某地區(qū)非典型趨化因子受體1多態(tài)性與丙型病毒性肝炎易感性的研究

張樹婷 邵林楠 周世航 王 霓 肖 南 劉 銘2

（1 大連市血液中心血型室，遼寧 大連 116001；2 大連醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)教研室，遼寧 大連 116044）

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）發(fā)現(xiàn)于1989年，目前全球感染者已達(dá)到7100萬，2015年全世界新增175萬HCV感染者，這對(duì)發(fā)展中國(guó)家和發(fā)達(dá)國(guó)家都是一個(gè)嚴(yán)峻的公眾健康問題。超過70%的丙型肝炎患者會(huì)發(fā)展為慢性HCV感染者，隨著病情的進(jìn)展會(huì)繼續(xù)發(fā)展成肝硬化、肝癌甚至肝功能衰竭[1]。15%～45%的HCV感染者在未得到任何治療的情況下，可通過強(qiáng)有力的免疫反應(yīng)自動(dòng)將病毒清除。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)的HCV感染人數(shù)達(dá)2500萬，疾病流行率為0.43%～3.20%[2]。Duff y血型系統(tǒng)抗原又被稱為Duff y抗原趨化因子受體或非典型趨化因子受體1（atypical chemokine receptors，ACKR1）。ACKR1是一種主要表達(dá)于細(xì)胞膜表面的糖蛋白，在肝、脾、腎的毛細(xì)血管微靜脈，腎、肺的上皮細(xì)胞，以及小腦浦肯野細(xì)胞均有表達(dá)[3]。Duffy基因定位于1號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上，主要有3種等位基因，即FY*A、FY*B和FY*BES。核酸序列第125位的單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)（single nucleotide polymorphism，SNP）（G125A，rs12075）是引起FY*A和FY*B等位基因差異的原因[4]。而FY*BES等位基因?qū)?yīng)Fy（a-b-）基因型，是由啟動(dòng)子上游的SNP（T-33C，rs2814778）引起的[5]。紅細(xì)胞膜上的ACKR1被形象的描述為趨化因子“槽”，可與趨化因子發(fā)生交互作用，清除多余的炎性趨化因子，減少炎性趨化因子釋放到循環(huán)系統(tǒng)中，進(jìn)而發(fā)揮調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)的作用。ACKR1的SNP與許多疾病相關(guān)，如中性粒細(xì)胞減少癥、乳腺癌和惡性瘧疾等[6-8]。有研究證實(shí)，紅細(xì)胞膜上的補(bǔ)體受體與HCV相關(guān)，而ACKR1作為紅細(xì)胞膜上的另一種受體，其多態(tài)性也可能會(huì)影響HCV的易感性[9]。目前，關(guān)于ACKR1的多態(tài)性是否與HCV易感性相關(guān)的研究較少。因此，本研究旨在調(diào)查大連地區(qū)人群ACKR1多態(tài)性與HCV易感性的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年4月至2015年12月就診于大連市傳染病醫(yī)院的231例抗-HCV及丙型肝炎病毒核酸（HCV-RNA）陽(yáng)性的HCV感染者作為觀察組，選取同期239名無血緣關(guān)系的健康獻(xiàn)血者作為對(duì)照組。觀察組DNA提取采用核酸自動(dòng)純化系統(tǒng)（RBC Bioscience,Lot，型號(hào) SM-001-15102001），按照說明書嚴(yán)格操作。

1.2 ACKR1分型 ABI Prism 7300實(shí)時(shí)熒光PCR儀購(gòu)自美國(guó)Applied Biosystems公司。使用TaqMan-MGB探針實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)兩組樣本進(jìn)行ACKR1基因分型[10]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用直接計(jì)數(shù)法對(duì)ACKR1基因型頻率及基因頻率進(jìn)行計(jì)算。群體代表性檢驗(yàn)采用Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)。應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，基因型頻率及基因頻率的比較采用Fisher精確檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并計(jì)算OR值及95%CI。

2 結(jié)果

兩組ACKR1基因分型見表1。兩組ACKR1基因型分布情況符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（觀察組P=0.26；對(duì)照組P=0.84），表明選取的人群具有代表性。觀察組FY*A/FY*A、FY*B/FY*B和FY*A/FY*B的基因型頻率分別為86.1%、0%和13.9%；對(duì)照組FY*A/FY*A、FY*B/FY*B和FY*A/FY*B的基因型頻率分別為86.2%、0.4%和13.4%。兩組基因型頻率組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=1.000，OR=1.004，95%CI：0.594～1.695）。觀察組FY*A和FY*B的等位基因頻率分別為93.1%和6.9%；對(duì)照組FY*A和FY*B的等位基因頻率分別為92.9%和7.1%。兩組等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=1.000，OR=0.972，95%CI：0.589～1.603）。

表1 兩組ACKR1基因型和等位基因分布

3 討論

1950年，ACKR1被發(fā)現(xiàn)在紅細(xì)胞表面表達(dá)，屬于一種人類血型抗原。20世紀(jì)90年代，經(jīng)臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)ACKR1是白細(xì)胞介素-8和其他炎性趨化因子的受體。近些年，因ACKR1的SNP在諸多疾病中起到關(guān)鍵作用而逐漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。Jenkins等[7]研究發(fā)現(xiàn)，攜帶有等位基因FY*BES的乳腺癌患者傾向于特定的腫瘤表型，產(chǎn)生由ACKR1介導(dǎo)的腫瘤免疫應(yīng)答。He等[11]研究結(jié)果證實(shí)，ACKR1-46C/C可以增加約40%的感染1型人類免疫缺陷病毒的風(fēng)險(xiǎn)。Gai等[8]臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)Y*B攜帶者可預(yù)防嚴(yán)重惡性瘧疾。

本研究結(jié)果顯示，兩組FY*A/FY*A、FY*B/FY*B和FY*A/FY*B的基因型分布與FY*A、FY*B的等位基因分布未發(fā)現(xiàn)顯著差異。無論在觀察組還是對(duì)照組中，基因型FY*A/FY*A和等位基因FY*A頻率均占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，而基因型FY*B/FY*B是罕見的，符合亞洲人群分布特征。本研究試驗(yàn)設(shè)計(jì)是基于假設(shè)——紅細(xì)胞上補(bǔ)體受體與HCV有關(guān)[9]?？紤]到紅細(xì)胞上另一種受體ACKR1可吸附1型人類免疫缺陷病毒并轉(zhuǎn)運(yùn)給CD4+易感T細(xì)胞，所以推測(cè)ACKR1與HCV間會(huì)發(fā)生交互作用。但結(jié)果卻發(fā)現(xiàn)，觀察組和對(duì)照組中ACKR1的多態(tài)性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Lettow等[12]基于高加索人群的研究也得到了類似的結(jié)果，即ACKR1的SNP（rs12075）與HCV感染無關(guān)。由此推測(cè)，ACKR1的多態(tài)性（rs12075）不能直接影響HCV的易感性。對(duì)此結(jié)果可能的解釋是，盡管紅細(xì)胞膜上的ACKR1可與人類免疫缺陷病毒、趨化因子、瘧原蟲Duffy結(jié)合蛋白等配體發(fā)生復(fù)雜的交互作用，但不能結(jié)合HCV，其間沒有交互作用發(fā)生。

綜上所述，ACKR1的多態(tài)性（rs12075）不能直接影響HCV的易感性。但其多態(tài)性可顯著影響趨化因子在血清中的表達(dá)水平。在HCV感染過程中，CC家族的趨化因子呈高表達(dá)狀態(tài)，且與肝損傷程度有關(guān)[13]。在今后的工作中將會(huì)繼續(xù)調(diào)查ACKR1多態(tài)性與HCV病程之間是否存在相關(guān)性。