雪文晶 鄭田恬 張 黎
( 寧夏大學農(nóng)學院,寧夏 銀川 750021)
四季海棠(Begonia Semperflorens),又稱瓜子海棠、玻璃翠。為秋海棠科(Begoniaceae),秋海棠屬,多年生草本花卉,屬須根海棠類。其花期長,花色豐富,株姿秀美,極具觀賞價值。由于四季海棠不易結(jié)實,莖段扦插生根較慢,繁殖率又低。因此,通過組織培養(yǎng)快速繁育四季海棠種苗對其資源保護及可持續(xù)利用具有重要意義。
近年來,國內(nèi)外對于四季海棠組織培養(yǎng)的研究主要集中于最佳植物生長調(diào)節(jié)劑配比篩選方面[1-3],采用的基本培養(yǎng)基為前人研究固定的MS、1/2MS 配方[3],而很少有對組織培養(yǎng)所需大量元素精細化的研究,缺乏對其組培階段大量元素需求的精細化研究數(shù)據(jù);采用不同種類和濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑有助于提高四季海棠不定芽和叢生芽分化率,但隨著植物生長調(diào)節(jié)劑濃度的增加,四季海棠生長受到抑制,并容易出現(xiàn)卷葉、矮化等畸變現(xiàn)象,甚至枯萎死亡。有研究表明,適宜的N、P、K 營養(yǎng)含量也可以提高組培苗的質(zhì)量,縮短育苗周期,同時有利于組培苗的生長[4-5]。目前,極少有培養(yǎng)基中N、P、K 營養(yǎng)含量對四季海棠組培苗生長影響的相關報道。本試驗以四季海棠組培苗為材料,采用單因素和正交試驗,研究不同N、P、K 用量對四季海棠組培苗生長的影響,探討其對營養(yǎng)元素的需求,為完善其組培快繁技術及提高田間施肥管理水平提供參考依據(jù)。
試驗材料來源于寧夏賀蘭園藝產(chǎn)業(yè)園科研大樓組培室生長健壯的四季海棠組培苗。
選取基本培養(yǎng)基為MS 培養(yǎng)基,添加6-BA 0.1 mg/L,NAA 0.05 mg/L,瓊脂6 g/L,蔗糖30 g/L[6]。將四季海棠組培苗接種于培養(yǎng)基,每瓶接種3 株,每個處理接種10 瓶,3個重復,培養(yǎng)50 d后測定各處理植株的株高,葉片數(shù),根數(shù),增殖系數(shù),鮮質(zhì)量等指標。
1.2.1 N、P、K 素水平單因素試驗
本試驗通過調(diào)整(NH4)2SO4和KNO3濃度設置5個N 素水平,分別為低N(1 、2 mmol/L),中N(5 、10 mmol/L),高N(35 mmol/L)。分別標記N1、N2、N3、N4、N5。調(diào)整KH2PO4濃度設置3個水平(0.3、0.6、1.2 mmol/L)。分別標記P1、P2、P3。調(diào)整KNO3和KH2PO4濃度設置3個水平(4、5、6 mmol/L)。分別標記K1、K2、K3。
1.2.2 正交試驗
以1.2.1 試驗結(jié)果為基礎,以N、P、K 濃度為變量,設3 因素3 水平正交試驗,見表1。
表1 培養(yǎng)基N、P、K 水平Table 1 Concentration of N, P and K in medium
1.2.3 統(tǒng)計分析
數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0 進行方差分析,鄧肯新復極差法。
由表2 可以看出,N 素對四季海棠不同部位的生長均有不同的影響,且差異性各不相同。株高、葉片、根數(shù)、增殖系數(shù)、鮮質(zhì)量在低N 水平時差異均不顯著;當N 素水平達到中N 水平時,除增殖系數(shù)和鮮質(zhì)量外,株高、葉片和根數(shù)均表現(xiàn)出顯著差異;當N 素水平達到高N 水平時,與中N 水平相比,差異顯著;隨著N 素濃度的增加,株高、葉片數(shù)、增殖系數(shù)均呈現(xiàn)先增高后降低的趨勢,株高和增殖系數(shù)在N4水平下達到最高,而葉片數(shù)在N3水平下達到最大;根數(shù)和鮮質(zhì)量隨著N 素濃度的增加呈現(xiàn)先降低后增高的趨勢,在N4水平下達到最高;綜上所述,N4水平下四季海棠組培苗生長最好。
表2 不同N 素水平對四季海棠組培苗生長的影響Table 2 Effects of different N levels on the growth of B. semperflorens tissue culture seedlings
由表3 可以看出,P 素水平對四季海棠組培苗的葉片數(shù)、根數(shù)和鮮質(zhì)量有顯著影響,而對株高、增殖系數(shù)無顯著影響。隨著P 素含量的增加,葉片數(shù)、根數(shù)和鮮質(zhì)量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,在P2水平下達到最高。綜上所述,P2水平下四季海棠組培苗的生長情況最好。
表3 不同P 素水平對四季海棠組培苗生長的影響Table 3 Effects of different P levels on the growth of B. semperflorens tissue culture seedlings
由表4 可以看出,K 素水平對于四季海棠組培苗的增殖系數(shù)無顯著影響,而對于株高、葉片數(shù)、根數(shù)和鮮質(zhì)量有顯著影響。隨著K 素含量的增加,四季海棠組培苗的株高、葉片數(shù)、根數(shù)都呈現(xiàn)下降的趨勢;而鮮質(zhì)量隨著K 素含量的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。綜合分析K 素對四季海棠組培苗各部分的影響,發(fā)現(xiàn)K1水平下組培苗的生長情況最好。
表4 不同K 素水平對四季海棠組培苗生長的影響Table 4 Effects of different K levels on the growth of B. semperflorens tissue culture seedlings
如表5,根據(jù)1.2.1 實驗結(jié)果,設計3 因素3 水平正交試驗,試驗結(jié)果如下:不同N、P、K 水平組合對株高的影響:處理1、2 對比差異不顯著;處理3、4、5、6、8、9 對比差異不顯著,而 處理7 與1、2、4、5、6、8、9 對比 差異顯著;處理1、2 與處理3、4、5、6、8、9 對比差異顯著。
表5 不同水平N、P、K 組合對四季海棠組培苗生長影響的正交分析結(jié)果Table 5 Orthogonal analysis of the effects of different levels of N, P, K combinations on the growth of B. semperflorens tissue culture seedlings
不同N、P、K 水平組合對于葉片數(shù)的影響:處理6 和處理1、5 相比差異顯著,而處理6 與處理2、3、4、7、8、9 相比差異不顯;處理1 和處理5 相比差異不顯著。不同處理對根數(shù)的影響:處理4 與處理5、6、7、8、9 相比無顯著差異,而處理1、2、3、4 之間差異顯著;處理1、2、3 與處理4、5、6、7、8、9 相比差異顯著。各處理對于增殖情況的影響差異較大,處理1 與處理6 相比差異不顯著;處理3 和處理4 相比差異不顯著;處理5、7、8 相比差異不顯著;處理1、6,處理3、4,處理5、6、7,處理2,處理9 之間相比差異顯著。
對于鮮質(zhì)量,處理1、5、8、9 之間差異不顯著;處理2、6 之間差異不顯著;處理3、4 之間差異不顯著;處理5、7、8 之間差異不顯著;而處理1 和9 與處理2 和6 與處理3 和4 與處理7 之間差異顯著。
極差分析結(jié)果(表6)表明,N 元素對四季海棠組培苗株高、增殖系數(shù)和植株鮮質(zhì)量的影響最大,R值均大于P、K 元素;P 元素對于葉片數(shù)的影響最大,R值明顯高于N、K 元素;K 元素對于根數(shù)的影響最大,R值明顯高于N、P 元素。
表6 不同水平N、P、K 組合對四季海棠組培苗生長的影響極差分析結(jié)果Table 6 Range analysis of the effects of different levels of N, P, K combinations on the growth of B. semperflorens tissue culture seedlings
綜合表5~6 可知,可以選出最佳的N、P、K 水平配比組合。對于N 素,其對四季海棠組培苗的株高、增殖系數(shù)和植株鮮質(zhì)量影響最大,但對葉片數(shù)和根數(shù)影響不大,當N 素水平為10 mmol/L時,四季海棠組培苗的株高最高,當N 素水平為15 mmol/L 時,增殖系數(shù)和植株鮮質(zhì)量最大因此,可以考慮組培苗增殖階段選用N 素水平15 mmol/L。對于P 素,極差分析結(jié)果顯示對于葉片數(shù)的影響排在第1,且P 素水平為0.8 mmol/L 時葉片數(shù)最多,因此考慮選取0.8 mmol/L 最佳P 素配比含量。為對于K 素,分析結(jié)果顯示對于根數(shù)的影響最大,極差分析排在第1 位,且4 mmol/L 時根數(shù)最大,因此考慮選取4 mmol/L 最佳K 素配比含量。因此,四季海棠組培苗增殖階段最佳N、P、K 水平為15、0.8、4 mmol/L。
前人對四季海棠的研究多數(shù)為組培快繁最佳植物生長調(diào)節(jié)劑配比篩選和組培苗出瓶后的馴化苗,極少有對組培階段大量元素需求的研究報道,本試驗以四季海棠組織培養(yǎng)增殖階段組培苗為試驗材料,采用單因素分析和3 因素3 水平N、P、K 元素正交試驗,探究N、P、K 元素對四季海棠組培苗生長的影響,明確其養(yǎng)分需求量。
孔德棟等[7]研究發(fā)現(xiàn)高N 可以顯著影響植物的株高,且植物會出現(xiàn)徒長現(xiàn)象,本研究中N 元素對四季海棠組培苗株高影響顯著,與上述研究結(jié)果相似,但發(fā)現(xiàn)P、K 元素對株高影響不顯著,可能是本研究所用材料與上述研究材料不同,不同植物不同生理機制不同所致。此外,本研究發(fā)現(xiàn)在一定的N 濃度范圍內(nèi),隨著N 素濃度的增加,株高、葉片數(shù)、增殖系數(shù)均呈現(xiàn)先增高后降低的趨勢。由于N 素具有加速植物生長、增加分枝及使營養(yǎng)體健壯的作用[8],因此,在組培苗分化增殖階段,適當增加培養(yǎng)基的N 含量,可以提高組培苗的增殖率,壯苗階段相對減少N 含量,可以促進植物長高,減少分蘗。王輝等[9]研究發(fā)現(xiàn),P 元素對植物的株高、莖粗等均有顯著影響。本研究結(jié)果與其不一致,極差分析結(jié)果顯示P 元素對四季海棠組培苗的葉片數(shù)有一定影響。本研究發(fā)現(xiàn)K 含量對四季海棠根數(shù)有一定的影響,因此,在四季海棠組培苗的生產(chǎn)中科適當加大K 離子含量,在大棚種植中可增施K 肥,有利于四季海棠根系發(fā)育,同時可以改善四季海棠品質(zhì)。
不同氮磷鉀配比對于不同植物生長的影響不同。劉迪等[10]研究表明仙客來(Cyclamen persicum)氮、磷、鉀組合為86.6~263.4、60~100 mg/L和250~400 mg/L 時生長效果最佳,這與四季海棠組培苗相比有所差異;劉玉艷等[11]研究表明氮、磷、鉀濃度均為100 mg/L 時可促進植株的生長;羅劍飄等[12]研究表明鐵皮石斛(Dendrobium officinale)組培苗增殖階段培養(yǎng)基中最佳氮、磷和鉀含量配比分別為60.0、1.2 mmol/L 和20.0 mmol/L,這與本試驗結(jié)果四季海棠組培苗增殖階段N、P、K 元素最佳配比有所差異;衛(wèi)晉芳[13]研究發(fā)現(xiàn):氮、磷、鉀肥施用量對彩色馬蹄蓮(Zantedeschia hybrida)苗期株高、葉片數(shù)、植株地徑及葉面積有顯著影響;廉華等[14]研究結(jié)果表明:在N 素水平為8.0 mmol/L、K 素水平為5.0~7.5 mmol/L 時,可有效提高麥瓶草(Silene conoidea)的株高、莖粗、葉長、葉寬、葉面積和根長;王素娟[15]研究結(jié)果表明N、P、K質(zhì)量濃度比為2∶1∶1 時適合赤皮青岡(Cyclobalanopsis gilva)容器苗生長;孫向麗等[16]研究表明麗格海棠(Begoniaxaelatior)的氮、磷、鉀肥利用率在不同發(fā)育階段的不同。
常規(guī)四季海棠快繁流程包括萌芽、增殖、壯苗和生根等不同階段,本研究對象為四季海棠壯苗階段的組培苗,但研究結(jié)果對快繁的其他階段也有一定參考價值,實際操作中可在本研究最佳氮、磷和鉀含量配比基礎上調(diào)整培養(yǎng)基的其他組分。
本研究結(jié)論為:1)N 元素對四季海棠組培苗株高、增殖系數(shù)和植株鮮質(zhì)量的影響最大,P 元素對于葉片數(shù)的影響最大,K 元素對于根數(shù)的影響最大。2)四季海棠組培苗增殖階段N、P、K元素最佳配比分別為15、0.8、4 mmol/L,即質(zhì)量濃度比為3.75∶2∶10。