血清抗體檢測(cè)在新型冠狀病毒感染診斷中的臨床價(jià)值

劉國(guó)生，唐生堯，褚志華，曾守逵，鄭建瓊

湖北民族大學(xué)附屬民大醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科(湖北 恩施 445000)

新型冠狀病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2，SARS-CoV-2)是冠狀病毒中的一種，是新型冠狀病毒肺炎(Coronavirus Infected Disease-19，COVID-19)的病原體，該病毒為不分節(jié)段的單股正鏈RNA病毒，有包膜，顆粒呈圓形或橢圓形，常為多形性，直徑60～140 nm[1-4]。SARS-CoV-2感染后，患者一般要經(jīng)歷潛伏期、發(fā)病期和康復(fù)期等復(fù)雜過程，且SARS-CoV-2感染者是主要的傳染源，具有人傳人的特性，呈現(xiàn)家族聚集性傳播，其傳染性較強(qiáng)，感染后治愈周期較長(zhǎng)，具有一定的致死率而深受關(guān)注[5-6]。本研究主要通過檢測(cè)血清中SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體，觀察分析其在臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2020年1月24日-2月25日湖北民族大學(xué)附屬民大醫(yī)院及其醫(yī)聯(lián)體醫(yī)院(均為COVID-19定點(diǎn)收治醫(yī)院)收治的住院患者61例，其中包括已經(jīng)核酸檢測(cè)的COVID-19患者35例，男19例，女16例，年齡7～87歲，平均(58±32)歲，以及根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案(試行第六版)》的標(biāo)準(zhǔn)[7]，未經(jīng)核酸檢測(cè)的疑似患者26例作為病例組，男14例，女12例，年齡32～73歲，平均(51±22)歲。選取健康體檢者60例作為正常對(duì)照組，男33例，女27例，年齡29～64歲，平均(45±19)歲。

1.2觀察指標(biāo)采集空腹靜脈血液標(biāo)本，3 500 r /min離心10 min分離血清，采用膠體金法行SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體檢測(cè)分析。試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供(科研試劑)，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。

1.3結(jié)果判斷SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性：出現(xiàn)質(zhì)控線(C)和檢測(cè)線(T)。陰性結(jié)果：僅出現(xiàn)一條質(zhì)控線(C)，不出現(xiàn)檢測(cè)線(T)。無效結(jié)果：不出現(xiàn)或只出現(xiàn)一條檢測(cè)線(T)，表明測(cè)試無效，需重新檢測(cè)。聯(lián)合檢測(cè)特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用EXCEL建立數(shù)據(jù)庫(kù)，采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1COVID-19確診患者血清中SARS-CoV-2IgM和IgG抗體檢測(cè)結(jié)果比較35例COVID-19確診患者血清中SARS-CoV-2 IgM抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)者33例，陰性反應(yīng)者2例，SARS-CoV-2 IgG抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)32例，陰性反應(yīng)3例，SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體均呈陽(yáng)性反應(yīng)31例，均呈陰性反應(yīng)1例，其中有1項(xiàng)呈陽(yáng)性反應(yīng)3例。結(jié)果表明，SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體在COVID-19患者中檢出敏感度分別為94.29%(33/35)，91.43%(32/35)，兩者聯(lián)合檢測(cè)敏感度為97.14%(34/35)，假陰性率為2.86%(1/35)，見表1。

表1 COVID-19確診患者血清中SARS-CoV-2IgM和IgG抗體檢測(cè)結(jié)果比較(n)

2.226例疑似患者SARS-CoV-2抗體和核酸檢測(cè)結(jié)果26例疑似患者中SARS-CoV-2抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)13例，核酸檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)8例，SARS-CoV-2抗體檢測(cè)陽(yáng)性率50.00%(13/26)顯著高于核酸檢測(cè)的陽(yáng)性率30.77%(8/26)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.1，P<0.01)，見表2。

表2 26例COVID-19疑似患者SARS-CoV-2抗體和核酸檢測(cè)結(jié)果比較(n)

2.3SARS-CoV-2IgM和IgG抗體檢測(cè)特異性正常對(duì)照組60例受試者血清中SARS-CoV-2 IgM抗體均呈陰性反應(yīng)，特異性100%(60/60)，IgG抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)1例，陰性反應(yīng)59例，特異性98.33%(59/60)，兩者聯(lián)合檢測(cè)特異性為98.33%(59/60)，見表3。

表3 60例正常對(duì)照受試者血清中SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體檢測(cè)結(jié)果(n)

3 討論

SARS-CoV-2是COVID-19的病原體，于2019年12月在湖北省武漢市爆發(fā)[8-10]，隨后在全國(guó)各地及全球多個(gè)國(guó)家出現(xiàn)了確診病例，國(guó)務(wù)院緊急將其劃分為乙類傳染病，按甲類傳染病進(jìn)行管理，全國(guó)31個(gè)省、自治區(qū)、直轄市被迫啟動(dòng)了公共衛(wèi)生安全Ⅰ級(jí)響應(yīng)。該病毒人類普遍易感，無地域差異性，其基因測(cè)序同SARS-CoV高度同源，被稱為SARS-CoV的姊妹。SARS-CoV-2攻擊的主要靶器官是肺，感染后以發(fā)熱、干咳、乏力為主要臨床癥狀，少數(shù)患者會(huì)伴有腹瀉、頭痛、胸悶等臨床特點(diǎn)，重癥患者可出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等多器官損害，病情兇險(xiǎn)，極少數(shù)病情危重，可致死亡。SARS-CoV-2感染者是主要的傳染源，具有人傳人的特性，呈家族聚集性傳播，感染潛伏期也具有傳染性，主要通過呼吸道飛沫和密切接觸傳播，也存在糞-口傳播及氣溶膠傳播的可能[11-12]。

SARS-CoV-2核酸檢測(cè)陽(yáng)性是其感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，普遍使用的方法是實(shí)時(shí)熒光定量PCR法。該法首先需要對(duì)標(biāo)本中的核酸序列進(jìn)行擴(kuò)增，獲得足夠的核酸數(shù)量后，通過熒光等常規(guī)方法進(jìn)行檢測(cè)，但因其受到標(biāo)本采集、運(yùn)送、核酸提取質(zhì)量、檢驗(yàn)試劑、實(shí)驗(yàn)條件等多因素的影響，核酸檢測(cè)陽(yáng)性率較低。有研究指出[13]在人體感染SARS-CoV-2后，其抗原刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，血清中出現(xiàn)相應(yīng)的抗體，其中IgM出現(xiàn)較早，3～5 d即可升高，隨后IgG效價(jià)迅速上升，隨著病情的轉(zhuǎn)歸，IgM抗體衰減消失。本研究結(jié)果顯示，35例確診病例中，33例檢測(cè)到了IgM抗體，敏感度為94.29%。2例未檢測(cè)到IgM抗體，提示可能感染時(shí)間長(zhǎng)，病毒已逐漸被機(jī)體清除，IgM抗體消失所致。35例確診病例中，32例檢測(cè)到了IgG抗體，陽(yáng)性率為91.43%，3例未檢測(cè)到IgG抗體，提示可能感染時(shí)間較短，機(jī)體可能還未產(chǎn)生IgG抗體。26例疑似病例中，SARS-CoV-2抗體檢測(cè)陽(yáng)性率50.00%(13/26)顯著高于首次核酸檢測(cè)的陽(yáng)性率30.77%(8/26),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。其余5例抗體陽(yáng)性疑似病例也通過第二次核酸檢測(cè)陽(yáng)性轉(zhuǎn)為確診病例。正常對(duì)照組60例健康體檢者SARS-CoV-2 IgM抗體檢測(cè)均呈陰性反應(yīng)，特異性100%(60/60)，IgG抗體呈陽(yáng)性1例，陰性59例，特異性98.33%(59/60)，兩者聯(lián)合檢測(cè)的特異性為98.33%(59/60)，說明人類體內(nèi)不存在或極少存在針對(duì)SARS-CoV-2的特異性抗體，也應(yīng)證了人類對(duì)SARS-CoV-2的普遍易感。

本研究重點(diǎn)探討了血清SARS-CoV-2抗體IgM和IgG的檢測(cè)敏感度和特異性，揭示了其在臨床應(yīng)用的價(jià)值，但因受到確診病例和疑似病例標(biāo)本數(shù)量的影響，其研究結(jié)果必然存在一定的偶然性。一般情況下，當(dāng)病原微生物感染機(jī)體激活免疫系統(tǒng)后，首先產(chǎn)生IgM抗體，隨后快速下降直至消失，而IgG通常在IgM之后出現(xiàn)，并且能夠保持較高水平在機(jī)體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間維持。但鑒于SARS-CoV-2是一種新的病原體，目前對(duì)其感染人體后抗體產(chǎn)生的規(guī)律還沒有相關(guān)報(bào)道。由于本研究的局限性，血清SARS-CoV-2抗體IgM和IgG產(chǎn)生的時(shí)間周期，檢測(cè)的敏感度、特異性、假陽(yáng)性率和假陰性率等問題，還有待進(jìn)一步運(yùn)用大樣本、大數(shù)據(jù)進(jìn)行深入研究分析。

綜上所述，應(yīng)用膠體金法對(duì)血清中的SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)，適用于隱性感染及大規(guī)模人群篩查。同時(shí)，血清SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體檢測(cè)與新型冠狀病毒核酸檢測(cè)可形成有效的互補(bǔ)，作為感染診斷的依據(jù)，為SARS-CoV-2感染的防治提供參考依據(jù)。臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)患者的臨床資料和流行病學(xué)史，及時(shí)合理選擇SARS-CoV-2 IgM和IgG抗體檢測(cè)，盡早對(duì)其感染患者進(jìn)行篩查。