高低;三是各鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集和保存血清情況不同,導(dǎo)致抗體水平不一[4]。

    3.3目前我國對動物疫病防治采取“預(yù)防為主、防重于治”的原則,在臨床上疫苗免疫作為預(yù)防疫病的首選[5]。近年來平壩區(qū)高度重視養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,2020—2021年將大力實施建設(shè)年出欄40萬頭生豬產(chǎn)量、年屠宰加工生豬100萬頭的養(yǎng)殖生產(chǎn)項目。因此,生豬疫病的防控顯得尤為重要,特別是對豬口蹄疫等烈性傳染病更要加強防疫和凈化。

    3.4本次檢測結(jié)果表明平壩區(qū)生豬使用O型口蹄疫合成肽苗免疫效果較好,建議以后繼續(xù)使用該疫苗。為了取得更好的免疫效果,減少個體之間的免疫水平差異,在今后的防疫工作中要做到以下幾點:一是從上至下要做好防疫實戰(zhàn)培訓(xùn),區(qū)疫控中心培訓(xùn)好鄉(xiāng)鎮(zhèn)技術(shù)干部,加強鄉(xiāng)鎮(zhèn)技術(shù)干部的理論知識和實踐操作,鄉(xiāng)鎮(zhèn)技術(shù)干部再指導(dǎo)村級防疫員更好地開展防疫工作。二是各鄉(xiāng)鎮(zhèn)技術(shù)干部具體指導(dǎo)各村級防疫員時,一定要嚴(yán)格按照免疫規(guī)范和要求進(jìn)行。三是村級防疫員在開展免疫工作的過程中要保證疫苗的免疫劑量、免疫部位準(zhǔn)確,特別要按要求保護保存好疫苗,避免疫苗失效或效價降低。四是嚴(yán)格規(guī)范采樣:用一次性采血管采血后,要在室溫下傾斜放置;有離心機的放置30 min后置于離心機中經(jīng)1 500~2 000 r/min離心5 min,分離血清;沒有離心機的則在室溫下傾斜放置2~4 h(放置過程中一定要防止陽光暴曬),待血清自然析出[6]。五是保證送檢血清樣品的質(zhì)量:血清要保證清亮無雜質(zhì)、無溶血。一旦血液中的紅細(xì)胞破裂產(chǎn)生溶血,將會影響血清中的抗體及檢測效價。

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