血清淀粉樣蛋白A 對小膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響及機(jī)制研究

林愛花，劉 錦，陳巖青，張 巖，于 洋*

（1上海交通大學(xué)藥學(xué)院，上海200240；2上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院上海市腫瘤研究所，癌基因與相關(guān)基因國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200240）

阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）是一種典型的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。腦內(nèi)細(xì)胞外聚集的老年斑（以β amyloid，即Aβ為主要成分）和細(xì)胞內(nèi)聚集的神經(jīng)纖維纏結(jié)（主要由過度磷酸化的Tau蛋白構(gòu)成）是AD的兩大病理特征［1-2］。近年來，不斷增加的研究數(shù)據(jù)表明，腦內(nèi)的炎癥反應(yīng)也參與了AD的整個(gè)病理進(jìn)程［3-4］。小膠質(zhì)細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮重要免疫作用。在AD患者腦內(nèi)，小膠質(zhì)細(xì)胞遷移并募集在Aβ斑塊周圍，發(fā)揮免疫功能［5］。血清淀粉樣蛋白A（serum amyloid A，SAA）被認(rèn)為是主要的急性期反應(yīng)蛋白。當(dāng)機(jī)體被感染和受到傷害時(shí)，其在外周血漿中的濃度可增加1 000倍［6］。SAA具有細(xì)胞因子樣特性，參與著機(jī)體的各種炎癥反應(yīng)［7-8］。SAA的免疫功能在外周系統(tǒng)研究較多，但在腦內(nèi)研究較少。因此，為探究SAA是否參與小膠質(zhì)細(xì)胞在AD中的免疫反應(yīng)，本研究探索了SAA對小膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響及其作用機(jī)制，為AD治療及預(yù)防提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑

鼠源小膠質(zhì)細(xì)胞系N9（上海生物科學(xué)研究院）；Dulbecco's modified Eagle's medium（DMEM）培養(yǎng)基、Iscove's modified Dulbecco's medium（IMDM）培養(yǎng)基、胰酶、胎牛血清（美國Gibco公司）；脂 多 糖（lipopolysaccharide，LPS）（來 源Escherichia coli0111：B4）、WRW4肽、TLR2中和抗體、多聚賴氨酸、ERK抑制劑PD98059、p38抑制劑SB203580、JNK 抑制劑 SP600125、NF-κB 抑制劑SN50（美國Sigma公司）；重組人apo-SAA蛋白（美國PeproTech公司）；TRIzol試劑（美國Invitrogen公司）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)熒光PCR試劑（日本東洋紡公司）；Transwell小室、Falcon?40 μm細(xì)胞過濾網(wǎng)（美國Corning公司）；結(jié)晶紫粉末（上海生工生物技術(shù)有限公司）；RIPA細(xì)胞裂解液（碧云天生物技術(shù)研究所）；Western blot第二抗體IRDye?800CW、IMDye?800CW（美國LI-COR公司）；Western blot所需第一抗體如表1所示。其他試劑均為市售分析純。

1.2 儀器

解剖鏡（Olympus SZX7，日本奧林巴斯公司）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀器（美國ABI公司）；蛋白免疫印跡電泳系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司）；Odyssey P140-CLx紅外熒光掃描成像系統(tǒng)（美國Gene公司）。

Table 1 Primary antibodies used in Western blot

2 方 法

2.1 小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞分離及培養(yǎng)和鼠源N9小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)

原代小膠質(zhì)細(xì)胞分離及培養(yǎng)方法參考文獻(xiàn)報(bào)道［9］，取新生1天（不超過24 h）的野生型小鼠，去掉腦殼、中腦、嗅球，去除包裹皮層的膜與胼胝體等。隨后將皮層組織盡量剪碎，胰酶進(jìn)行消化處理后，加入含10%FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL硫酸鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基平鋪在多聚賴氨酸包被的75 cm2的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。第1天和第3天時(shí)分別更換新的DMEM培養(yǎng)基。至第7天，將培養(yǎng)瓶放入搖床中，以260 r/min轉(zhuǎn)速在37℃持續(xù)搖動(dòng)2.5 h后離心即得小膠質(zhì)細(xì)胞。N9小膠質(zhì)細(xì)胞采用含有10%FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL硫酸鏈霉素的IMDM培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。

2.2 Transwell小室檢測細(xì)胞遷移能力

取孔徑8 μm的小室，在下室加入各組溶液600 μL。收集原代小膠質(zhì)細(xì)胞和對數(shù)生長期的N9小膠質(zhì)細(xì)胞，用純培養(yǎng)基稀釋為每毫升5×105個(gè)的密度，添加200 μL到上室。對于抑制劑或中和抗體預(yù)孵育的實(shí)驗(yàn)，上室細(xì)胞提前用配好的抑制劑或中和抗體溶液預(yù)孵育細(xì)胞15 min再用含有抑制劑或中和抗體的培養(yǎng)基溶液稀釋到所需密度。FPR2受體拮抗劑WRW4使用質(zhì)量濃度為1，5，10 μmol/L；TLR2中和抗體Anti-mTLR2-IgG使用濃度為 0.1，0.5，1 μg/mL。ERK 抑制劑 PD98059、p38抑制劑SB203580和JNK抑制劑SP600125使用濃度均為20 μmol/L；NF-κB抑制劑SN50使用濃度為10 μmol/L。原代小膠質(zhì)細(xì)胞放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h，N9小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)6 h后取出小室。PBS溶液洗滌，浸泡于甲醇溶液15 min，隨后用結(jié)晶紫染色30 min。用PBS清洗膜，擦除膜上層細(xì)胞。進(jìn)行了3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，每個(gè)樣本取3個(gè)視野在顯微鏡下進(jìn)行觀察和拍照。

2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測FPR2和TLR2的mRNA表達(dá)

用1 μmol/L SAA刺激N9小膠質(zhì)細(xì)胞1，3，6，9和12 h。Trizol法提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA和qRT-PCR反應(yīng)具體操作均按照說明書進(jìn)行。PCR條件設(shè)定為預(yù)變性94℃3 min，94℃30 s，56℃退火45 s，72℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)，接著再72℃10 min。 基因 表達(dá) 的結(jié) 果計(jì) 算 采用 2-ΔΔCt法 ，以GAPDH的mRNA表達(dá)作為內(nèi)參。基因的引物序列如表2所示。

Table 2 Primer sequences used for qRT-PCR

2.4 Western blot檢測MAPKs和NF-κB信號通路激酶表達(dá)

用1 μmol/L SAA刺激N9小膠質(zhì)細(xì)胞1，5，15，30，60 min后，收集各組細(xì)胞，然后采用RIPA裂解細(xì)胞。用10%濃度凝膠進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳，電泳結(jié)束后使用NC膜進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉在室溫條件進(jìn)行1 h封閉，分別加入一抗溶液（p-ERK1/2、ERK、p-p38、p38、p-JNK、JNK、IkBα和GAPDH），稀釋比例均為1∶1 000，4℃孵育過夜。第2天采用TBST漂洗，加入對應(yīng)二抗溶液（IRDye?800CW和IMDye?800CW），避光于搖床上室溫孵育1 h。洗膜后使用紅外熒光掃描成像系統(tǒng)曝光及保存圖片。進(jìn)行了兩次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用ImageJ Launcher對拍攝的圖片進(jìn)行分析和定量；使用GraphPad Prism 6軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果為-x±s，組間比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 SAA誘導(dǎo)原代小膠質(zhì)細(xì)胞和N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移

采用Transwell檢測SAA對原代小膠質(zhì)細(xì)胞和N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移能力影響。結(jié)果顯示，SAA以濃度依賴性方式促進(jìn)原代小膠質(zhì)細(xì)胞和N9小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移，1 μmol/L SAA的作用效果最強(qiáng)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因?yàn)橹亟M蛋白SAA含有微量LPS（小于1.2 ng/mL），因此為排除SAA內(nèi)LPS的干擾，本研究設(shè)計(jì)了高于此劑量的LPS（2.5 ng/mL）作為對照組。結(jié)果顯示此劑量的LPS對小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移并沒有影響（圖1），說明SAA對小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移作用并沒有LPS的參與。

Figure 1 Serum amyloid A(SAA)induces migration of primary microglia and N9 microglia(-x ± s,n=9）A:Primary cultures of microglia and N9 microglia was treated with SAA(0.1-1 μmol/L)or LPS(2.5 ng/mL),and the migration was detected by Transwell assay;B:Quantitative analysis of SAA-induced migration of primary microglia;C:Quantitative analysis of SAA-induced migration of N9 microglia

3.2 FPR2受體拮抗劑和TLR2中和抗體抑制了SAA誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移

因?yàn)镕PR2和TLR2是SAA的兩個(gè)主要受體，為驗(yàn)證SAA誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移是否通過這兩個(gè)受體，本研究加入FPR2受體拮抗劑WRW4和TLR2中和抗體檢測SAA對N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移能力影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)1，5，10 μmol/L的WRW4均能抑制SAA誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移（圖2-A，B）。TLR2中和抗體也以濃度依賴性方式抑制SAA誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移，1 μg/mL SAA的作用效果最強(qiáng)（圖2-C，D）。組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此結(jié)果說明SAA通過作用FPR2和TLR2這兩種受體誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移。

3.3 SAA誘導(dǎo)N9小膠質(zhì)細(xì)胞FPR2和TLR2受體轉(zhuǎn)錄水平增加

此外，本研究進(jìn)一步檢測SAA是否對這兩種受體的表達(dá)有影響。使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測SAA對N9小膠質(zhì)細(xì)胞FPR2和TLR2受體mRNA表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SAA能夠顯著誘導(dǎo)N9小膠質(zhì)細(xì)胞FPR2和TLR2 mRNA轉(zhuǎn)錄水平的增加，特別是FPR2受體。SAA誘導(dǎo)FPR2受體轉(zhuǎn)錄水平呈漸進(jìn)式的升高，在9 h達(dá)到頂點(diǎn)，增加了約70倍（圖3）。而SAA對TLR2的表達(dá)誘導(dǎo)呈山峰狀，在6 h達(dá)到峰值，增加了約12倍（圖3）。LPS也誘導(dǎo)了這兩個(gè)受體轉(zhuǎn)錄水平微量的增加，但增加的程度遠(yuǎn)小于SAA的作用，特別是對于FPR2受體（圖3）。這個(gè)結(jié)果說明SAA能夠顯著誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞FPR2和TLR2受體的表達(dá)，且對FPR2受體表達(dá)的誘導(dǎo)作用更強(qiáng)。

3.4 SAA激活N9小膠質(zhì)細(xì)胞MAPKs和NF-κB信號通路

因?yàn)镕PR2和TLR2受體激活能夠誘導(dǎo)下游絲裂原激活的蛋白激酶（MAPKs）和核因子κB（NF-κB）信號通路變化，因此采用Western blot檢測SAA對N9小膠質(zhì)細(xì)胞MAPKs和NF-κB信號通路的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SAA能夠顯著增加細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、p38和c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化水平，降低I?Bα表達(dá)水平，并且在15 min作用最明顯（圖4）。這個(gè)結(jié)果說明SAA能夠激活N9小膠質(zhì)細(xì)胞下游MAPKs和NF-κB信號通路。

Figure 2 FPR2 antagonist and TLR2 neutralizing antibody inhibit SAA-induced migration of N9 microglia(-x ± s,n=9）A,B:Effect of FPR2 antagonist(WRW4)on SAA-induced migration of N9 microglia was detected by Transwell assay.(a)Control;(b)1 μmol/L SAA;(c)1 μmol/L WRW4+1 μmol/L SAA;(d)5 μmol/L WRW4+1 μmol/L SAA;(e)10 μmol/L WRW4+1 μmol/L SAA;(f)10 μmol/L WRW4;(g)2.5 ng/mL LPS;(h)10 μmol/L WRW4+2.5 ng/mL LPS.C,D:Effect of TLR2 neutralizing antibody on SAA-induced migration of N9 microglia was detected by Transwell assay.(a)Control;(b)1 μmol/L SAA;(c)0.1 μg/mL Anti-mTLR2-IgG+1 μmol/L SAA;(d)0.5 μg/mL Anti-mTLR2-IgG+1 μmol/L SAA;(e)1 μg/mL Anti-mTLR2-IgG+1 μmol/L SAA;(f)1 μg/mL IgG+1 μmol/L SAA;(g)1 μg/mL Anti-mTLR2-IgG;(h)2.5 ng/mL LPS;(i)1 μg/mL Anti-mTLR2-IgG+2.5 ng/mL LPS.

Figure 3 SAA increases the mRNA levels of FPR2(A)and TLR2(B)in N9 microglia(-x ± s,n=4）

3.5 p38、JNK及NF-κB信號通路參與了SAA誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移

Figure 4 SAA activates MAPKs and NF-κB signaling pathways in N9 microglia(-x ± s,n=2)A:Effect of SAA on the phosphorylation levels of MAPKs and NF-κB signaling pathway kinases in N9 microglia was examined by Western blot;B:Quantitative analysis of SAA-induced changes in the phosphorylation of ERK;C:Quantitative analysis of SAA-induced changes in the phosphorylation of p38;D:Quantitative analysis of SAA-induced changes in the phosphorylation of JNK;E:Quantitative analysis of SAA-induced changes in the expression of I?Bα

為驗(yàn)證SAA誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移是否通過MAPKs和NF-κB信號通路，采用MAPKs和NF-κB信號通路抑制劑檢測SAA對N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移能力影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ERK抑制劑PD98059不能有效抑制SAA誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移。而p38抑制劑SB203580、JNK抑制劑SP600125及NF-κB抑制劑SN50均可以顯著抑制SAA誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移（圖5）。組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此結(jié)果說明SAA通過激活p38、JNK及NF-κB信號通路誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移。

Figure 5 Inhibitor of p38，JNK，or NF-κB inhibits SAA-induced migration of N9 microglia(-x ± s,n=9）A,B:Effect of inhibitors of MAPKs(ERK,p38,and JNK)and NF-κB on SAA-induced migration of N9 microglia was detected by Transwell assay.(a)Control group;(b)1 μmol/L SAA;(c)20 μmol/L PD98059+1 μmol/L SAA;(d)20 μmol/L SB203580+1 μmol/L SAA;(e)20 μmol/L SP600125+1 μmol/L SAA;(f)10 μmol/L SN50+1 μmol/L SAA;(g)20 μmol/L PD98059;(h)20 μmol/L SB203580;(i)20 μmol/L SP600125;(j)10 μmol/L SN50

4 討論

外周血液循環(huán)中的血清淀粉樣蛋白A主要是由急性期反應(yīng)中的肝細(xì)胞合成的，而在肝外產(chǎn)生的SAA被認(rèn)為與包括AD在內(nèi)的慢性炎癥疾病更為相關(guān)［10］。然而，目前關(guān)于SAA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中的作用研究較少。本研究中，采用重組蛋白SAA作用小膠質(zhì)細(xì)胞，證明SAA能夠通過FPR2、TLR2受體，激活MAPK和NF-κB信號通路，進(jìn)而促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移。這些結(jié)果為SAA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥性疾病中的作用提供了新的證據(jù)。

有研究報(bào)道AD患者腦脊液中SAA的濃度顯著高于正常對照組［11］。免疫組織化學(xué)方法檢測結(jié)果表明SAA與Aβ斑塊共定位［12］。而且，SAA轉(zhuǎn)基因小鼠在誘導(dǎo)全身性急性期反應(yīng)后增加了淀粉樣蛋白的沉積［13］。最近有研究表明，SAA和AD小鼠記憶衰退有關(guān)［14-15］。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，SAA刺激能夠激活原代小膠質(zhì)細(xì)胞，劑量依賴性地增強(qiáng)小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖能力，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞凋亡［9］。小膠質(zhì)細(xì)胞在中樞免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。在AD患者腦內(nèi)，小膠質(zhì)細(xì)胞通過遷移圍繞在Aβ斑塊附近，發(fā)揮免疫反應(yīng)，吞噬和釋放炎癥因子等［5］。然而，并沒有研究報(bào)道SAA對膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響。因此，本研究中首先探究了SAA是否影響小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SAA能夠以濃度依賴性方式促進(jìn)原代小膠質(zhì)細(xì)胞和N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移（圖1）。之前的研究顯示SAA具有趨化因子特性。SAA對人單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、未成熟樹突狀細(xì)胞、T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和滑膜成纖維細(xì)胞有明顯的趨化作用［16］。并且，小鼠皮下注射SAA可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞顯著募集到注射部位，表明SAA趨化特性［17］。本研究的結(jié)果首次表明，SAA對腦內(nèi)的小膠質(zhì)細(xì)胞也具有趨化遷移的作用。

研究表明SAA可以與多種受體結(jié)合，產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)功能。對于中性粒細(xì)胞，SAA可以結(jié)合其細(xì)胞表面的FPR2和TLR2受體，進(jìn)而激活細(xì)胞內(nèi)的 MAPKs、PI3K 和 NF-κB 等信號通路［18-19］。例如，SAA通過結(jié)合FPR2可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞遷移，也可以增加趨化因子表達(dá)進(jìn)而結(jié)合TLR2受體協(xié)同增強(qiáng)誘導(dǎo)白細(xì)胞遷移的能力［20］。因此，采用這兩種受體的拮抗劑和/或中和抗體，發(fā)現(xiàn)它們均能有效抑制SAA誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移。這些結(jié)果表明SAA通過FPR2和TLR2受體促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞遷移。此外，本研究還驗(yàn)證了SAA對N9小膠質(zhì)細(xì)胞FPR2和TLR2受體表達(dá)，即其mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SAA能夠促進(jìn)N9小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)這兩種受體mRNA轉(zhuǎn)錄水平的增加（圖3）。本課題組之前的研究也表明SAA能誘導(dǎo)原代小膠質(zhì)細(xì)胞這兩種受體轉(zhuǎn)錄水平的增加［9］，提示SAA還能夠通過誘導(dǎo)這兩種受體表達(dá)增加，進(jìn)一步增強(qiáng)其對小膠質(zhì)細(xì)胞遷移的促進(jìn)作用。

此外，本研究還檢測了SAA對N9小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)MAPKs和NF-κB信號通路的影響。已有研究報(bào)道細(xì)胞遷移與MAPKs和NF-κB通路的激活密切相關(guān)。表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）和產(chǎn)促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞受體結(jié)合蛋白（erythropoietin-producing hepatocellular receptor interacting protein B1，ePhin B1）誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移與JNK信號通路活化密切相關(guān)［21-22］。p38的特異性抑制劑SB203580和SB202190能夠有效抑制由血小板源性生長因子（platelet-derived growth factor，PDGF）、轉(zhuǎn) 化 生 長 因 子 β（transforming growth factor β，TGFβ）和白介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞遷移［23］。ERK通路抑制劑PD98059和U0126則可抑制細(xì)胞基質(zhì)蛋白對不同類型細(xì)胞的遷移［21］。NF-κB對于激活素誘導(dǎo)的大腸癌細(xì)胞遷移至關(guān)重要［24］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)SAA能夠激活N9小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)MAPKs（ERK、p38和JNK）和NF-κB信號通路，表明SAA可能通過這些信號通路誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞遷移。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，p38、JNK及NF-κB信號通路抑制劑能夠顯著抑制SAA誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞遷移，提示SAA通過激活這些信號通路誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移。未來的研究中，將通過體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探究SAA如何通過影響小膠質(zhì)細(xì)胞遷移參與AD的病理進(jìn)程。此外，有研究表明MAPKs和NF-κB信號通路的激活能夠誘導(dǎo)FPR2和/或 TLR2 受體表達(dá)上調(diào)［25-26］。因此，SAA誘導(dǎo)這兩種受體表達(dá)增加可能與其激活的下游MAPKs和NF-κB信號通路有關(guān)，但具體的相關(guān)機(jī)制還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

綜上所述，本研究首次發(fā)現(xiàn)SAA能夠促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移，其機(jī)制是通過作用于其細(xì)胞表面的FPR2和TLR2受體，激活下游的MAPKs和NF-κB信號通路。SAA還通過增加這兩種受體的表達(dá)，進(jìn)一步促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞遷移。本課題組之前的研究發(fā)現(xiàn)，SAA刺激小膠質(zhì)細(xì)胞釋放的白介素 10（interleukin-10，IL-10）能夠降低原代培養(yǎng)神經(jīng)元由于LPS引起的Tau蛋白過度磷酸化［27］。這些研究結(jié)果表明SAA可以通過調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞參與AD中的神經(jīng)炎癥反應(yīng)，提示SAA可作為AD治療和預(yù)防的一個(gè)重要的潛在靶點(diǎn)。