腦出血患者血清8-OHDG、VILIP-1水平變化及臨床意義

閆海光，唐廣海，初照成

沈陽(yáng)市第二中醫(yī)醫(yī)院，沈陽(yáng) 110101

腦出血是各類型腦卒中中病死率和致殘率最高的腦血管疾病，發(fā)病率為24.6/10萬(wàn)，且存活者仍有再出血和缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)后比缺血性腦卒中差[1]。腦出血可引起不同程度的神經(jīng)功能缺損，反映神經(jīng)功能損傷的生物學(xué)指標(biāo)可能對(duì)腦出血病情評(píng)估和預(yù)后預(yù)測(cè)有重要價(jià)值[2]。8-羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)是DNA氧化應(yīng)激損傷因子，可直接產(chǎn)生神經(jīng)細(xì)胞DNA損傷，導(dǎo)致神經(jīng)功能受損[3]。視椎蛋白樣蛋白1(VILIP-1)是一種神經(jīng)鈣傳感蛋白，主要調(diào)控神經(jīng)元之間鈣離子通道或信號(hào)通路，在腦組織損傷時(shí)高度表達(dá)，是腦神經(jīng)損傷的特異性標(biāo)志物，參與腦損傷及神經(jīng)疾病發(fā)病過(guò)程[4]。目前8-OHDG、VILIP-1在腦出血中的報(bào)道很少見，鑒于兩者在神經(jīng)損傷中的作用，推測(cè)其有可能參與腦出血發(fā)病和進(jìn)展。因此本研究檢測(cè)了118例腦出血患者血清8-OHDG、VILIP-1水平，探討其與腦出血臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2017年2月～2019年3月沈陽(yáng)市第二中醫(yī)醫(yī)院神經(jīng)外科收治的118例腦出血患者(腦出血組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)頭顱CT或MRI證實(shí)存在腦出血病灶；②符合第四屆全國(guó)腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議中腦出血診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；③首次發(fā)病，發(fā)病24 h內(nèi)入院；④年齡18～80周歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①顱腦外傷、顱內(nèi)動(dòng)脈瘤所致腦出血；②合并嚴(yán)重心、肝、腎臟器疾病或功能障礙；③精神或神經(jīng)系統(tǒng)疾?。虎芗甭愿腥?、惡性腫瘤、免疫疾病。其中男69例、女49例，年齡51～73(66.32±2.16)歲，基礎(chǔ)疾?。焊哐獕?5例、糖尿病41例、高脂血癥32例。另選擇100例我院門診接診的體檢者為對(duì)照組，均經(jīng)系統(tǒng)檢查排除腦血管疾病。其中男56例、女44例，年齡50～75(66.01±2.05)歲，基礎(chǔ)疾?。焊哐獕?1例、糖尿病36例、高脂血癥30例。兩組年齡、性別、基礎(chǔ)疾病比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本研究獲得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或其家屬均簽署知情同意書。

1.2 血清8-OHDG、VILIP-1檢測(cè) 兩組入院24 h內(nèi)采集空腹肘靜脈血3～5 mL，取上清置于TDZ4-WS低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司)4 ℃條件下離心，留取血清，保存于-80 ℃超低溫冰箱(Thermo Fisher公司)。采用雅培i2000化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑檢測(cè)血清8-OHDG，采用意大利BIOBASE2000型全自動(dòng)酶免分析儀，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清VILIP-1(試劑盒購(gòu)自美國(guó)Epitope Diagnostics公司)。

1.3 臨床病理特征資料收集 ①腦出血患者入組24 h內(nèi)采用斯堪的納維亞卒中量表(SSS)[6]評(píng)估患者病情嚴(yán)重程度。SSS量表從意識(shí)、強(qiáng)烈局部刺激、凝視功能、面癱、言語(yǔ)、肌力(上肢、手、下肢)、步行能力進(jìn)行評(píng)估，總分0～45分。腦出血組輕型(0～15分)41例、中型(16～30分)50例、重型(31～45分)27例。②采用多田式計(jì)算公式計(jì)算，出血量(mL)=π/6×長(zhǎng)(cm)×寬(cm)×高(cm)，長(zhǎng)、寬、高由CT或MRI測(cè)量所得，根據(jù)出血量將患者分為小量出血(<15 mL)46例、中量出血(15～30 mL)49例，大量出血(>30 mL)23例。③腦出血確診3個(gè)月后采用格拉斯哥預(yù)后(GOS)評(píng)分[7]評(píng)估患者預(yù)后，其中預(yù)后良好(GOS評(píng)分>4分)61例，預(yù)后不良(GOS評(píng)分≤4分)57例。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清8-OHDG、VILIP-1水平比較 腦出血組血清8-OHDG、VILIP-1水平高于對(duì)照組(P均<0.05)，見表1。

表1 兩組血清8-OHDG、VILIP-1水平比較

2.2 血清8-OHDG、VILIP-1水平與腦出血臨床病理特征的關(guān)系 血清8-OHDG、VILIP-1水平隨著腦出血量增加、病情嚴(yán)重程度增加而升高(P<0.05)；預(yù)后不良者血清8-OHDG、VILIP-1水平高于預(yù)后良好者(P<0.05)；不同年齡、性別之間血清8-OHDG、VILIP-1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2 血清8-OHDG、VILIP-1水平與腦出血臨床病理特征的關(guān)系

2.3 腦出血患者血清8-OHDG、VILIP-1水平與腦出血量、SSS評(píng)分、GOS評(píng)分的關(guān)系 腦出血患者血清8-OHDG水平與腦出血量、SSS評(píng)分呈正相關(guān)(r分別為0.462、0.421，P均<0.01)，與GOS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.519，P<0.01)；血清VILIP-1水平與腦出血量、SSS評(píng)分呈正相關(guān)(r分別為0.436、0.426，P均<0.01)，與GOS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.504，P<0.01)。

2.4 血清8-OHDG、VILIP-1水平對(duì)腦出血預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值 血清8-OHDG、VILIP-1、8-OHDG+VILIP-1水平預(yù)測(cè)腦出血患者預(yù)后不良的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.822、0.696、0.943，8-OHDG+VILIP-1預(yù)測(cè)腦出血患者預(yù)后不良的AUC高于單獨(dú)8-OHDG、VILIP-1(z分別為2.031、3.264，P均<0.05)，詳見表3。

3 討論

腦出血是神經(jīng)外科常見的腦血管疾病，該病發(fā)病急，病情進(jìn)展迅速且兇險(xiǎn)，早期得不到有效救治，可導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)的腦損傷或腦死亡等，病死率非常高，且多數(shù)存活者可遺留偏癱、發(fā)音障礙、失語(yǔ)等嚴(yán)重殘疾，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)[8]。早期判斷病情和疾病轉(zhuǎn)歸有助于指導(dǎo)臨床治療，提高患者存活率，降低殘疾程度。顱腦CT和MRI是診斷腦出血、評(píng)估病情嚴(yán)重程度的常用方法，但是檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜、重復(fù)性差，無(wú)法全面動(dòng)態(tài)評(píng)估患者疾病轉(zhuǎn)歸，尋找特異性腦損傷相關(guān)生物標(biāo)志物可以更好地指導(dǎo)臨床診治。

表3 血清8-OHDG、VILIP-1、8-OHDG+VILIP-1預(yù)測(cè)腦出血患者預(yù)后不良的效能分析

8-OHDG是內(nèi)外源DNA氧化損傷的標(biāo)志物，主要由羥自由基、超氧陰離子組成，作為氧化修飾產(chǎn)物，在ROS作用下脫氧鳥苷C-8位添加一個(gè)羥基形成。8-OHDG被特異性DNA修復(fù)酶剪切，并隨尿液排出體外[9]。8-OHDG通過(guò)修飾尿苷酸影響嘌呤、堿基結(jié)構(gòu)，引起DNA雙鏈結(jié)構(gòu)斷裂，抑制細(xì)胞增殖，促使細(xì)胞凋亡[10]。8-OHDG還可通過(guò)激活羥基自由基或氧自由基誘導(dǎo)神經(jīng)系統(tǒng)氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷神經(jīng)細(xì)胞線粒體，影響神經(jīng)細(xì)胞能量代謝，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡[11]。8-OHDG在腦梗死患者表達(dá)升高，血清8-OHDG水平與大腦中動(dòng)脈梗死確診30 d內(nèi)死亡密切相關(guān)(OR=1.568)[12]。抑制氧化性DNA損傷，可減少腦缺血大鼠神經(jīng)元凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[13]。8-OHDG在腦出血的報(bào)道尚不多見，1篇報(bào)道結(jié)果顯示急性腦梗死和腦出血患者血清8-OHDG水平明顯升高[14]。本研究結(jié)果顯示，腦出血患者血清8-OHDG水平高于對(duì)照組，且8-OHDG水平與腦出血量、SSS評(píng)分呈正相關(guān)，與GOS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明8-OHDG水平可反映腦出血患者病情嚴(yán)重程度以及疾病轉(zhuǎn)歸。8-OHDG參與腦出血及其病情進(jìn)展的發(fā)病機(jī)制可能為：腦出血可繼發(fā)氧化性損傷，氧化應(yīng)激下ROS大量產(chǎn)生，并迅速破壞機(jī)體抗氧化防御機(jī)制，造成腦組織損傷；8-OHDG在ROS氧化作用下大量產(chǎn)生，進(jìn)一步擴(kuò)大氧化應(yīng)激反應(yīng)，并上調(diào)凋亡誘導(dǎo)因子表達(dá)，促使神經(jīng)細(xì)胞凋亡，抑制神經(jīng)纖維再生，破壞神經(jīng)細(xì)胞和軸突功能，導(dǎo)致神經(jīng)功能進(jìn)行性缺損加重并遺留殘疾癥狀。

VILIP-1屬于神經(jīng)元鈣傳感蛋白視錐蛋白/恢復(fù)蛋白家族成員，在腦組織神經(jīng)元中表達(dá)豐富，主要發(fā)揮調(diào)控神經(jīng)元鈣離子通道和信號(hào)通路作用[15]。當(dāng)腦組織受損、血腦屏障破壞時(shí)，腦組織大量釋放VILIP-1進(jìn)入外周血液循環(huán)，血清VILIP-1升高是腦神經(jīng)元損傷的特異性生物學(xué)標(biāo)志物[16]。既往研究報(bào)道，血清VILIP-1水平在缺血性腦卒中患者中明顯升高，被認(rèn)為是一種典型的腦卒中生物標(biāo)志物，并與患者短期神經(jīng)功能預(yù)后密切相關(guān)[17]。VILIP-1在腦出血的報(bào)道少見。曾瑩等[18]報(bào)道顯示，高血壓腦出血患者血清VILIP-1水平升高，但該研究并未涉及VILIP-1在腦出血的臨床意義研究。本研究結(jié)果顯示，腦出血患者血清VILIP-1水平高于對(duì)照組，VILIP-1與腦出血量、SSS評(píng)分、GOS評(píng)分均存在密切關(guān)系，提示VILIP-1同樣參與腦出血后神經(jīng)損傷過(guò)程，可反映腦出血患者病情嚴(yán)重程度和短期預(yù)后。由于鈣離子通道涉及的病理生理機(jī)制復(fù)雜，VILIP-1在腦組織損傷的致病機(jī)制尚未完全明確，可能的機(jī)制為：VILIP-1通過(guò)參與微管蛋白磷酸化促使Aβ1-42沉積，Aβ1-42發(fā)揮神經(jīng)毒性作用，誘導(dǎo)神經(jīng)炎癥反應(yīng)和缺血缺氧性損傷，促使神經(jīng)細(xì)胞凋亡，并破壞血腦屏障。提示VILIP-1/Aβ1-42通路可能在腦出血后神經(jīng)損傷中發(fā)揮重要作用。

本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，8-OHDG對(duì)腦出血預(yù)后具有較高預(yù)測(cè)價(jià)值，AUC達(dá)0.822，靈敏度達(dá)84.21%，特異度達(dá)81.97%。分析原因?yàn)?-OHDG作為氧化反應(yīng)代謝終產(chǎn)物只能由DNA氧化損傷產(chǎn)生，不受飲食、運(yùn)動(dòng)因素影響，體內(nèi)含量相對(duì)穩(wěn)定，因此可穩(wěn)定反映腦出血患者短期預(yù)后。VILIP-1預(yù)測(cè)腦出血患者短期預(yù)后的AUC達(dá)0.696，靈敏度達(dá)71.93%，特異度達(dá)70.49%，說(shuō)明VILIP-1評(píng)估腦出血患者短期神經(jīng)預(yù)后具有一定真實(shí)性和可靠性。8-OHDG和VILIP-1聯(lián)合大大提高腦出血預(yù)后的預(yù)測(cè)效能，提示血清8-OHDG和VILIP-1水平同時(shí)升高的腦出血患者發(fā)生不良預(yù)后的可能性更大，聯(lián)合兩項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)對(duì)預(yù)后評(píng)估更具價(jià)值。

綜上可見，腦出血患者血清8-OHDG、VILIP-1水平升高，高水平8-OHDG、VILIP-1提示腦出血量增加、神經(jīng)功能缺損程度加重和不良預(yù)后的可能，8-OHDG、VILIP-1可為腦出血患者病情嚴(yán)重程度和預(yù)后評(píng)估提供幫助。