ApoA5基因多態(tài)性與2型糖尿病血管病變的相關(guān)性研究

馮 佳，齊 婷，王述進(jìn)，左 紅

2型糖尿病是目前臨床最常見的全身代謝相關(guān)性疾病，主要是因?yàn)殚L(zhǎng)期血糖升高，而出現(xiàn)胰島素抵抗，其中血管病變作為糖尿病最常見的并發(fā)癥，是引起糖尿病足、糖尿病相關(guān)心腦血管并發(fā)癥的主要原因[1]。一旦發(fā)生糖尿病血管相關(guān)病變，可能出現(xiàn)視網(wǎng)膜動(dòng)脈、腎動(dòng)脈、冠狀動(dòng)脈及下肢血管等損傷，從而嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量，甚至危及病人生命安全[2]。雖然目前對(duì)于2型糖尿病的相關(guān)研究已經(jīng)較為深入，但針對(duì)2型糖尿病血管病變的基因?qū)用娴难芯咳韵鄬?duì)有限[3]。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)檢測(cè)載脂蛋白A5(ApoA5)-1131T>C基因多態(tài)性，探討其在正常人群、單純2型糖尿病病人以及2型糖尿病合并血管病變病人中的差異，以明確ApoA5-1131T>C基因多態(tài)性是否與2型糖尿病血管病變有關(guān)系，在分子層面探索2型糖尿病血管病變的危險(xiǎn)因素，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年1月—2018年12月西安市第九醫(yī)院收治的2型糖尿病病人為研究對(duì)象，入組前病人均簽署入組同意書，本研究申報(bào)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，診斷符合2015年中華醫(yī)學(xué)會(huì)內(nèi)分泌分會(huì)關(guān)于2型糖尿病及糖尿病血管病變?cè)\斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡18～60歲；排除合并惡性腫瘤、肺部感染、結(jié)核、免疫系統(tǒng)疾病、入組前30 d內(nèi)使用免疫抑制劑或糖皮質(zhì)激素、精神疾病、妊娠及哺乳期女性、無法配合檢查與治療者。A組(85例)為2型糖尿病合并血管病變者，B組(86例)為單純2型糖尿病者，C組(85名)為正常健康人。3組性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 3組一般資料比較

1.2 PCR反應(yīng)引物及測(cè)序 本研究ApoA5-1131T>C基因檢測(cè)引物均由上海生物工程技術(shù)有限公司提供。其引物序列為上游：5 ′-GCTGGGCTGTTGATGTTTAGA3′，下游：5′-AGAGGCAAGGTTTTCCCATAA3′。測(cè)序由chromas軟件經(jīng)ABI3730自動(dòng)測(cè)序儀進(jìn)行。

1.3 ApoA5基因結(jié)果判斷 ApoA5-1131T>C基因蛋白的主要表達(dá)產(chǎn)物位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核中，并以出現(xiàn)黃色或棕褐色染色者評(píng)定為陽性，同時(shí)依據(jù)陽性細(xì)胞出現(xiàn)的百分率及染色顏色深度行半定量分析。染色強(qiáng)度分為4級(jí)，其中無色者評(píng)定為0分，淡黃色者評(píng)定為1分，棕黃色者評(píng)定為2分，棕褐色者評(píng)定為3分，所有結(jié)果均以高倍鏡視野，隨機(jī)留取500個(gè)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行評(píng)定，無陽性表達(dá)或陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)在5%以內(nèi)者為陰性，其余評(píng)定為陽性。

1.4 觀察指標(biāo) 首先進(jìn)行ApoA5-1131T>C位點(diǎn)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，隨后了解ApoA5-1131T>C在3組的基因型及等位基因分布情況，并觀察是否發(fā)生2型糖尿病及是否發(fā)生血管病變(未發(fā)生為0，發(fā)生病變?yōu)?)與ApoA5-1131T>C基因(CC、CT、TT基因型)間是否存在關(guān)聯(lián)，分析2型糖尿病及糖尿病血管病變與ApoA5-1131T>C基因型的相關(guān)性，統(tǒng)計(jì)3組ApoA5-1131T>C基因型分布頻率。分析2型糖尿病及糖尿病血管病變與ApoA5-1131T>C基因型分布的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1 2型糖尿病及糖尿病血管病變病人ApoA5-1131T>C基因型分布 2型糖尿病病人和2型糖尿病血管病變病人中CT及TT基因型多于CC基因型(P<0.05)。詳見表2。

表2 各組ApoA5-1131T>C基因型分布 單位：例(%)

2.2 不同ApoA5-1131T>C基因型發(fā)生2型糖尿病血管病變的多因素Logistic回歸分析 以發(fā)生2型糖尿病血管病變?yōu)橐蜃兞?，行多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，ApoA5-1131T>C基因型CT及TT基因型為發(fā)生2型糖尿病血管病變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。詳見表3。

表3 不同ApoA5基因型發(fā)生2型糖尿病血管病變的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

隨著人們生活水平的提升及生活方式的改變，糖尿病的發(fā)病率明顯升高，尤其是2型糖尿病[4]，其發(fā)病存在年輕化、復(fù)雜化趨勢(shì)，病人的死亡率與致殘率均明顯升高[5]。2型糖尿病血管病變作為最常見及最嚴(yán)重的并發(fā)癥，對(duì)病人全身血管均造成嚴(yán)重影響。以往研究證明，糖尿病大血管病變存在多種影響因素，如血脂水平、血糖控制情況、攝入食物種類、家族遺傳、種族、環(huán)境、生活習(xí)慣等[6]，其中家族遺傳、種族情況等與遺傳基因密切相關(guān)[7]。但目前針對(duì)2型糖尿病血管病變基因的相關(guān)研究資料極少[8]。ApoA5被認(rèn)為是與血糖水平變化最為相關(guān)的基因之一[9]。

本研究針對(duì)2型糖尿病及糖尿病血管病變與ApoA5-1131T>C基因型分布進(jìn)行相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病病人和糖尿病血管病變病人ApoA5-1131T>C基因型分布為CT及TT基因型多于CC基因型。提示ApoA5-1131T>C基因突變者發(fā)生2型糖尿病及糖尿病血管病變的概率明顯增加。針對(duì)不同ApoA5-1131T>C基因型發(fā)生2型糖尿病血管病變的多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，CT及TT基因型為發(fā)生糖尿病血管病變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。說明2型糖尿病病人存在CT及TT基因型者，其發(fā)生血管病變的概率增加。

ApoA5-1131T>C基因位于11q23，全長(zhǎng)1 889 bp，主要編碼ApoA5[10]。以往研究證明，ApoA5與血脂水平調(diào)節(jié)存在密切相關(guān)性，同時(shí)亦與血糖調(diào)節(jié)存在一定關(guān)系[11]。考慮可能與通過ApoA5增強(qiáng)低密度脂蛋白活性，抑制ApoB和ApoC3活化[12]，促進(jìn)極低密度脂蛋白清除有關(guān)，同時(shí)有研究提示其與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展亦存在相關(guān)性[13]。另外，針對(duì)ApoA5-1131T>C基因多態(tài)性的研究提示，ApoA5-1131T/C基因多態(tài)性是最為重要的基因型改變。2型糖尿病病人有很強(qiáng)的遺傳異質(zhì)性[14]，且ApoA5-1131T>C基因多態(tài)性與2型糖尿病血管病變存在更為密切的關(guān)系[15]。

綜上所述，ApoA5-1131T>C基因多態(tài)性與2型糖尿病血管病變密切相關(guān)，存在ApoA5-1131T>C基因缺失或突變者發(fā)生血管病變的概率更高。