茶葉可溶性糖提取和檢測方法綜述

朱雨夢 董俊杰 金 晶 葉儉慧* 梁月榮

(1.浙江大學茶葉研究所，浙江 杭州 310058;2.浙江駱駝九宇有機食品有限公司，浙江 杭州 310000; 3.浙江省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心)

1 前言

茶葉中的可溶性糖是茶湯的主要呈味物質(zhì)，賦予茶湯甜醇的味道，而且在茶葉加工過程中可溶性糖與氨基酸或蛋白質(zhì)等發(fā)生美拉德反應(yīng)，生成糠醛類衍生物和吡咯類、吡嗪類等重要香氣物質(zhì)[1]，因此，茶樹葉片的可溶性糖組成與茶葉品質(zhì)密切相關(guān)。此外，可溶性糖作為茶樹重要的初生代謝產(chǎn)物，不僅是茶樹次生代謝產(chǎn)物的主要前體物質(zhì)，而且可作為信號分子參與調(diào)節(jié)茶樹的多項生命活動，如脅迫響應(yīng)、病原體防御、活性氧清除等[2-4]。茶葉中的可溶性糖組分主要有單糖和雙糖，其中單糖以葡萄糖、半乳糖、甘露糖和果糖最為常見。蔗糖是茶葉中的最主要的雙糖，加工過程中還存在少量麥芽糖。此外，茶葉中還存在少量的三糖和四糖，如棉子糖和水蘇糖[5]。茶葉中可溶性糖的組成差異較大，這與茶樹品種、生長環(huán)境、采摘標準和茶葉的加工工藝有關(guān)。目前，茶葉中可溶性糖的檢測方法主要有酶法、高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、薄層色譜法、毛細管電泳法等[6]。本文就茶葉中可溶性糖的提取方法和檢測技術(shù)手段進行綜述。

2 可溶性糖的提取方法

可溶性糖的提取方法主要包括純水提取以及乙醇溶液提取。劉廣平采用水解法、乙醇提取法以及改良乙醇提取法對繡球的可溶性糖進行提取，用HPLC進行測定，最終結(jié)果顯示乙醇提取法比水解法穩(wěn)定性好[7]。乙醇提取法中乙醇的濃度在一定程度上會影響可溶性糖的提取效果。馮仁軍等研究表明采用80%乙醇溶液從香蕉果肉中提取可溶性糖的效果最好，而50%乙醇溶液從果皮中提取可溶性糖效果最好[8]。

此外，提取條件也是影響因素之一。王文杰以80%乙醇為提取劑，采用超聲提取法和水浴提取法提取紅松樹干的可溶性糖，結(jié)果顯示超聲提取法較水浴提取法所得的可溶性糖含量更高[9]。王川丕以純水為提取劑分別采用超聲波輔助提取法和加熱提取法制備樣品溶液，提取效果較為接近，相比較之下超聲波輔助提取法更簡單方便。除此之外，料液比、溫度和時間也會對提取效果造成影響[10]。

3 檢測方法

用于茶葉中可溶性糖組分的檢測方法主要有薄層色譜法、酶法、高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法以及毛細管電泳法。以下將對這些方法進行介紹。

3.1 薄層色譜法

薄層色譜法(TLC)分析單糖組成，其原理是不同單糖經(jīng)顯色后顯示出不同顏色的條帶，分離度較高時能被區(qū)分，TLC法對設(shè)備要求不高、操作簡單、成本低廉，是簡便的定性、半定量分析方法[7]，但精密度和準確度略差，故應(yīng)用范圍較窄。

鄧國棟等采用TLC法研究茶葉多糖提取物中的單糖組成，采用雙波長薄層掃描儀，設(shè)定510 nm為測定波長，610 nm為參比波長，用于定量分析，并對展開劑進行了優(yōu)化。D-阿拉伯糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖在此測定條件下呈良好的線性關(guān)系。四種糖的回收率均在94%以上，相對標準差在3%左右，表明回收率較高，精密度良好。最終實驗測定得到多糖提取物的單糖組成比例為阿拉伯糖∶葡萄糖∶半乳糖∶木糖=10.30∶11.40∶8.37∶1.28[12]。該檢測方法的線性范圍：阿拉伯糖 、葡萄糖、半乳糖、木糖均為1.200～7.200 mg/mL，可用于單糖的快速初步檢測。

3.2 酶法檢測

酶法檢測是基于某些單糖的酶促反應(yīng)，例如蔗糖的水解、葡萄糖和果糖的磷酸化[13]。根據(jù)酶促反應(yīng)，測定樣品中葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、總多糖等濃度。該法具有操作簡單、穩(wěn)定性好的優(yōu)點，多以試劑盒的形式開展實驗[14]，但該方法耗時較久，能檢測的糖組分有限，且難以同時對多種糖進行檢測，效率低。目前，酶法檢測較多應(yīng)用于新鮮植物組織中葡萄糖、果糖、麥芽糖及蔗糖含量的檢測，如棗[13]、甜玉米[14]、甜菜塊根[15]、木薯等[16]。據(jù)報道，利用酶試劑盒測定的葡萄糖、果糖及蔗糖含量，與GC-MS測定的三種糖的含量結(jié)果一致[13]。

3.3 高效液相色譜法

高效液相色譜是應(yīng)用廣泛的化學分析手段，其工作原理為不同溶質(zhì)在高壓條件下在固定相和流動相之間進行連續(xù)多次的交換，溶質(zhì)因在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同從而流出儀器的時間不同，因而得到有效分離[18]。高效液相色譜有多種檢測器，常用于糖類物質(zhì)檢測的有蒸發(fā)光散射檢測器和示差檢測器，此外還有脈沖安培檢測器。

表1 茶葉糖類物質(zhì)提取檢測方法匯總

原料提取條件檢測條件檢測結(jié)果參考文獻皖茶91、烏牛早、龍井43、平陽特早提取溶劑:純水固液比:1∶2090℃,1hAgilentZorbaxcarbohydrate柱(4.6mm×250mm),乙腈/水=3/1,1.0mL/min等度洗脫,柱溫30℃,蒸發(fā)光散射檢測器檢測出果糖、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、麥芽糖,其中果糖、葡萄糖、蔗糖線性范圍均在0.25～10mg/mL,相關(guān)系數(shù)均大于0.99。在茶樹葉片可溶性糖中,果糖、葡萄糖含量均較低,蔗糖占有較大的比重。[21]綠茶、紅茶、黑茶提取溶劑:80%乙醇固液比:1∶8080℃,3hShodexNH2P-50-4E(5μm,4.6mm×250mm),水(A相)/乙腈(B相),1.0mL/min,014min,85%B;1416min,85%B70%B;1628min,70%B;2832min,70%B→85%B,柱溫:20℃,蒸發(fā)光散射檢測器線性范圍和最低檢測濃度為:果糖(0.21～1.09μg/μL,0.91ng/μL)、葡萄糖(0.16～0.83μg/μL,0.76ng/μL)、蔗糖(0.17～0.83μg/μL,0.35ng/μL)、鼠李糖(0.19～0.45μg/μL,12.01ng/μL)、阿拉伯糖(1.84～9.24μg/μL,68.81ng/μL)、甘露糖(0.41～2.07μg/μL,16.46ng/μL)、麥芽糖(0.16～0.81μg/μL,1.96ng/μL)、木糖(0.40～1.99μg/μL,26.28ng/μL)。[22]夏秋茶提取溶劑:純水固液比:1∶10振蕩2min,超聲提取1minNH2柱(5μm,4.6mm×250mm),乙腈/水=7/3,1.0mL/min等度洗脫,柱溫40℃,蒸發(fā)光散射檢測器蔗糖、葡萄糖、果糖在50～500μg/mL的線性范圍,檢出限為0.1%,半乳糖在25～250μg/mL的線性范圍,檢出限為0.05%,相關(guān)系數(shù)均大0.99。[23]綠茶、紅茶、普洱茶提取溶劑:純水固液比:～1∶16超聲提取30minXB-NH2(5μm,4.6mm×250mm),乙腈/水=78/22,1.0mL/min等度洗脫,柱溫35℃,示差折光儀線性范圍和最低檢測濃度為:果糖(0.05～5.19mg/mL,0.1%),葡萄糖(0.05～5.05mg/mL,0.1%),蔗糖(0.06～5.75mg/mL,0.2%),相關(guān)系數(shù)均高于0.999。[25]毛尖茶提取溶劑:純水+吡咯烷酮固液比:4∶25沸水浴,45minSugar-pakⅠ,50mg/LEDTA-Ca水溶液,0.4mL/min洗脫,柱溫85℃,示差折光儀麥芽糖、木糖、果糖線性范圍均為50～1000μg/mL,相關(guān)系數(shù)均大于0.999。麥芽糖、葡萄糖、木糖、果糖最低檢測濃度分別為0.5、2.0、1.3、1.0μg/mL。[26]綠茶、紅茶、烏龍茶提取溶劑:80%乙醇固液比:1∶1080℃水浴,3hSugarpak-1column(6.5mm×300mm),50mg/LEDTA-Ca水溶液,0.2mL/min洗脫,柱溫90℃,示差折光儀檢測出葡萄糖、果糖、蔗糖,茶樣中蔗糖的含量為8.80～10.73mg/g,葡萄糖含量為1.06～1.33mg/g,果糖含量為0.84～0.90mg/g。[28]綠茶、烏龍茶、普洱茶和紅茶提取溶劑:純水固液比:3∶250超聲波提取15min,重復(fù)提取2次AcquityBEHAmide(2.1mm×150mm,1.7μm),0.1%氨水溶液(A)和0.1%氨水-乙腈溶液(B),柱溫35℃,0.15mL/min梯度洗脫,010min,80%B→55%B;1012min,55%B;12.0115min,80%B,3200型三重四極桿質(zhì)譜8種單、寡糖的線性范圍均為1.0～200.0mg/L;最低檢測濃度:果糖0.54μg/mL、葡萄糖0.16μg/mL、蔗糖0.01μg/mL、木糖0.16μg/mL、棉子糖0.42μg/mL、鼠李糖0.07μg/mL、甘露糖0.18μg/mL、阿拉伯糖0.54μg/mL。[29]茶多糖提取溶劑:1mol/L乙酸溶液固液比:1∶250超聲輔助浸提120minMetrosepCarb1陰離子交換柱(4.0mm×150mm),6.0mmol/L氫氧化鈉溶液,流速:1.0mL/min,柱溫:32℃,脈沖安培檢測器半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖這4種單糖線性范圍均為2.0～50.0mg/L,相關(guān)系數(shù)均大于0.99。四種茶類茶多糖組成不同,綠茶、烏龍茶茶多糖主要為葡萄糖和甘露糖,普洱茶為半乳糖和葡萄糖,紅茶為半乳糖、葡萄糖和果糖。[33]龍井、碧螺春提取溶劑:純水固液比:1∶20080℃,30minAminoPacPA10(2mm×250mm),去離子水(A)、0.25M氫氧化鈉(B)和1.0M乙酸鈉(C),流速:0.25mL/min,柱溫:30℃,脈沖安培檢測器最低檢測限:葡萄糖:0.25pmol,果糖:0.80pmol,蔗糖:0.40pmol,龍井、碧螺春中蔗糖的含量為6.16～9.94mg/g,葡萄糖含量為0.59～1.31mg/g,果糖含量為0.38～0.86mg/g。[34]氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用茶多糖提取溶劑:硫酸溶液固液比:3∶500沸水浴,2h石英毛細管柱(30m×0.32mm×0.25μm),鹽酸-羥胺、乙酸酐衍生,柱溫:50℃→140℃(30℃/min),140℃→190℃(5℃/min)茶多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。[35]龍井43提取溶劑:100%甲醇固液比:1∶1470℃,10minVF-5capillarycolumn(30m×0.25mm,0.25μm),甲氧胺鹽酸鹽、甲基-N-(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺衍生,柱溫:80℃維持1min,80℃→160℃(15℃/min)后維持1min,160℃→210℃(4℃/min)后維持1min,210℃→300℃(15℃/min)后維持10min檢測出葡萄糖、果糖、蔗糖、半乳糖、棉籽糖[36]

原料提取條件檢測條件檢測結(jié)果參考文獻毛細管電泳綠茶酶解液提取溶劑:水解酶+pH5.0檸檬酸緩沖液固液比:1∶2050℃,8h非涂層石英毛細管柱(50μm×61.5cm,有效長度54.5cm),緩沖液為硼酸濃度175mmol/L,pH=10.5,1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生,波長254nm,電壓20kV各單糖線性范圍均為0.5～10mmol/L,相關(guān)系數(shù)均大于0.99,麥芽糖、乳糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖及甘露糖的最低檢測限為:0.19、0.14、0.23、0.19、0.19、0.18、0.11、0.10μmol/mL。[38]茶多糖提取溶劑:2mol/L硫酸溶液固液比:1∶75沸水浴,5h石英毛細管(50μm),40mmol/L硼砂緩沖溶液,20mmol/L十二烷基硫酸鈉,pH=10,1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生,波長245nm,電壓10kV各單糖線性范圍均為10～180μg/mL,相關(guān)系數(shù)均大于0.99,木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖及半乳糖的檢出限為:4.87、6.35、7.34、6.02、4.89、8.32μg/mL。[39]

3.3.1HPLC-ELSD 蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)是一種質(zhì)量型檢測器，在無紫外吸收或紫外末端吸收的大分子化合物定性定量分析上具有明顯優(yōu)勢，用于可溶性糖檢測具有高靈敏度、低檢測限、操作簡單等優(yōu)點，但也存在基線平衡時間長、選擇性較差等缺點[19]。

該方法的流動相多為乙腈-水[21-23]，為避免實驗圖譜中出現(xiàn)雙峰及拖尾現(xiàn)象，也可將流動相換成也乙腈-氨水[24]。多采用外標法進行定量分析。黃明軍采用XBridge Amide 5 μm(4.6 mm×250 mm)色譜柱測定了黑茶中單糖和雙糖的含量，結(jié)果顯示鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖在一定范圍內(nèi)濃度與相應(yīng)峰面積的相關(guān)系數(shù)均大于0.99，具有良好的線性關(guān)系，精密度實驗顯示各單糖的相對標準偏差在0.66%～1.74%，加標回收率在94.34%～99.92%之間[20]。袁勇采用Shodex NH2P-50-4E(4.6 mm×250 mm，5 μm)及保護柱：NH2P-50G-4A(4.6 mm×10 mm)測定茶葉中可溶性糖，實驗顯示鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖在3.202～184.828 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，各單糖的重復(fù)性RSD在1.84%～3.04%，加標回收率在90.97%～105.07%之間。HPLC-ELSD法檢測可溶性糖穩(wěn)定性較好，能快速同步檢測多種可溶性糖含量[22]。

3.3.2HPLC-RID 示差折光檢測器(RID)是一種通用型檢測器，對于只有紫外末端吸收的物質(zhì)，同時易發(fā)生基線漂移的物質(zhì)，如聚合物、糖、有機酸等，采用示差折光檢測器檢測能獲得較理想的結(jié)果[25]。該方法早于1993年就已運用于茶葉糖類物質(zhì)的測定[26]，近年來得到了進一步地優(yōu)化。該方法簡便易操作、效率高、適用范圍廣，但是對梯度洗脫適應(yīng)性較差，受溫度、壓力、流速影響較大，基線噪音大[27]。

曾曉雄研究發(fā)現(xiàn)茶多酚存在可能會造成某些可溶性糖色譜峰拖尾，影響分離效果。因而，進行可溶性糖組分檢測前，可采用陰、陽離子交換樹脂層析柱除去茶葉中的多酚等干擾物質(zhì)，提高檢測精度[1]。李燕平等采用XB-NH2(4.6 mm×250 mm，5 μm)氨基柱檢測茶葉中果糖、葡萄糖和蔗糖的含量。此方法線性范圍為0.05～5.75 mg/mL，檢測限在0.10～0.20 g/100 g之間，回收率為86.1%～103.2%[25]。Tusneem Kausa等用HPLC-RID法探究了輻射和熏蒸對茶葉糖組分的影響，結(jié)果表明茶葉中葡萄糖、蔗糖和果糖都在輻射后增加[28]。

3.3.3UPLC-MS 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有操作簡單、靈敏度高、選擇性好、測定周期短等優(yōu)點[29]。通過色譜條件的優(yōu)化各單糖能夠?qū)崿F(xiàn)良好分離，再通過質(zhì)譜條件的優(yōu)化，能夠提高重現(xiàn)性，準確性高[30]， 能方便地建立一套快速、靈敏、一次測定多個可溶性糖組分的檢測方法[31]。但儀器較昂貴，檢測成本和技術(shù)要求高，且質(zhì)譜信號線性響應(yīng)范圍有限，需嚴格控制待測樣品的檢測濃度，以獲得精確的檢測結(jié)果。

王川丕等采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定茶葉中的鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖和棉子糖。色譜柱為：Acquity BEH Amide(2.1 mm×150 mm，1.7 μm)，流動相：含體積分數(shù)0.1%氨水溶液(流動相A)和含體積分數(shù)0.1%氨水-乙腈溶液(流動相B)，流速為0.15 mL/min。質(zhì)譜離子源溫度250 ℃，采用負離子模式掃描。八種糖的工作曲線線性相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，定量檢出限在0.01～0.54 mg/L之間。各個糖組分的加標回收率在85.4%～103.2%之間，重復(fù)性實驗相對標準偏差在0.7%～4.4%[29]。該法可溶性糖的檢測線性范圍較已報道的HPLC-ELSD和HPLC-RID法低。

3.3.4離子交換色譜 離子色譜的流動相一般為酸或堿溶液，檢測器有光學檢測器和電化學檢測器兩大類，用于茶葉可溶性糖分析的檢測器多為安培檢測器。該方法的原理是糖類物質(zhì)在強堿條件下轉(zhuǎn)化成陰離子，在電極表面發(fā)生氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生電流，從而被安培檢測器檢測到[32]。離子交換色譜是一種靈敏度高、選擇性好、穩(wěn)定性高的分析糖類物質(zhì)的簡便方法，淋洗液主要是氫氧化鈉等無機溶液，減少了有機試劑的消耗，更環(huán)保，但是理想電極材料較局限，使用過程中會出現(xiàn)電化學腐蝕和電極表面污染現(xiàn)象，需要及時進行清理，且樣品前處理要求高。

劉婷等采用Metrostep Carb 1陰離子交換柱(4.0 mm×150 mm)為分離柱，用脈沖安培檢測器分離檢測了茶葉多糖中的半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖。為了使四種糖達到較好的分離效果，實驗采用了多個淋洗液濃度和柱溫，最后發(fā)現(xiàn)在氫氧化鈉的濃度為6.0 mmol/L，流速為1.0 mL/min，柱溫為32 ℃時分離效果較佳。四種單糖色譜峰高與質(zhì)量濃度的標準曲線的相關(guān)系數(shù)均在0.999以上，最低檢測限為0.125～2.0 mg/L。重復(fù)性相對標準偏差在5.82%～14.19%之間，加標回收率在91.8%～99.3%之間[33]。Ding Y采用去離子水、0.25 M氫氧化鈉和1.0 M乙酸鈉組成的三元梯度洗脫法，采用AminoPac PA10(2 mm×250 mm)分析柱及脈沖安培檢測器上分離檢測綠茶中的葡萄糖、果糖和蔗糖，相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，峰面積相對標準偏差在1.2%～1.6%，檢測限在0.25～0.50 pmol之間，說明此方法準確度較高，可用于實際樣品測定[34]。

3.4 GC-MS法

氣相色譜所用分離柱長，能有效分離糖組分，尤其是對同分異構(gòu)體的分離，且樣品消耗少，選擇性好，以質(zhì)譜為檢測器得到各種糖組分的質(zhì)譜信號。但由于茶葉可溶性糖無顯色基團，揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性差，因此采用氣相色譜進行可溶性糖組分檢測之前需要進行衍生。衍生常用的方法有三甲基硅醚衍生、糖腈乙酸酯衍生、糖醇乙酸酯衍生、糖的三氟乙酸酯衍生[35]。雖然GC-MS檢測可溶性糖組分分離度佳、靈敏度好，但是衍生操作相對復(fù)雜繁瑣、耗時長、重現(xiàn)性略差。

周鵬等從茶葉中提取到多糖蛋白復(fù)合物，在水解后得到的單糖先經(jīng)過鹽酸-羥胺和乙酸的衍生后進行GC-MS分析：進樣溫度250 ℃，分離柱為石英毛細管柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)，全掃描模式，電子轟擊模式，電子能量70 eV。該法成功分離鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖的衍生物，實現(xiàn)了多種可溶性糖組分的同步檢測，且分離度高[35]。Chuan Yue采用甲醇提取可溶性糖，先后用40 μL甲氧胺鹽酸鹽和70 μL N-甲基-N-(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺在37℃下進行衍生，后進行GC-MS分析，并對可溶性糖組分變化和茶樹抗寒性進行分析，認為可溶性糖積累有助于提高植物的抗寒性[36]。但目前關(guān)于GC-MS法檢測茶葉可溶性糖的方法，仍缺少不同種單糖檢測線性范圍參考，以及衍生劑用量和衍生效率方面的實驗數(shù)據(jù)。在將GC-MS法應(yīng)用于茶葉可溶性糖檢測之前，應(yīng)對方法本身的檢測精確度，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性等進行全面考量，以確保方法的科學性。

3.5 毛細管電泳法

毛細管電泳法具有較高的分辨能力，分析時間較短，可通過調(diào)整毛細管長度、直徑、緩沖溶液pH值、施加電壓、試驗溫度等條件達到物質(zhì)的有效分離[37]。糖類化合物的檢測可采用直接和間接毛細管電泳法，但是直接檢測的靈敏度較低，通常衍生后再檢測用于提高檢測靈敏度。該方法衍生操作較繁瑣、耗時較長、技術(shù)要求高。

王芝彪等采用毛細管電泳法測定了綠茶酶解液中的麥芽糖、乳糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、半乳糖醛酸。該方法以1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮(PMP)為衍生劑對樣品衍生后檢測，以硼酸溶液為緩沖液進行測定。乳糖和木糖、半乳糖和甘露糖較難分離，為了達到最佳分離效果，調(diào)整各項參數(shù)，最終在硼酸濃度為200 mmol/L，pH 值為11.0，電壓為21 kV時分離較好。該方法靈敏度較高，穩(wěn)定性好，且單糖衍生物的線性回歸方程相關(guān)系數(shù)均大于0.99，加標回收率為94.04%～101.9%[38]。覃夢琳采用PMP對六堡茶茶多糖水解液進行衍生，用毛細管膠束電動色譜進行測定，成功分離檢測出阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖。最佳實驗條件為40 mmol/L硼砂緩沖溶液，20 mmol/L十二烷基硫酸鈉，pH=10，工作電壓為10 kV[39]。

4 展望

綜上所述，薄層色譜法、酶法、高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法及毛細管電泳法均可實現(xiàn)單糖組分的測定。但薄層色譜法和酶法適用范圍不廣，氣質(zhì)聯(lián)用法和毛細管電泳法分離效果佳，但需柱前衍生，且定量的精準性或受到柱前衍生步驟的影響。目前高效液相色譜結(jié)合ELSD 或RID檢測器在可溶性糖檢測中應(yīng)用較廣，但在分離多種糖組分方面仍存有一定的局限性，受到分離度的影響[40]。雖然目前茶葉中可溶性糖的檢測方法較多，但較多研究僅側(cè)重于少數(shù)單糖的定量分析，茶葉中可溶性糖的檢測缺少統(tǒng)一的提取方法和標準檢測方法。鑒于茶葉可溶性糖在茶葉品質(zhì)和茶樹生長發(fā)育過程中的重要性，值得更加深入的研究[41-43]。茶葉可溶性糖標準檢測方法的建立，是進一步推進茶葉品質(zhì)化學和從糖生物學角度研究茶樹生長發(fā)育和脅迫響應(yīng)機制的前期和基礎(chǔ)工作，應(yīng)得到重視。