外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群與自然殺傷細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)及臨床意義

鄭 奇，曾云芳，桂夢嵐，郭秀梅

(成飛醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610092)

在二十世紀(jì)中葉以后發(fā)展中國家肺癌發(fā)病率和死亡率迅速增高，且居惡性腫瘤死因第一位[1]。我國肺癌發(fā)病率也是呈直線上升的趨勢，每年以11.9%的速度增長，男性多于女性，35～75歲多見，高峰為55～65歲[2]。吸煙是導(dǎo)致肺癌發(fā)生的主要誘因，此外大氣污染、職業(yè)危害等其他因素也可引起肺癌。肺癌分為小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)，NSCLC占所有肺癌病例的85%以上。由于早期診斷手段不足，導(dǎo)致臨床診斷時大部分患者已為中晚期，因此NSCLC患者5年生存率低[3]。有研究表明，在機(jī)體抗腫瘤免疫過程中，細(xì)胞免疫是關(guān)鍵所在，而細(xì)胞的數(shù)量、質(zhì)量的變化情況機(jī)體對腫瘤免疫監(jiān)控異常的重要指標(biāo)[4]。本文分析非小細(xì)胞肺癌患者中外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群與自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)表達(dá)以及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取本院2017年1月到2019年5月收治的94例NSCLC患者(觀察組)，男56例，女38例，年齡35～80歲[(55.21±6.15)歲]，體重指數(shù)(BMI)(19.53±2.89)kg/m2，所有患者經(jīng)病理檢查，其中腺癌55例，鱗癌33例，未分化癌6例；出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移51例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例；根據(jù)腫瘤分期，I～I(xiàn)I期62例，III～I(xiàn)V期32例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)檢查、臨床檢查等確診；②符合2010年NCCN肺癌國際分期標(biāo)準(zhǔn)[5]，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室、CT檢查、纖維支氣管鏡、病理活檢等確診為I～I(xiàn)V期NSCLC患者；③知曉并同意本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肺部疾病者；②臨床資料不完整，不配合本研究者；③合并血液疾病、精神病、溝通障礙者；④合并嚴(yán)重心腦血管、肝臟、腎臟疾病者；⑤合并其他惡性腫瘤者。選擇本院同期健康體檢者89例(健康組)，男51例，女35例，年齡39～77歲[(54.68±8.82)歲]，BMI(20.01±4.11)kg/m2，健康組均無相關(guān)肺部疾病，身體健康，無吸煙史。兩組基線資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。

1.2 方法所有人在清晨空腹時進(jìn)行靜脈外抽血采血5 ml，乙二胺四乙酸抗凝，備用。試劑：MultiTEST IMK 四色、免洗淋巴細(xì)胞亞群分析試劑盒(美國BD公司)。儀器：FACSCalibur 型流式細(xì)胞分析儀。過程：將100 μl抗凝全血放置在專門的流式試管中，并加入單克隆抗體(20 μl)，在充分混勻后靜置進(jìn)行反應(yīng)，注意避光儲存。按照說明書操作，將未標(biāo)記的細(xì)胞以及紅細(xì)胞完全溶解。最后使用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群(Th1、Th2、Th1/Th2、Th17、Treg、Th17/Treg)及NK細(xì)胞的檢測。操作步驟嚴(yán)格按照儀器配套說明書進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)對所有患者進(jìn)行2年隨訪，計(jì)算患者生存率。觀察不同人群、病理類型，臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 23.0軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同人群外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較觀察組NK細(xì)胞、Th1、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表達(dá)低于健康組，Th2、Treg表達(dá)高于健康組(P<0.05)。見表1。

表1 不同人群外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較

2.2 不同病理類型NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較腺癌患者Th17、Th17/Treg表達(dá)低于鱗癌患者，Treg表達(dá)高于鱗癌(P<0.05)，見表2。

表2 不同病理類型NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較

2.3 不同臨床分期NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較I～I(xiàn)I期患者NK細(xì)胞、Th1、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表達(dá)高于III～I(xiàn)V期患者，Th2、Treg表達(dá)低于III～I(xiàn)V期患者(P<0.05)，見表3。

表3 不同臨床分期NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較

2.4 有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Th17、Th17/Treg表達(dá)低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，Treg表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，見表4。

表4 有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較

2.5 不同預(yù)后外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較2年后94例患者中存活者62例，死亡32例；死亡組NK細(xì)胞、Th2、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表達(dá)低于生存組，Th1、Treg表達(dá)高于生存組(P<0.05)，見表5。

表5 不同預(yù)后外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞表達(dá)情況比較

3 討論

肺癌嚴(yán)重的威脅到了人類的健康，而肺癌又以NSCLC占大多數(shù)。根據(jù)以往報(bào)道提出機(jī)體的免疫功能與NSCLC患者的病情發(fā)展與發(fā)生存在相關(guān)性，而細(xì)胞的免疫應(yīng)答也是機(jī)體在抗腫瘤中重要的免疫機(jī)制[6]。T淋巴細(xì)胞可介導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫，在腫瘤免疫的過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，大量的研究數(shù)據(jù)說明，在T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量、質(zhì)量有異常后，會導(dǎo)致機(jī)體免疫紊亂并可連帶出現(xiàn)病理變化；NK細(xì)胞則對腫瘤有直接的殺傷作用，而近年研究也提出，NK細(xì)胞存在這較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能[7，8]。

為效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的主要成員CD4+T淋巴細(xì)胞最初可分為Th1和Th2兩類亞群[9]。IL-2、INF-γ、腫瘤壞死因子等介導(dǎo)免疫反應(yīng)由Th1分泌，可有效抑制腫瘤血管生成，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡等作用。Th2可分泌IL-4、IL-5、IL-13、IL-10進(jìn)行免疫反應(yīng)。兩者在正常的情況下相互制衡、調(diào)節(jié)，在炎性因子的調(diào)控下處于動態(tài)平衡的情況，但在機(jī)體出現(xiàn)病理變化后，會導(dǎo)致機(jī)體免疫功能遭到破壞，Th1、Th2平衡被破壞，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)免疫性疾病、腫瘤等[10]。

以往研究指出，在乳腺癌、肝癌、肺癌等多種惡性腫瘤中，Th1細(xì)胞表達(dá)均呈下降趨勢，而Th2細(xì)胞表達(dá)為增高趨勢，而兩者比值則下降[11]。本研究中，NSCLC患者Th1、Th1/Th2表達(dá)低于健康組，Th2表達(dá)高于健康組；I～I(xiàn)I期患者NK細(xì)胞、Th1、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表達(dá)高于III～I(xiàn)V期患者，Th2、Treg表達(dá)低于III～I(xiàn)V期患者；死亡組與生存組NK細(xì)胞、Th1、Th2、Th1/Th2、Th17、Treg、Th17/Treg表達(dá)上也有明顯差異。目前研究發(fā)現(xiàn)，與Th1/Th2細(xì)胞亞群不同的是CD4+效應(yīng)T淋巴細(xì)胞亞群，可產(chǎn)生出IL-17，因此被稱為Th17[12]。在臨床研究中表明此細(xì)胞因子可將中性粒細(xì)胞聚集在，從而誘導(dǎo)細(xì)胞釋放炎性因子，以此來達(dá)到調(diào)控機(jī)體免疫能力，控制疾病、腫瘤進(jìn)展[13]。而Treg則可分泌出IL-4、IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β等，對T淋巴細(xì)胞活化有抑制作用，在肝癌、卵巢癌、結(jié)腸癌等腫瘤中均出現(xiàn)異常增高的情況；在以往研究中[14]也證明Treg具有促癌因子作用，此外有研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌患者外周血中，其CD4+、CD25+細(xì)胞比列有異常增高，且腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵蝕、預(yù)后和Treg存在著明顯相關(guān)性[15]。

本研究結(jié)果中，NSCLC患者Treg表達(dá)高于對照組，Th17/Treg低于對照組，在NSCLC患者不同分期、病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)現(xiàn)，CD4+T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)各有特點(diǎn)，鱗癌、和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者外周血中Th17/Treg比例增高，說明Th17/Treg和NSCLC患者的臨床分期、病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系[16，17]，外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群有著重要的免疫調(diào)節(jié)作用，各個亞群發(fā)揮著其相應(yīng)的作用，而Th17/Treg、Th1/Th2是否處于平衡狀態(tài)對機(jī)體免疫功能的維持存在影響[18，19]。而NK細(xì)胞在活化后可發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)，因此對腫瘤的發(fā)展有抑制作用，本研究中，NSCLC患者外周血腫NK細(xì)胞低于對照組；III～I(xiàn)V期患者低于I～I(xiàn)I期患者，說明在腫瘤發(fā)展和病情進(jìn)展中，機(jī)體的免疫能力減低，對腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)免疫耐受的情況，特別是NK細(xì)胞功能，導(dǎo)致免疫功能有進(jìn)行性下降。在熊佳時等[20]研究中也提出外周血 T 細(xì)胞亞群、NK 細(xì)胞與NSCLC患者臨床分期及預(yù)后的相關(guān)性，可反映出患者病情進(jìn)展以及治療和預(yù)后，與本文研究結(jié)果一致。

綜上所述，外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群(h1、Th2、Th17、Treg)、NK殺傷細(xì)胞在NSCLC的發(fā)展與發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用，在一定程度上可反映出患者病情變化，對了解患者免疫機(jī)制有重要的參考價(jià)值。