沙棘糖漿對食積癥模型小鼠的消食化滯作用

梁國棟，吳啟進(jìn)，娜黑芽

(1.內(nèi)蒙古盛唐國際蒙醫(yī)藥研究院有限公司，內(nèi)蒙古自治區(qū)蒙藥新藥研發(fā)企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古自治區(qū) 呼和浩特 010010；2.中國藥科大學(xué)，江蘇 南京 211198；3.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，內(nèi)蒙古自治區(qū) 呼和浩特 010010)

沙棘糖漿是基于蒙藥古籍《飲膳正要》中赤赤哈納(即沙棘)處方記載，以蒙藥古籍《蒙藥正典》中所述“沙棘祛痰，融化血，治巴達(dá)干病”等臨床適應(yīng)證為研究基礎(chǔ)[1]，通過將沙棘果壓榨成汁，經(jīng)提取、過濾、濃縮等一系列工序得到藥用沙棘果汁，加入蔗糖漿稀釋，最終形成以沙棘果汁為單方的原研糖漿劑。主治止咳祛痰，消食化滯，用于咳嗽痰多，消化不良，食積腹痛。本品療效顯著且劑型口感好，不僅能夠止咳祛痰，對消化不良、厭食癥等均有很好的療效。針對小兒食積咳嗽共病，沙棘糖漿通過雙重應(yīng)對，止咳祛痰的同時治療消化不良，臨床療效快速穩(wěn)定[2-3]。目前關(guān)于沙棘止咳祛痰作用的研究報道較多[4-5]，對消食化滯功能的藥理實(shí)驗(yàn)研究很少。胃動素(motilin，MTL)、胃泌素(gastrin，GAS)是常見的胃腸激素，其和胃蛋白酶(pepsin)能促進(jìn)胃腸運(yùn)動，幫助消化，在食積者體內(nèi)含量均會下降[6-7]。本實(shí)驗(yàn)通過觀察沙棘糖漿對食積癥模型小鼠排便量及胃液pH、胃蛋白酶、MTL、GAS的影響，初步探索其治療食積癥的作用機(jī)制，綜合評價沙棘糖漿消食化滯作用。

1 材料

1.1 藥品與試劑 沙棘糖漿(生藥量4.5 g·mL-1，自行制備，批號：17012101-42)；嗎丁啉(西安楊森制藥有限公司，批號:180711928)；高熱量高蛋白飼料(江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司，定制：將魚松、豆粉、面粉、奶粉按1∶2∶1∶1的比例混合，加水做成，批號:MD20190715-ZGYK)；胃蛋白酶試劑盒(南京森貝伽生物科技有限公司，批號:201909)；MTL試劑盒(南京森貝伽生物科技有限公司，批號:201909)；GAS試劑盒(南京森貝伽生物科技有限公司，批號:201909)；精密pH試紙(0.5～5.0)(上海三愛思試劑有限公司，批號:20190604)。

1.2 動物及飼料 SPF級昆明種小鼠60只，雌雄各半，3～4周齡，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2016-0011，使用許可證號：SYXK(蘇)2018-0019。所有動物實(shí)驗(yàn)均符合動物倫理委員會標(biāo)準(zhǔn)。小鼠生長繁殖飼料(江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司，批號：20190910)。

1.3 儀器 TD10001C電子分析天平(天津天馬衡基儀器有限公司)；2300型多功能酶標(biāo)儀(PerkElmer公司)；Allegra X-30R臺式高速冷凍離心機(jī)(Beckman公司)。

2 方法

2.1 分組、造模及給藥 動物適應(yīng)期結(jié)束以后，空白對照組飼喂常規(guī)飼料，其余各組飼喂定制的高熱量高蛋白飼料，實(shí)驗(yàn)第2天開始，加喂52%的牛奶溶液[0.2 mL·(10 g)-1，灌胃]，每天兩次，食積后小鼠精神不振，活動減少，蜷縮扎堆，皮毛色黃無光澤，食量明顯減少；腹部膨隆脹滿，尿色黃，糞便黏膩質(zhì)軟，呈棕黃色。第14天后各組平均攝食量低于正常組20%以上為判定造模成功[8]。造模成功后按體重將小鼠隨機(jī)分成5組，分別為模型對照組，陽性對照組，沙棘糖漿高、中、低劑量組。高、中、低劑量組分別按18、6、2 g·kg-1劑量灌胃給藥，陽性對照組按4 mg·kg-1灌胃嗎丁啉，每天1次，連續(xù)給藥7 d，空白組和模型對照組灌胃動物飲用水，上述給藥體積均為10 mg·kg-1。

2.2 檢測指標(biāo)

2.2.1 代謝籠收集糞便，統(tǒng)計排便粒數(shù)，稱重糞便。

2.2.2 小鼠胃液pH、胃蛋白酶活性及MTL、GAS水平測定 末次給藥后，小鼠禁食不禁水24 h，麻醉后放血處死，立即剖腹，結(jié)扎賁門、幽門，剪取全胃，用蒸餾水洗去表面血污，濾紙吸干水分。將小鼠胃置于培養(yǎng)皿內(nèi)，沿胃小彎剖開胃腔，將胃轉(zhuǎn)入試管中，蒸餾水浸洗胃壁，浸洗液轉(zhuǎn)入同一試管中，后3 000 r·min-1，離心10 min收集胃液上清。精密pH試紙測定胃液pH值，試劑盒檢測胃蛋白酶、GAS、MTL。

3 結(jié)果

3.1 沙棘糖漿對小鼠排便的影響 本實(shí)驗(yàn)采用給小鼠飼喂高熱量高蛋白飼料，并加喂52%的牛奶，造食積癥動物模型，造模2周后小鼠行動緩慢，食欲下降，模型對照組平均攝食量比空白組下降了34.2%(已低于正常組20%以上)，判定造模成功。將50只小鼠按體重隨機(jī)分為模型對照組，陽性對照組，沙棘糖漿高、中、低劑量組。沙棘糖漿對小鼠排便粒數(shù)和糞便重量的影響見表1，結(jié)果顯示沙棘糖漿高劑量和陽性對照組均能增加小鼠的排便粒數(shù)(與模型對照組相比，P<0.05)，且有增加排便的重量的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(與模型對照組相比，P>0.05)。

表1 沙棘糖漿對各組小鼠糞便粒數(shù)及糞便重量的影響

3.2 沙棘糖漿對小鼠胃液pH值的影響 沙棘糖漿對小鼠胃液pH值的影響見表2，結(jié)果顯示沙棘糖漿高劑量可降低胃液pH值，與模型對照組相比有顯著差異(P<0.05)，其余各劑量組有降低pH值的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(與模型對照組相比，P>0.05)。結(jié)果表明，沙棘糖漿具有可降低胃液pH值，調(diào)節(jié)胃液的總酸度的功能。

表2 沙棘糖漿對各組小鼠胃液pH值的影響

3.3 沙棘糖漿對小鼠胃功能(MTL、GAS、胃蛋白酶)的影響 與空白組比較，模型對照組小鼠胃液MTL水平顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與模型對照組比較，沙棘糖漿中劑量組胃液中MTL水平顯著升高，有顯著性差異(P<0.05)，高低劑量組和陽性對照組有升高的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，詳見表3。

與空白組比較，模型對照組小鼠胃液GAS有下降的趨勢，但差異不顯著(P>0.05)；與模型對照組相比，陽性對照組胃液中GAS有上升的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)上差異；沙棘糖漿各劑量GAS與模型對照組相比均無顯著差異(P>0.05)，提示沙棘糖漿對提升胃液GAS水平不顯著，詳見表3。

與空白組比較，模型對照組無顯著差異，提示該模型未能導(dǎo)致胃液中胃蛋白酶的變化；與空白組比較，陽性對照組中胃液中胃蛋白酶有上升的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；與模型對照組和空白組相比，沙棘糖漿各劑量組胃液中胃蛋白酶水平均無上升趨勢，亦無統(tǒng)計學(xué)上差異(P>0.05)，詳見表3。

表3 沙棘糖漿對各組小鼠胃功能(MTL、GAS、胃蛋白酶)的影響

4 討論

食積又稱食滯、飲食積滯，由飲食不當(dāng)(暴飲暴食、飲食不潔)為外因，脾胃功能失調(diào)為內(nèi)因，造成食物積滯的一種胃腸道疾病[9]。研究顯示食積癥患者胃腸道動力障礙與MTL釋放減少有關(guān)[10]。而胃腸動力障礙，可引起糞便排泌障礙，胃腸道微環(huán)境的改變，有研究顯示，GAS水平降低可能是胃排空延遲的病理生理機(jī)制，另有報道胃動力障礙患者GAS含量與正常人無明顯差異，可能與多元發(fā)病機(jī)制有關(guān)[10]。GAS為興奮性腦腸肽，能刺激胃蛋白酶的分泌。中醫(yī)學(xué)的食積癥相當(dāng)于西醫(yī)學(xué)的功能性消化不良，西醫(yī)治療方案采用抑制胃酸分泌藥、胃黏膜保護(hù)藥、促胃腸動力藥等。中醫(yī)治療有著方法多樣，安全性高，療效確切的獨(dú)特優(yōu)勢[11]。

沙棘糖漿具有止咳化痰、消食化滯的作用，用于咳嗽痰多，消化不良，食積腹痛的治療[12]。從中醫(yī)角度分析，依據(jù)《中成藥臨床用藥指南—兒科分冊》所述，厭食和功能性消化不良以健脾開胃為治療的基本原則。沙棘藥物性溫，味酸、澀，歸胃經(jīng)、脾經(jīng)，具有消食化滯的作用，對于厭食、消化不良的癥候表現(xiàn)具有很好的辨證治療作用[3]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，沙棘中含有大量氨基酸、有機(jī)酸等多種營養(yǎng)成分，還有酚類化合物，其可以促進(jìn)胃酸的生物合成，刺激胃液分泌。對于消化不良、厭食具有很好的療效[13]。純沙棘油富含維生素E、類胡蘿卜素、不飽和脂肪酸等活性成分，這些物質(zhì)能夠抑制胃蛋白酶的活性和降低游離酸濃度[14]。

本研究以飼喂高熱量，高蛋白飼料建立小鼠食積，胃腸障礙動物模型。由于嗎丁啉為外周多巴胺受體阻滯劑，直接作用于胃腸壁，增強(qiáng)胃蠕動，促進(jìn)胃排空，協(xié)調(diào)胃十二指腸運(yùn)動，本實(shí)驗(yàn)選用嗎丁啉為陽性對照品，改善胃脹障礙，恢復(fù)胃腸道微環(huán)境，同時對比評價沙棘糖漿對改善糞便排泌障礙和胃腸道環(huán)境的效果。

小鼠排便粒數(shù)減少和重量降低說明食積導(dǎo)致了便秘，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型對照組比較，陽性對照組具有增加小鼠糞便粒數(shù)的作用，說明有改善便秘的效果(P<0.05)，沙棘糖漿高劑量組有增加小鼠排便粒數(shù)的作用(P<0.05)，糞便重量增加不明顯(P>0.05)，證明沙棘糖漿高劑量有改變糞便體積的效果，可能由于高劑量組沙棘糖漿提高腸道對水分的吸收，促進(jìn)腸蠕動所致，但未能改變腸道對食物的利用率。對胃液pH值的檢測顯示沙棘糖漿高劑量有降低胃內(nèi)pH值作用，說明沙棘糖漿有改善食積導(dǎo)致胃內(nèi)pH升高的作用，使胃液恢復(fù)正常酸度。

通過對胃液MTL檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沙棘糖漿中劑量組和高劑量組能提高胃液中MTL的水平，其中沙棘糖漿中劑量組有顯著差異(與模型對照組相比，P<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組胃液中GAS水平有降低的趨勢，但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)的差異，沙棘糖漿各劑量組未能提高胃液GAS素的水平。對胃蛋白酶的檢測發(fā)現(xiàn)，各組胃蛋白酶的水平無差異，顯示此模型未能引起胃蛋白酶的變化，且沙棘糖漿對胃液胃蛋白酶的水平無調(diào)節(jié)效果。

綜上所述，沙棘糖漿可以改善小鼠胃液酸度，增強(qiáng)胃液中MTL水平。表明沙棘糖漿具有消食化滯作用，與臨床主治功能一致，本研究為沙棘糖漿的臨床應(yīng)用及推廣提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。