黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥镉行С煞謱?duì)柳黑毛蚜的殺蟲活性

田立超 胡 月 張永強(qiáng)

黃刺蛾（Monema flavescens Walker）， 屬鱗翅目（Lepidoptera） 刺蛾 科（Limacodidae），是一種危害樹木葉片的雜食性害蟲，可危害樹木種類達(dá)120種以上，重慶地區(qū)寄主主要有重陽木、紫葉李、桃等園林植物。以幼蟲取食葉肉，造成葉片孔洞、缺刻，嚴(yán)重時(shí)僅留葉柄、主脈，化蛹集中附于樹干，成蟲孵化后蛹?xì)らL(zhǎng)時(shí)間不落，嚴(yán)重影響樹勢(shì)和景觀效果[1]，長(zhǎng)江流域多1年發(fā)生2代[2]，以老熟幼蟲在樹枝或枝杈間結(jié)繭越冬。該蟲俗稱“洋辣子”[3]，幼蟲體背黑色刺毛可分泌毒液，接觸人體皮膚易導(dǎo)致過敏，造成水泡或紅腫，伴隨有強(qiáng)烈的刺痛感，嚴(yán)重者出現(xiàn)過敏性休克[4]，有報(bào)道稱空氣中飄浮的很微細(xì)毒毛，如粘附在暴露的皮膚上，也可引起痛癢、有坐立不安之感，是城市園林中的重要害蟲[5]。

1. 柳黑毛蚜危害柳樹

室外調(diào)查研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，部分植物發(fā)生黃刺蛾危害時(shí)，螨類發(fā)生率為零，而同種植株螨類發(fā)生危害時(shí)，也未見黃刺蛾危害，未發(fā)現(xiàn)兩者共同危害同一植株的案例。為探究其原因，研究團(tuán)隊(duì)利用石油醚、乙酸乙酯、丙酮等有機(jī)溶劑分別對(duì)黃刺蛾幼蟲、蛹?xì)?、成蟲蟲體進(jìn)行萃取并獲得粗提物。測(cè)定粗提物對(duì)朱砂葉螨的防控效果，結(jié)果顯示黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥飳?duì)朱砂葉螨防效達(dá)100%（48 h），LC50為200.79 mg/kg，內(nèi)含物質(zhì)具有開發(fā)成為新型殺螨劑的潛力。經(jīng)質(zhì)譜測(cè)定活性物質(zhì)分子量為263[6]（下文簡(jiǎn)稱“HC263”），后經(jīng)鑒定，該物質(zhì)屬于已知物質(zhì)，市面可得純品（白色粉狀物）。研究團(tuán)隊(duì)對(duì)該物質(zhì)開展藥效試驗(yàn)，結(jié)果顯示純品制劑對(duì)朱砂葉螨防效也可達(dá)100%（48 h）。鑒于該物質(zhì)尚無殺蟲應(yīng)用的報(bào)道，后續(xù)仍需開展大量防效實(shí)驗(yàn)，以驗(yàn)證其防控對(duì)象范圍，為后續(xù)藥劑開發(fā)提供參考。

柳黑毛蚜（Chaitophorus salinigra Shinji）（圖1）是柳科植物上的重要害蟲[7]，近年來在重慶多地發(fā)生嚴(yán)重，每年4～11月均有發(fā)生，5～10月發(fā)生量極大，常誘發(fā)嚴(yán)重的煤污病，可造成植株樹勢(shì)衰弱，景觀受損。重慶地區(qū)因柳樹樹形優(yōu)美而加大園林栽種量，柳樹又為喜濕樹種，多栽植于河道、湖泊或水源地旁，常規(guī)防控刺吸類害蟲的藥劑如內(nèi)吸性藥劑吡蟲啉、啶蟲脒等多對(duì)水生生物、蜜蜂等有較大毒害，急需可替代的綠色低毒藥劑。為進(jìn)一步驗(yàn)證“HC263”對(duì)其他害蟲類型的防治效果，拓寬其殺蟲譜的認(rèn)知，本文采用重慶地區(qū)園林常見害蟲柳黑毛蚜進(jìn)行“HC263”的殺蟲活性測(cè)定，旨在探索該物質(zhì)應(yīng)用于蚜類害蟲防控中的可能性，為后續(xù)研發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)試劑

供試藥劑：丙酮（分析純，成都市科龍化工試劑廠）；二甲苯（分析純，山東富宇化工有限公司）；石油醚（分析純，成都萬信化工有限公司）；十二烷基苯磺酸鈣（鄭州佳捷化工產(chǎn)品有限公司）；聚氧乙烯脂肪酸酯（杭州艾迪化工原料有限公司）。

供試蟲源：柳黑毛蚜，采自重慶市風(fēng)景園林科學(xué)研究院白市驛苗木基地，采集地柳樹未開展任何形式的病蟲害防控工作，采集后用新鮮柳葉飼育多代后供藥效試驗(yàn)使用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溶劑穩(wěn)定體系配制

由于溶于丙酮的HC263不能在含乳化劑水溶液中形成穩(wěn)定體系，有明顯沉淀，需先制備成制劑后進(jìn)行藥效試驗(yàn)。5%HC263乳油制備：稱取HC263粉狀物0.5 g，加入適量二甲苯進(jìn)行震蕩溶解，待溶解完全后添加0.2%十二烷基苯磺酸鈣（20 ul）、0.4%聚氧乙烯脂肪酸酯（40 ul）乳化劑，充分?jǐn)嚢栊纬扇橛?，用二甲苯補(bǔ)足溶液至10 mL，4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。將上述制備好的HC263乳油加水稀釋成5個(gè)濃度梯度，分別為10 mg/kg、20 mg/kg、50 mg/kg、80 mg/kg、100 mg/kg，每個(gè)濃度設(shè)置4個(gè)重復(fù)開展實(shí)驗(yàn)，空白對(duì)照為二甲苯。

1.2.2 生物測(cè)定

試驗(yàn)采用浸葉法（參照NY/T 1154.14-2008）測(cè)定黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥铩癏C263”對(duì)柳黑毛蚜的生物活性[8]，用毛筆將大小一致無翅蚜蟲挑入10 ml離心管中，每管20頭蟲，蓋上蓋子備用。將配制好的藥液裝入燒杯中，攪拌后選取大小一致柳樹嫩葉葉片浸漬5 s后取出，紙巾擦干后放入帶蚜蟲離心管中，置于室內(nèi)相同溫度下培養(yǎng)，分別于24 h、48 h、72 h后觀察死亡率（以毛筆尖輕觸蚜蟲，足不動(dòng)則視為死亡）。

1.2.3 藥效計(jì)算方法

根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)計(jì)算各處理的防效（校正死亡率），按下述公式計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位。

死亡率（%）=（藥前活蟲數(shù)量-藥后活蟲數(shù)量）/藥前活蟲數(shù)量×100%

校正死亡率（%）=（處理死亡率-空白對(duì)照死亡率）/（1-空白對(duì)照死亡率）×100%

數(shù)據(jù)處理?xiàng)l件：若對(duì)照死亡率＜5%，無需校正；對(duì)照死亡率在5%～20%之間，應(yīng)按上述公式進(jìn)行校正；對(duì)照死亡率＞20%，試驗(yàn)需重新進(jìn)行。

對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行方差分析(SPSS統(tǒng)計(jì)軟件)，觀察不同處理之間是否存在顯著性差異[9]。在EXCEL單元格中輸入公式或插入函數(shù)，計(jì)算毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)及致死中濃度[10]。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 提取物對(duì)蚜蟲的活性

由表1可知，不同濃度黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥镏苽涞娜橛蛯?duì)柳黑毛蚜的殺蟲活性差異明顯，其中當(dāng)黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥颒C263有效成分濃度為10～20 mg/kg時(shí)，24～72 h內(nèi)柳黑毛蚜死亡率均較低，與其他濃度防效相比存在顯著性差異；當(dāng)有效成分濃度為50 mg/kg時(shí)，柳黑毛蚜24～72 h平均死亡率分別為20.39%、40.03%和46.11%，顯著高于20 mg/kg時(shí)的處理防效，但也顯著低于80 mg/kg時(shí)處理的44.62%、68.00%和71.84%；當(dāng)有效成分濃度為100 mg/kg時(shí)，24 h柳黑毛蚜平均死亡率高于90%，48 h和72 h平均死亡率達(dá)96.23%和98.70%，均顯著高于其他處理組防效。

表1 不同濃度不同時(shí)間HC263對(duì)柳黑毛蚜的殺蟲活性

表2 不同時(shí)間提取物毒力回歸方程

2.2 殺蟲活性結(jié)果分析

黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥颒C263對(duì)柳黑毛蚜的毒力回歸方程和致死中濃度見表2，由表可知，黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥颒C263對(duì)柳黑毛蚜的殺蟲活性隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸提高，不同濃度的提取物和死亡率存在相關(guān)性，且線性關(guān)系良好，說明提取物對(duì)柳黑毛蚜具有優(yōu)異的殺蟲活性，且具有一定持效性。

3 結(jié)論與討論

研究以重慶園林常見柳樹害蟲柳黑毛蚜為供試害蟲，驗(yàn)證黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥锘钚猿煞諬C263的殺蟲效果。結(jié)果表明該成分在100 mg/kg時(shí)對(duì)柳黑毛蚜有優(yōu)異的防治效果，24～72 h防效達(dá)90%以上；不同濃度提取物對(duì)柳黑毛蚜的殺蟲活性差異明顯，高濃度時(shí)前期防效接近100%，低濃度則無明顯防效，與常規(guī)藥劑防效緩慢提高明顯不同，這可能是由于該物質(zhì)殺蟲原理與常規(guī)藥劑不同，需進(jìn)一步研究加以明確。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明HC263有望作為新的生物源農(nóng)藥或先導(dǎo)化合物用于藥劑開發(fā)，進(jìn)而應(yīng)用于病蟲害防控[11-12]。但本研究?jī)H為實(shí)驗(yàn)室藥效試驗(yàn)的結(jié)果，尚缺乏野外實(shí)驗(yàn)佐證，該物質(zhì)在露天環(huán)境中的防控效果尚不得知，是否受光照、雨水、周邊環(huán)境、植物種類的影響需進(jìn)一步驗(yàn)證。

本實(shí)驗(yàn)所用的HC263純品為R36/37/38物質(zhì)，根據(jù)《GB13690-2009化學(xué)品分類和危險(xiǎn)性公示 通則》，該物質(zhì)對(duì)哺乳動(dòng)物的眼睛、呼吸道和皮膚有刺激作用，后期仍需對(duì)該物質(zhì)的環(huán)境毒理進(jìn)行研究，明確哺乳動(dòng)物可接受劑量及對(duì)環(huán)境中不同類型生物的影響。

試驗(yàn)過程中還發(fā)現(xiàn)，黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥镉行С煞挚扇苡诒?、二甲苯等有機(jī)溶劑，但丙酮處理組在注入含乳化劑水中時(shí)產(chǎn)生了明顯沉淀，不能形成穩(wěn)定的溶液體系，故本研究未采用丙酮處理樣本進(jìn)行藥效試驗(yàn)。該細(xì)節(jié)說明提取物的有效成分溶解規(guī)律與常規(guī)化合物不同，后期藥劑開發(fā)需著重研究劑型加工工作，以期促進(jìn)該物質(zhì)在水溶液中穩(wěn)定分散，發(fā)揮防效。

本研究證實(shí)了黃刺蛾蛹?xì)ぬ崛∥镏械挠行Ⅱ煞諬C263對(duì)柳黑毛蚜具有極佳的防效，豐富了其殺蟲譜，為后續(xù)新型殺蟲劑的開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。但本文僅為實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)的防效驗(yàn)證結(jié)果，仍然需要大田實(shí)驗(yàn)和環(huán)境評(píng)價(jià)、毒理實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證[13]；與此同時(shí)，如何將HC263形成穩(wěn)定的溶液體系也是一個(gè)亟需解決的問題，也是未來該物質(zhì)能否成功被開發(fā)為新型殺蟲劑的關(guān)鍵。