標(biāo)本處理方法對(duì)甲狀旁腺激素檢測(cè)的影響

王路長(zhǎng)，魏曉玲，賀 晨，游 婷，胡 瑩

四川省成都市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都 610017

甲狀旁腺激素(PTH)在甲狀旁腺合成，并分泌到血液中。完整甲狀旁腺激素(iPTH)是含有84個(gè)氨基酸的單個(gè)直鏈多肽，相對(duì)分子質(zhì)量約為9 500；其生物活性決定于N 端的第1～27 個(gè)氨基酸殘基；生物活性N-端片段的半衰期僅有幾分鐘。iPTH的選擇性測(cè)定可直接判定甲狀旁腺的分泌能力[1-3]。血液中PTH存在3種形式[4]：(1)iPTH(1～84)，具有生物活性，占5%～20%，半衰期非常短(2～4 min)；(2)羧基端PTH片段，無(wú)生物活性，如PTH(36～84)、PTH(44～84)、PTH(49～84)、PTH(53～84)等，占75%～95%，半衰期可達(dá)25～60 min；(3)氨基端PTH片段，有生物活性，如PTH(1～34)，血中水平較低，半衰期亦短?！度珖?guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[5]推薦使用血清檢測(cè)；世界衛(wèi)生組織(WHO)文件[6]則推薦使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血漿檢測(cè)，但針對(duì)不同的機(jī)型，也可使用或限制性使用血清、肝素抗凝血漿和枸櫞酸鈉抗凝血漿。本院使用日本東曹AIA2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀，在測(cè)定PTH的說(shuō)明書(shū)上要求使用血清或者EDTA 抗凝血漿。由于筆者曾遇到過(guò)因質(zhì)控保存問(wèn)題導(dǎo)致結(jié)果失控的事件，后來(lái)在文獻(xiàn)中發(fā)現(xiàn)標(biāo)本保存對(duì)其結(jié)果存在影響，為了明確標(biāo)本類型及保存條件對(duì)PTH檢測(cè)結(jié)果的影響，特設(shè)計(jì)此試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

1 資料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 選擇2019年3-7月在本院就診的10例患者，所取標(biāo)本的iPTH結(jié)果覆蓋本儀器測(cè)定的線性范圍(0～1 000 pg/mL)高中低值。

1.2儀器與試劑 日本東曹AIA2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀及其配套的iPTH檢測(cè)試劑(批號(hào):I9R5217)及校準(zhǔn)品(批號(hào)：200520646180000)，質(zhì)控品采用美國(guó)伯樂(lè)公司生產(chǎn)的內(nèi)分泌質(zhì)控品(批號(hào)：54640)雙水平，采血管采用成都瑞琦科技實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)的血清管(黃管)、EDTA管(紫管)、肝素管(綠管)，所有試管、試劑、定標(biāo)液、質(zhì)控品均在有效期內(nèi)。

1.3方法 儀器處于穩(wěn)定狀態(tài)，所有測(cè)試與患者標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)，在檢測(cè)過(guò)程中，兩水平質(zhì)控CV值均低于8%(1/3個(gè)最大允許誤差25%)。所有標(biāo)本在采集后2 h內(nèi)進(jìn)行初次檢測(cè)，每例患者采集9管血液，每種試管各3管，分為3組，每組包括每例患者每種試管各一管，一組冷藏(2～8 ℃，平均溫度4.9 ℃)保存，一組冷凍(-18～-22℃，平均溫度-21 ℃)保存，測(cè)定時(shí)間均為0、8、24、72 h；一組室溫(18～25 ℃)保存，測(cè)定時(shí)間為0、2、4、8、24 h。

2 結(jié) 果

2.1各種試管0 h結(jié)果比較 以試劑說(shuō)明書(shū)及WHO推薦的EDTA抗凝管作為標(biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行比較。所有標(biāo)本0 h(2 h內(nèi))測(cè)定結(jié)果的比較時(shí)，血清管、肝素管分別與EDTA管之間的結(jié)果比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 血清及不同抗凝劑0 h(2 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果)所測(cè)PTH結(jié)果比較

2.2室溫保存結(jié)果 血清管檢測(cè)結(jié)果隨著時(shí)間的推移，iPTH檢測(cè)結(jié)果逐漸降低，2、4、8、24 h的檢測(cè)結(jié)果與0 h比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，放置24 h后，結(jié)果降低幅度達(dá)22.56%。EDTA管檢測(cè)結(jié)果隨時(shí)間推移變化不大，2、4、8、24 h的檢測(cè)結(jié)果與0 h比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。肝素管檢測(cè)結(jié)果在4 h內(nèi)結(jié)果穩(wěn)定，8、24 h的檢測(cè)結(jié)果與0 h比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 室溫保存中血清及不同抗凝劑所測(cè)iPTH結(jié)果的比較及變化情況

2.3冷藏保存結(jié)果 血清管隨時(shí)間的推移逐漸降低，8、24、72 h iPTH的檢測(cè)結(jié)果與0 h比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),放置72 h后，結(jié)果降低幅度達(dá)23.35%，從結(jié)果上顯示冷藏降低的幅度略低于室溫，24 h達(dá)15.98%；EDTA管和肝素管在冷藏下72 h內(nèi)結(jié)果穩(wěn)定性較好，8、24、72 h的檢測(cè)結(jié)果與0 h比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 冷藏(2～8 ℃)血清及不同抗凝劑所測(cè)iPTH結(jié)果的比較及變化情況

2.4冷凍保存結(jié)果 血清管、EDTA管和肝素管在冷凍保存下，8、24、72 h iPTH的檢測(cè)結(jié)果均較0 h降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但是在冷凍8 h后，隨著時(shí)間增加降低效果不明顯。見(jiàn)表4。

表4 冷凍(-18～-22 ℃)血清及不同抗凝劑所測(cè)iPTH結(jié)果的比較及變化情況

3 討 論

PTH調(diào)節(jié)鈣磷代謝，是維持機(jī)體鈣平衡的主要激素，其分泌水平影響著血鈣和血磷水平，促使血鈣水平升高，血磷水平下降[7-8]。PTH作用的主要靶器官是骨和腎臟,其主要是通過(guò)促進(jìn)腎小管對(duì)鈣離子的重吸收和磷酸鹽的排泄，使血鈣水平增加和血磷水平下降。血清中PTH水平過(guò)低導(dǎo)致低鈣血癥，低鈣血癥導(dǎo)致的癥狀包括肌肉痙攣、手足抽搐，影響心功能，甚至引起心肌損傷，并有報(bào)告顯示PTH導(dǎo)致的鈣離子平衡紊亂與高血壓相關(guān)。PTH通過(guò)抑制近端腎小管磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白增加腎臟排磷，其缺乏可引起高磷血癥、甲狀旁腺功能亢進(jìn)等，可造成腎性骨病、周圍神經(jīng)系統(tǒng)改變以及頑固性的皮膚問(wèn)題等，對(duì)患者的生命質(zhì)量造成影響。因此，準(zhǔn)確測(cè)量PTH水平對(duì)于采取何種治療，以及對(duì)治療的效果進(jìn)行評(píng)估都非常重要。檢驗(yàn)科的責(zé)任就是為臨床提供真實(shí)、可靠的檢驗(yàn)指標(biāo)，為其診療提供指導(dǎo)和幫助，而分析前的因素對(duì)檢驗(yàn)準(zhǔn)確性影響巨大，檢驗(yàn)人員必須嚴(yán)格控制這些因素，降低這些因素帶來(lái)的危害，為患者為臨床提供一份高質(zhì)量的檢驗(yàn)報(bào)告。

PTH的檢測(cè)最早使用放射免疫分析法，由于放免方法的污染性強(qiáng)，現(xiàn)在基本試劑廠家均采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)。本科室的日本東曹AIA2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀采用雙抗體夾心的方法測(cè)定血清中iPTH，該片段為活性成分，但是半衰期較短，因此標(biāo)本的保存處理將會(huì)大大地影響結(jié)果。通過(guò)本次研究，筆者發(fā)現(xiàn)該公司檢測(cè)試劑的最佳抗凝劑與WHO推薦的使用EDTA抗凝管[6]相符，EDTA抗凝血清在室溫(18～25 ℃)及冷藏(2～8 ℃)的穩(wěn)定時(shí)間可以達(dá)到72 h,與之前王春雷[9]的研究結(jié)果基本相符,也可以使用肝素抗凝，雖然冷藏(2～8 ℃)穩(wěn)定時(shí)間可達(dá)到72 h，但是在室溫時(shí)，4 h內(nèi)尚穩(wěn)定，8 h后下降明顯，可能是隨著時(shí)間的推移，部分iPTH與肝素非特異性結(jié)合導(dǎo)致[10]；對(duì)于血清管，在放置2 h結(jié)果就已經(jīng)開(kāi)始下降大約4%，并且隨后成倍降低，24 h就降低高達(dá)20%；原因可能為血標(biāo)本在凝固時(shí)釋放某些物質(zhì)加速了iPTH的降解，而EDTA和肝素可以維持完整iPTH的穩(wěn)定，降低其降解速度。雖然不同廠家在檢測(cè)具體物質(zhì)方面可能存在差異，但是通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于檢測(cè)完整的iPTH片段來(lái)說(shuō)，最好使用EDTA或者肝素抗凝，而且在標(biāo)本采集后應(yīng)盡快離心檢驗(yàn)，如果不能及時(shí)檢驗(yàn)，可以放置于2～8 ℃冰箱內(nèi)，可以穩(wěn)定72 h，最好不要分裝凍存。