百日咳實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)方法的研究進(jìn)展 *

龐潔，諶志筠，何秋水,2

(1.首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系，北京100069；2.芬蘭圖爾庫大學(xué)醫(yī)學(xué)微生物和免疫學(xué)系，芬蘭圖爾庫20520)

百日咳是一種具有高度傳染性的急性呼吸道疾病，病程可達(dá)3個(gè)月之久，主要由百日咳鮑特菌(Bordetellapertussis)和副百日咳鮑特菌(B.parapertussis)引起。盡管目前通過廣泛的疫苗接種可以較好地控制百日咳，但是細(xì)菌在世界范圍內(nèi)的流行并沒有減弱，在疫苗覆蓋率低的地區(qū)仍然很普遍。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)推薦的百日咳疑似病例臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)(2018年9月)為咳嗽≥2周且至少伴有以下任意一種臨床癥狀：陣發(fā)性咳嗽、吸氣性吼聲、咳嗽后或無其他明顯原因造成的嘔吐以及1歲以下嬰兒呼吸暫停[1]。值得關(guān)注的是，隨著已接種疫苗的青少年和成年群體中百日咳患者的增加，臨床表現(xiàn)的不典型化，無癥狀感染者的出現(xiàn)以及各種鮑特菌感染后癥狀的相似性，通過臨床標(biāo)準(zhǔn)診斷百日咳易造成誤診和漏診。此外，呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒、肺炎支原體等也可引起類似百日咳樣的癥狀。

我國目前采用的是2007年制定的百日咳臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，對(duì)百日咳疑似病例中外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及淋巴細(xì)胞明顯增高者，從痰、鼻咽部分泌物分離到百日咳鮑特菌或恢復(fù)期血清特異性抗體水平比急性期呈≥4倍增長(zhǎng)即可確診。這一診斷標(biāo)準(zhǔn)有一定的局限性：一方面，并無針對(duì)其他引起百日咳的病原菌如副百日咳鮑特菌和霍氏鮑特菌的檢測(cè)方法；另一方面，暫未將分子生物學(xué)方法如PCR檢測(cè)作為實(shí)驗(yàn)室診斷的標(biāo)準(zhǔn)之一。

目前實(shí)驗(yàn)室診斷鮑特菌感染的方法主要包括傳統(tǒng)的鼻咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)法、免疫學(xué)方法檢測(cè)血清中病原特異性抗體以及對(duì)鼻咽標(biāo)本中鮑特菌的特異目的基因進(jìn)行核酸擴(kuò)增。細(xì)菌培養(yǎng)法雖然特異性最高，但敏感性受多種因素影響而差異較大，且培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，方法不宜標(biāo)準(zhǔn)化，因此陽性檢出率低，無法對(duì)百日咳進(jìn)行快速診斷，遠(yuǎn)不能滿足臨床需要。血清學(xué)檢測(cè)方法主要通過ELISA定量檢測(cè)百日咳鮑特菌特有的抗百日咳毒素(pertussis toxin, PT)特異性IgG抗體，靈敏度和特異度較高，簡(jiǎn)便快速。但該法對(duì)急性期患者不敏感，并且對(duì)于近期接種過百日咳疫苗的患者無法作出準(zhǔn)確診斷[3]，對(duì)副百日咳鮑特菌及其他鮑特菌也缺乏診斷價(jià)值，因此該方法適合百日咳鮑特菌感染后期的診斷和血清流行病學(xué)研究。核酸擴(kuò)增法耗時(shí)短，敏感且特異，已成為目前實(shí)驗(yàn)室診斷百日咳的最優(yōu)檢測(cè)方法?，F(xiàn)將百日咳的實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)方法的研究進(jìn)展作如下綜述。

1 鮑特菌概述

鮑特菌屬(Bordetella)是一類革蘭陰性桿菌，目前該屬包括10個(gè)種，其中百日咳鮑特菌、副百日咳鮑特菌、霍氏鮑特菌(B.holmesii)和支氣管敗血鮑特菌(B.bronchiseptica)與人類呼吸道感染相關(guān)。前三者的唯一宿主為人類。百日咳鮑特菌是人類百日咳感染的主要致病菌，常感染未進(jìn)行免疫接種的嬰幼兒。副百日咳鮑特菌通常引起較輕微的百日咳樣癥狀，并且持續(xù)時(shí)間較短[4-5]?；羰硝U特菌是與人類百日咳感染有關(guān)的最新鮑特菌物種[6]，青少年和成年人感染率更高[7-9]。支氣管敗血鮑特菌可感染多種哺乳動(dòng)物，引起人類咳嗽的情況較罕見，主要發(fā)生在患有免疫缺陷疾病的人群中，如艾滋病患者[10-11]。無細(xì)胞百日咳疫苗對(duì)副百日咳鮑特菌和霍氏鮑特菌的感染幾乎沒有保護(hù)作用，幾種鮑特菌對(duì)不同抗菌藥物的敏感性也有所差異。因此，準(zhǔn)確鑒定和區(qū)分鮑特菌的種類對(duì)于確定和優(yōu)化治療方案以及抑制病原菌的傳播具有重要意義。

2 百日咳病原菌的核酸檢測(cè)方法

2.1PCR 百日咳病原菌的PCR檢測(cè)方法主要包括傳統(tǒng)PCR、多重PCR(multiplex PCR)、實(shí)時(shí)PCR(real time PCR)和巢式PCR(nested PCR)等。實(shí)時(shí)PCR由于其定量、污染機(jī)會(huì)相對(duì)較小等優(yōu)點(diǎn)，在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用中已逐漸代替?zhèn)鹘y(tǒng)PCR方法。目前國內(nèi)外診斷百日咳時(shí)應(yīng)用較多的鮑特菌目的基因序列主要是重復(fù)插入序列(insertion sequences，IS)?，F(xiàn)將以上幾種PCR技術(shù)進(jìn)行簡(jiǎn)要介紹。

2.1.1傳統(tǒng)單一PCR和多重PCR 傳統(tǒng)PCR通常只有一對(duì)引物，多重PCR是在擴(kuò)增體系中加入2對(duì)甚至多對(duì)引物，同時(shí)檢測(cè)百日咳鮑特菌以及其他引起百日咳樣癥狀的鮑特菌。常見的靶基因及拷貝數(shù)見表1。IS481和IS1001是以往區(qū)分百日咳鮑特菌和副百日咳鮑特菌常見的PCR靶標(biāo)。IS481在百日咳鮑特菌中存在50～238個(gè)拷貝[12-13]，由于拷貝數(shù)較多，因此具有較高的靈敏度。有研究表明，IS481在霍氏鮑特菌基因組中存在8～10個(gè)拷貝，在極少數(shù)的支氣管敗血鮑特菌基因組中也存在5個(gè)以下拷貝[13]。因此，針對(duì)IS481的單一PCR診斷百日咳鮑特菌會(huì)導(dǎo)致一定的假陽性。IS1001在副百日咳鮑特菌基因組中約存在20個(gè)拷貝[13]，在支氣管敗血鮑特菌的人源性和動(dòng)物源性分離株中也可見[13]，在霍氏鮑特菌中尚未見報(bào)道。因此，基于IS481和IS1001的多重PCR并不能區(qū)分百日咳鮑特菌和霍氏鮑特菌。IS1002存在于百日咳鮑特菌(每個(gè)基因組4～7個(gè)拷貝)和副百日咳鮑特菌(每個(gè)基因組9個(gè)拷貝)基因組中[14]。hIS1001是僅在霍氏鮑特菌基因組中發(fā)現(xiàn)的具有3～5個(gè)拷貝的類IS1001序列[15]。因此，基于IS481、IS1001、IS1002和hIS1001的多重PCR可區(qū)分百日咳鮑特菌、副百日咳鮑特菌和霍氏鮑特菌。

表1 PCR檢測(cè)4種鮑特菌時(shí)部分靶基因的拷貝數(shù)

2.1.2實(shí)時(shí)PCR 實(shí)時(shí)PCR的其中一種方法是在擴(kuò)增體系中加入熒光探針，從而進(jìn)一步保證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。Templeton等[19]在對(duì)百日咳鮑特菌、副百日咳鮑特菌和霍氏鮑特菌進(jìn)行鑒別診斷時(shí)發(fā)現(xiàn)，實(shí)時(shí)PCR比常規(guī)PCR的靈敏度更高。相比于傳統(tǒng)PCR，實(shí)時(shí)PCR更加快速，且擴(kuò)增分析過程在完全密閉的環(huán)境內(nèi)完成，使得污染的風(fēng)險(xiǎn)大大降低，因此可作為實(shí)驗(yàn)室快速診斷百日咳感染的更優(yōu)方法。

由于霍氏鮑特菌和支氣管敗血鮑特菌基因組中也存在低拷貝數(shù)的IS481，因此基于IS481的PCR方法診斷百日咳的特異性和陽性預(yù)測(cè)值可能會(huì)受到影響。將霍氏鮑特菌誤認(rèn)為百日咳鮑特菌的假陽性結(jié)果是導(dǎo)致許多實(shí)驗(yàn)室百日咳鮑特菌檢測(cè)特異性降低的主要原因之一[20-21]。為了進(jìn)一步鑒別百日咳鮑特菌和霍氏鮑特菌，Antila等[15]設(shè)計(jì)了基于recA基因的實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法對(duì)霍氏鮑特菌進(jìn)行特異性診斷。recA基因是一種管家基因，編碼參與重組修復(fù)DNA的recA蛋白[22]，已有許多研究將其作為檢測(cè)霍氏鮑特菌的PCR特定靶點(diǎn)用于實(shí)驗(yàn)室診斷[17,23]。

百日咳鮑特菌和霍氏鮑特菌有時(shí)也會(huì)發(fā)生混合感染[24-26]，此時(shí)IS481和hIS1001的實(shí)時(shí)PCR陽性結(jié)果不能區(qū)分是否為單一的霍氏鮑特菌感染。歐洲疾病控制與預(yù)防中心推薦使用IS481與PT基因啟動(dòng)子(pertussis toxin promoter,ptxP)為實(shí)時(shí)PCR的靶基因，從而提高百日咳鮑特菌檢測(cè)的特異性。PT是百日咳鮑特菌最重要的毒力因子，其啟動(dòng)子和結(jié)構(gòu)基因也存在于副百日咳鮑特菌和支氣管敗血鮑特菌中。但這2種鮑特菌的ptxP存在許多核苷酸突變，因而不能表達(dá)產(chǎn)生PT[27]。因此，ptxP常被用作檢測(cè)百日咳鮑特菌的特異PCR靶基因，也可以用于確定霍氏鮑特菌陽性標(biāo)本中是否存在百日咳鮑特菌。此外，還有針對(duì)百日咳鮑特菌的其他可能靶標(biāo)，如腺苷酸環(huán)化酶基因[28]、孔蛋白基因[29]、黏附素[30]、PT亞基S1(ptxS1)[18]、BP283[31]和BP485[31]等。在實(shí)際應(yīng)用中，為同時(shí)檢測(cè)百日咳鮑特菌、副百日咳鮑特菌以及霍氏鮑特菌等，常使用多個(gè)靶標(biāo)的多重實(shí)時(shí)PCR以避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

綜上，IS481和IS1001通?？捎糜诤Y查百日咳鮑特菌和副百日咳鮑特菌，再與其他靶基因結(jié)合使用可提高特異性。IS481陽性可認(rèn)為是鮑特菌(百日咳鮑特菌、霍氏鮑特菌或支氣管敗血鮑特菌)，IS1001陽性可認(rèn)為是副百日咳鮑特菌或支氣管敗血鮑特菌,IS481和ptxP均為陽性可確認(rèn)為百日咳鮑特菌,IS481陽性并且hIS1001和(或)recA陽性可確認(rèn)為霍氏鮑特菌,IS1001和IS1002陽性可確認(rèn)為副百日咳鮑特菌。見表2。

表2 PCR檢測(cè)鮑特菌目的基因的可能結(jié)果和建議解釋

2.1.3巢式PCR 巢式PCR通常用內(nèi)、外2對(duì)引物擴(kuò)增目的基因片段。為了提高靈敏度，有研究使用PT啟動(dòng)子區(qū)域一段239 bp的基因序列來區(qū)別診斷百日咳鮑特菌和副百日咳鮑特菌[32]。Farrell等[33]開發(fā)了一種以IS481和IS1001為靶標(biāo)的雙重巢式PCR，結(jié)果顯示該方法檢測(cè)具有高度的敏感性和特異性。最近，針對(duì)常規(guī)巢式PCR在第一輪擴(kuò)增后打開PCR管蓋時(shí)易受到外界環(huán)境污染的問題，Zhang等[34]開發(fā)了一種使用鎖定核酸(LNA)技術(shù)的巢式實(shí)時(shí)定量PCR方法(LNA-OTN-q-PCR)來檢測(cè)百日咳鮑特菌BP485基因，該方法對(duì)百日咳鮑特菌有極高的特異性，靈敏度也比實(shí)時(shí)PCR明顯增高，在很大程度上避免了百日咳鮑特菌檢測(cè)的假陰性，顯示出巨大的應(yīng)用前景。

2.2環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP) LAMP是2000年日本研究者開發(fā)的一種新型核酸擴(kuò)增技術(shù)[35]。通過設(shè)計(jì)一組4個(gè)引物，在DNA聚合酶的作用下，識(shí)別目的基因DNA鏈上的6個(gè)區(qū)域，等溫條件下可以在1 h內(nèi)將DNA拷貝數(shù)從幾個(gè)擴(kuò)增至109。針對(duì)ptxP設(shè)計(jì)的LAMP分析，可以特異性診斷百日咳鮑特菌感染[36]。有研究者使用5種針對(duì)recA基因的LAMP引物檢測(cè)霍氏鮑特菌感染，不僅高度特異，還具有與實(shí)時(shí)PCR相同的臨床敏感性[37]。

2.3其他核酸檢測(cè)方法 Aries鮑特菌測(cè)定法(Aries Bordetella assay，Aries BA)是一種以PT亞單位A基因(ptxA)和IS1001為靶標(biāo)的新型自動(dòng)核酸提取、純化、實(shí)時(shí)PCR以及數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)[38]，可直接對(duì)患者鼻咽拭子中的核酸進(jìn)行檢測(cè)，能夠靈敏特異地對(duì)百日咳鮑特菌和副百日咳鮑特菌進(jìn)行鑒定和區(qū)別診斷。Aries測(cè)定法與參考試驗(yàn)相比，百日咳鮑特菌檢測(cè)陽性和陰性符合率為97.1%和99.0%，副百日咳鮑特菌為100%和99.7%[39]。

BD Max系統(tǒng)是一個(gè)簡(jiǎn)化的分子平臺(tái)，集標(biāo)本制備、核酸提取和實(shí)時(shí)PCR于一身，且操作簡(jiǎn)便快捷，能夠直接從臨床樣本中檢測(cè)核酸。Kenicer等[40]對(duì)這套系統(tǒng)用于聯(lián)合提取百日咳鮑特菌及副百日咳鮑特菌核酸和PCR檢測(cè)進(jìn)行了評(píng)估，結(jié)果顯示出較好的診斷靈敏度和特異性，因此，BD Max系統(tǒng)可以作為實(shí)驗(yàn)室診斷百日咳的一種新選擇。

3 不同核酸檢測(cè)方法的比較

3.1PCR 與血清學(xué)方法和細(xì)菌培養(yǎng)法相比，PCR更為靈敏和快速，且特異性高，可在1～2 h內(nèi)準(zhǔn)確鑒定鮑特菌，具有較高的陽性預(yù)測(cè)值。實(shí)時(shí)PCR還可以定量監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物, 是目前實(shí)驗(yàn)室快速診斷鮑特菌感染的常用方法，應(yīng)用范圍廣泛。但是，PCR方法也有許多不足，主要有以下幾個(gè)方面。

(1)IS的拷貝數(shù)會(huì)影響檢測(cè)的敏感性。如使用高拷貝數(shù)靶標(biāo)(如IS481和IS1001)可提高測(cè)定的靈敏度,而以ptxP為靶標(biāo)的實(shí)時(shí)PCR的靈敏度則低于IS481[29]。針對(duì)recA/IS1002的PCR敏感性約為針對(duì)IS481/IS1001的PCR敏感性的10%，這也可以用recA和IS1002基因的拷貝數(shù)較低來解釋[17]。由于IS481的拷貝數(shù)明顯高于hIS1001，當(dāng)標(biāo)本中僅含低水平的霍氏鮑特菌，或者含低水平的百日咳鮑特菌和霍氏鮑特菌時(shí)，PCR會(huì)顯示相同的結(jié)果(即IS481陽性，hIS1001和ptxS1為陰性)[41]。這一特性也使得污染的DNA更容易被放大，從而易產(chǎn)生假陽性結(jié)果,導(dǎo)致誤診。

(2)對(duì)實(shí)時(shí)PCR循環(huán)閾值(Ct值)的正確解讀。無論是在臨床實(shí)驗(yàn)室還是暴發(fā)情況下，都需要合理解釋高Ct值。因?yàn)檫@可能是由于低細(xì)菌載量導(dǎo)致的真陽性或由于污染而導(dǎo)致的假陽性。在實(shí)際應(yīng)用中，Ct值≤35通?？梢哉J(rèn)為百日咳鮑特菌或副百日咳鮑特菌陽性[42]。根據(jù)Tatti等[18]的研究，1個(gè)細(xì)菌基因組中IS481的平均Ct值為33.0,當(dāng)IS481檢測(cè)的Ct值為高陽性(即35≤Ct<40)，但I(xiàn)S1001、hIS1001和ptxS1的檢測(cè)結(jié)果均為陰性時(shí)，表示每個(gè)反應(yīng)起始模板中少于1個(gè)細(xì)菌，此時(shí)PCR結(jié)果為不確定；當(dāng)IS481PCR結(jié)果的Ct值<35，IS1001也為陽性時(shí)，提示很可能是百日咳鮑特菌和副百日咳鮑特菌的混合感染。

(3)無法區(qū)分支氣管敗血鮑特菌感染。盡管人類支氣管敗血鮑特菌的感染十分罕見，在許多關(guān)于百日咳的研究報(bào)告中忽略了該菌種的存在,但是對(duì)于免疫缺陷和有長(zhǎng)期寵物、動(dòng)物接觸史的患者，若篩選試驗(yàn)中出現(xiàn)較弱的陽性結(jié)果(即高Ct值)，也不能排除支氣管敗血鮑特菌感染的可能性。

(4)假陽性結(jié)果。臨床標(biāo)本核酸提取過程中造成的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、標(biāo)本交叉污染以及接種疫苗前從注射器中排除氣泡時(shí)產(chǎn)生的氣溶膠等都可能使PCR產(chǎn)生假陽性結(jié)果[43-44]。尤其是在懷疑百日咳暴發(fā)時(shí)，過度依賴實(shí)驗(yàn)室PCR作為未經(jīng)培養(yǎng)確認(rèn)的診斷工具，會(huì)降低其陽性預(yù)測(cè)值。有研究報(bào)告了美國馬薩諸塞州由百日咳引起的2次假性醫(yī)院暴發(fā)和1次社區(qū)呼吸道疾病暴發(fā)[45]，說明僅依靠PCR確診百日咳的局限性。因此，在可疑的百日咳暴發(fā)的早期階段，PCR陽性結(jié)果應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀評(píng)估和培養(yǎng)結(jié)果來解釋，才更有助于指導(dǎo)公共衛(wèi)生對(duì)策，以免實(shí)施不必要的控制措施。另外，即使在抗菌藥物治療后，培養(yǎng)結(jié)果為陰性，但百日咳鮑特菌的DNA在人體內(nèi)仍持續(xù)存在。由于PCR檢測(cè)無法區(qū)分是否為活菌，在抗菌藥物治療開始后的3周內(nèi)，PCR檢測(cè)仍可以為陽性結(jié)果[46]，因此該方法評(píng)估治療效果的潛在價(jià)值仍有待進(jìn)一步研究。

3.2LAMP LAMP方法的顯著優(yōu)勢(shì)是：(1)整個(gè)擴(kuò)增過程在等溫條件下(63～65 ℃)持續(xù)進(jìn)行，無需昂貴復(fù)雜的PCR儀器和其他特殊的試劑，成本低廉；(2)無需將DNA雙鏈變性后退火，比PCR檢測(cè)更加快速，僅需15～60 min，省時(shí)高效；(3)擴(kuò)增反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生焦磷酸鎂的衍生物，與擴(kuò)增產(chǎn)物量成正比，因此可直接觀察是否出現(xiàn)白色沉淀或測(cè)定濁度來檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果[47]；(4)具有較高的靈敏度，能夠檢測(cè)出反應(yīng)混合物中低至6個(gè)拷貝的DNA；(5)使用逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶時(shí)，LAMP也可以用于RNA；(6)針對(duì)6個(gè)序列設(shè)計(jì)4種引物，具有高度特異性。

但LAMP的效率取決于目的基因片段的大小，研究發(fā)現(xiàn)，用130～200 bp大小的 DNA可獲得最佳結(jié)果，超過500 bp的DNA擴(kuò)增效果差[35]。

總體而言，由于操作簡(jiǎn)便且無需熱循環(huán)儀和電泳系統(tǒng)，能夠在等溫條件下特異、高效地?cái)U(kuò)增DNA，LAMP作為一種診斷百日咳感染的快速、靈敏和特異的方法，尤其在缺乏設(shè)備技術(shù)的基層實(shí)驗(yàn)室，有廣闊的應(yīng)用前景。

3.3其他檢測(cè)方法 Aries鮑特菌測(cè)定法有較好的重復(fù)性，且ptxA僅存在于百日咳鮑特菌中，與IS481的核酸檢測(cè)法相比，Aries測(cè)定法具有更高的特異性。但該序列在百日咳鮑特菌基因組中只有1個(gè)拷貝，因此可能會(huì)影響檢測(cè)的敏感性。另外1個(gè)檢測(cè)靶標(biāo)IS1001還存在于少數(shù)支氣管敗血鮑特菌基因組中，盡管這種致病菌在人類百日咳感染中十分罕見，但是依然可能成為副百日咳鮑特菌假陽性的原因。由于Aries測(cè)定法針對(duì)的是百日咳鮑特菌和副百日咳鮑特菌的特定基因序列，因此無法鑒定霍氏鮑特菌和支氣管敗血鮑特菌。Aries鮑特菌測(cè)定法和BD Max系統(tǒng)簡(jiǎn)單便捷，自動(dòng)化程度高，能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)和辨別2種臨床上能引起百日咳樣疾病的鮑特菌，在實(shí)驗(yàn)室快速診斷百日咳方面有廣闊的發(fā)展空間，但臨床實(shí)際應(yīng)用價(jià)值還需進(jìn)一步研究。不同核酸檢測(cè)方法的比較見表3。

表3 不同核酸檢測(cè)方法的比較

4 總結(jié)與展望

我國現(xiàn)行的百日咳診斷標(biāo)準(zhǔn)有對(duì)不同臨床表現(xiàn)的區(qū)分定義：典型病例的臨床表現(xiàn)為陣發(fā)性、痙攣性咳嗽，持續(xù)咳嗽≥2周者；不典型病例的臨床表現(xiàn)為嬰兒有反復(fù)發(fā)作的呼吸暫停、窒息、青紫和心動(dòng)過緩癥狀，或有間歇的陣發(fā)性咳嗽；青少年和成人具有不典型較輕癥狀，卡他期、痙咳期、恢復(fù)期3期癥狀都縮短或無明顯的階段性，而只表現(xiàn)持續(xù)2周以上的長(zhǎng)期咳嗽。但是，該標(biāo)準(zhǔn)無法對(duì)當(dāng)下逐漸增加的隱性感染者以及副百日咳鮑特菌和霍氏鮑特菌引起的百日咳進(jìn)行及時(shí)準(zhǔn)確的診斷。在實(shí)驗(yàn)室檢查方面，與細(xì)菌學(xué)和血清學(xué)方法相比，核酸檢測(cè)方法對(duì)百日咳致病菌的診斷具有較高的敏感性和特異性，對(duì)于不符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)的非典型病例、隱性感染者以及其他非百日咳鮑特菌引起的百日咳具有不可替代的意義，是臨床檢測(cè)百日咳的重要手段。我國目前百日咳實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的普及程度有限，患病率被嚴(yán)重低估[48]。因此，為滿足臨床診斷和公共衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的監(jiān)測(cè)需求，修訂百日咳臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，亟待制定統(tǒng)一的實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)。