婚前保健中孕前女性葉酸代謝酶基因多態(tài)性分析

史卿菁 丁旭鋒 吳麗萍

【摘 要】 目的：分析婚前保健對(duì)象中孕前女性葉酸代謝通路中相關(guān)酶的基因多態(tài)性，根據(jù)其基因多態(tài)性對(duì)個(gè)體葉酸代謝能力進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)方面的評(píng)估，并依據(jù)得到的結(jié)果對(duì)育齡期女性服用葉酸進(jìn)行個(gè)體化引導(dǎo)。方法：選取2018年5月至2019年4月來(lái)宜興市婦幼保健院行孕前保健的女性169例，采集研究對(duì)象口腔黏膜上皮細(xì)胞，采用熒光定量PCR檢測(cè)方法測(cè)定5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C667T、A1298C位點(diǎn)和甲硫氨酸合酶還原酶（MTRR）A66G位點(diǎn)的基因型，根據(jù)基因多態(tài)性將其分為高度風(fēng)險(xiǎn)、中度風(fēng)險(xiǎn)、低度風(fēng)險(xiǎn)、未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)四個(gè)級(jí)別。結(jié)果：本地區(qū)孕前女性MTHFR C667T位點(diǎn)CC型、CT型、TT型的檢出頻率為30.17%、51.47%、18.34%;MTHFR A1298C位點(diǎn)AA型、AC型、CC型的檢出頻率為73.37%、25.44%、1.18%;MTRR A66G位點(diǎn)AA型、AG型、GG型的檢出頻率為62.13%、29.58%、8.28%。葉酸代謝能力高度風(fēng)險(xiǎn)占18.34%，中度風(fēng)險(xiǎn)占31.36%，低度風(fēng)險(xiǎn)占8.87%，未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)占41.42%。結(jié)論：婚前保健孕前女性中有將近50%存在葉酸代謝中、高度風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)根據(jù)其葉酸代謝風(fēng)險(xiǎn)程度合理個(gè)體化服用葉酸。

【關(guān)鍵詞】 孕前婦女;葉酸;5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶;甲硫氨酸合酶還原酶;基因多態(tài)性;葉酸過(guò)量

[Abstract] Objective：To analyze the genetic polymorphisms of related enzymes in the folate metabolic pathway of pre-pregnancy women in pre-marital health care subjects， to evaluate the risk of individual folate metabolic ability according to their genetic polymorphisms， and to individually guide women of childbearing age to take folic acid according to the obtained results. Methods： 169 women who received pregnant care in Yixing Maternal and Child Health Hospital from May 2018 to April 2019 were selected. Oral mucosal epithelial cells of the study subjects were collected and the 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） C667T， A1298C sites and methionine synthase reductase （MTRR） A66G were determined by fluorescence quantitative PCR. Genotypes of loci were classified into four levels： high risk， moderate risk， low risk and no risk according to gene polymorphism. Results： The detection frequencies of CC， CT and TT at MTHFR C667T locus were 30.17%， 51.47% and 18.34% in pre-pregnancy women in this region; the detection frequencies of AA， AC and CC at MTHFR A1298C locus were 73.37%， 25.44% and 1.18%; the detection frequencies of AA， AG and GG at MTRR A66G locus were 62.13%， 29.58% and 8.28%.The high risk， moderate risk， low risk and undetected risk accounted for 18.34%， 31.36%， 8.87% and 41.42% respectively. Conclusion： Nearly 50% of pre-pregnancy women in pre-marital health care have moderate and high risk of folic acid metabolism， which should be rationally individualized according to the degree of risk of folic acid metabolism.

[Key words]Pre-pregnancy women; Folic acid; 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase; Methionine synthase reductase; Gene polymorphism;Folate excess

葉酸（Folic acid），又名碟酰谷氨酸，屬于水溶性維生素。人機(jī)體無(wú)法自主合成葉酸，需要依靠外源性攝取。攝取的葉酸會(huì)在近端空腸被機(jī)體所吸收，以N5-甲基四氫葉酸的形式儲(chǔ)存紅細(xì)胞內(nèi)，5-甲基四氫葉酸、維生素B12、甲硫氨酸合成酶一同把機(jī)體中半胱氨酸甲基化而得到甲硫氨酸，而甲硫氨酸合成酶還原酶是一種甲硫氨酸合成酶維持活性的輔酶。葉酸代謝關(guān)鍵酶所出現(xiàn)的基因突變會(huì)對(duì)機(jī)體中同型半胱氨酸水平帶來(lái)影響，可引起孕產(chǎn)婦復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓等疾病，增加子代唐氏綜合征、神經(jīng)管畸形、先天性心臟病等出生缺陷的風(fēng)險(xiǎn)[1]。葉酸代謝障礙的婦女即使在孕前、孕期補(bǔ)充了葉酸，但由于其葉酸代謝能力低下仍會(huì)導(dǎo)致葉酸缺乏相關(guān)的生育風(fēng)險(xiǎn)。

1 資料與方法

1.1 研究資料

選取本院2018年5月至2019年4月門(mén)診接待的備孕期女性169例，年齡22～42歲，平均年齡27歲，自愿接受葉酸代謝基因多態(tài)性檢測(cè)。簽署知情同意書(shū)后，采集口腔黏膜上皮細(xì)胞進(jìn)行DNA檢查。

1.2 方法

研究對(duì)象清水漱口后，由專(zhuān)業(yè)人員采集其口腔黏膜上皮細(xì)胞樣本，并利用柱式抽提試劑盒提取樣本DNA。采用熒光定量PCR法檢測(cè)三個(gè)位點(diǎn)的基因分型。

2 結(jié)果

2.1 統(tǒng)計(jì)樣本中MTHFR、MTRR基因多態(tài)性分析

統(tǒng)計(jì)樣本中葉酸代謝基因3個(gè)位點(diǎn)（MTHFRC667T、MTHFR A1298C、MTRR A66G）的基因型數(shù)據(jù)，均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)。

統(tǒng)計(jì)所有樣本檢測(cè)的MTHFR C667T位點(diǎn)中，野生型（CC）、雜合突變型（CT）及純合突變型（TT）為51例（30.17%）、87例（51.47%）和31例（18.34%），突變基因T的基因頻率為44.08%;MTHFR A1298C位點(diǎn)為124例（73.37%）、43例（25.44%）和2例（1.18%），突變基因C的基因頻率為13.9%;MTRR A66G位點(diǎn)為野生型（AA）、雜合突變型（AG）及純合突變型（GG）的分別為105例（62.13%）、50例（29.58%）和14例（8.28%），突變基因G的基因頻率為23.07%。

2.2 依據(jù)樣本基因多態(tài)性對(duì)葉酸代謝能力進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)級(jí)

統(tǒng)計(jì)樣本中葉酸代謝能力未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)70例，占41.12%;低度風(fēng)險(xiǎn)15例，占8.87%;中度風(fēng)險(xiǎn)53例，占31.36%;高度風(fēng)險(xiǎn)31例，占18.34%。見(jiàn)表1。

3 討論

葉酸缺乏會(huì)導(dǎo)致孕婦不良妊娠發(fā)生率增高。不良妊娠主要表現(xiàn)為流產(chǎn)和出生缺陷，我國(guó)出生缺陷發(fā)病率相對(duì)較高[2]，出生缺陷中最為普遍的就是唐氏綜合征、先天性心臟病等，這些疾病不僅嚴(yán)重危害兒童健康，也會(huì)帶來(lái)巨大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。葉酸在DNA和RNA合成中起到重要作用，人體不能合成葉酸，只能外源性攝入。天然葉酸極不穩(wěn)定，食物中的葉酸經(jīng)烹飪等處理后只有極少部分能被人體吸收，且天然葉酸人體利用度較低。葉酸代謝關(guān)鍵酶的基因突變會(huì)導(dǎo)致其酶活性的顯著降低以及紅細(xì)胞內(nèi)葉酸水平降低[3]，葉酸代謝關(guān)鍵酶的基因突變會(huì)顯著放大本來(lái)就存在的葉酸缺乏。本研究孕前女性MTHFR C667T位點(diǎn)有17.8%的人發(fā)生純合突變，MTRR A66G位點(diǎn)有8.28%的人發(fā)生純合突變。這部分人群不僅生育神經(jīng)管缺陷、21-三體綜合癥、唇腭裂胎兒的風(fēng)險(xiǎn)增加，孕期發(fā)生妊娠期高血壓的風(fēng)險(xiǎn)也將顯著升高[4]。

各國(guó)孕期葉酸的推薦劑量存在差異，我國(guó)圍孕期增補(bǔ)葉酸預(yù)防神經(jīng)管缺陷指南建議孕婦每天應(yīng)攝取0.4～0.8mg的葉酸，避免引發(fā)神經(jīng)管缺陷。對(duì)不相同遺傳學(xué)特征的個(gè)性化增補(bǔ)只提到了MTHFRC677T位點(diǎn)TT基因型，對(duì)于MTHFR A1298C、MTRR A66G則沒(méi)有提及[5]。相關(guān)研究顯示，MTHFR A1298C基因突變會(huì)改變機(jī)體凝血狀態(tài)，導(dǎo)致凝血機(jī)制改變及胎盤(pán)部位血栓形成，從而引起復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。MTRR是影響Hcy代謝的另一關(guān)鍵酶，最常見(jiàn)的突變位點(diǎn)為A66G，MTRR A66G位點(diǎn)的基因突變會(huì)降低該酶的活性，影響Hcy的活性及DNA甲基化[6]。因此對(duì)于MTHFR A1298C及MTRR A66G位點(diǎn)突變的也需引起重視，指導(dǎo)其個(gè)體化補(bǔ)充葉酸。

依據(jù)葉酸基因多態(tài)性對(duì)葉酸代謝能力進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)級(jí)，近50%的孕前婦女存在中、高度風(fēng)險(xiǎn)，常規(guī)孕前、孕早期補(bǔ)充0.4mg葉酸不能滿足這部分人群葉酸代謝需求，仍會(huì)導(dǎo)致葉酸缺乏相關(guān)生育風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生，因此葉酸補(bǔ)充需個(gè)體化，才能進(jìn)一步降低相關(guān)生育風(fēng)險(xiǎn)。

當(dāng)前圍受孕期補(bǔ)充葉酸已逐漸被國(guó)民接受，但過(guò)量攝入葉酸帶來(lái)的母嬰危害尚未被全面認(rèn)識(shí)。目前對(duì)于葉酸攝入閾值尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)外相關(guān)研究報(bào)道，孕期女性葉酸攝入劑量>1000mg/d時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致子代呼吸功能異常，引起呼吸道相關(guān)疾病發(fā)病率升高。相關(guān)研究表明，胎兒體內(nèi)葉酸濃度與胎兒出生體質(zhì)量相關(guān)。由此可見(jiàn)，母體在孕期長(zhǎng)期攝入過(guò)量葉酸可能會(huì)增加生育巨大兒的風(fēng)險(xiǎn)。一項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，孕期母體葉酸水平會(huì)影響胎兒大腦的發(fā)育以及在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到關(guān)鍵作用。也有研究顯示，母體葉酸水平異?？赡軐?dǎo)致子代多動(dòng)癥、孤獨(dú)癥等行為學(xué)改變。目前葉酸過(guò)量帶來(lái)的母嬰危害正逐漸被學(xué)術(shù)界重視，其中利弊還需長(zhǎng)期研究論證。

葉酸是人體生長(zhǎng)、繁殖必須的物質(zhì)，對(duì)于圍孕期婦女尤為重要。目前國(guó)民對(duì)葉酸的補(bǔ)充也有了一定的認(rèn)識(shí)，但葉酸的個(gè)體化補(bǔ)充仍需全體醫(yī)護(hù)人員的努力宣教。特別是當(dāng)前葉酸過(guò)量所產(chǎn)生的危害還存在爭(zhēng)議，學(xué)術(shù)界也沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)前研究對(duì)于葉酸過(guò)量的認(rèn)識(shí)還不足。因此對(duì)于葉酸的補(bǔ)充仍需適當(dāng)慎重，不可盲目。當(dāng)前醫(yī)護(hù)工作者應(yīng)當(dāng)更加全面辨證地指導(dǎo)圍孕期婦女更加科學(xué)、個(gè)體化地服用葉酸。

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