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    針刀療法配合獨(dú)活寄生湯對(duì)腰椎間盤突出癥大鼠背根神經(jīng)節(jié)炎癥的干預(yù)效果

    2020-09-17 02:24:20剛,王
    針灸臨床雜志 2020年6期
    關(guān)鍵詞:背根獨(dú)活針刀

    洪 剛,王 丹

    (重慶開(kāi)州區(qū)人民醫(yī)院,重慶 405400)

    近年來(lái),腰椎間盤突出癥發(fā)病率受年齡及職業(yè)因素的影響而日漸升高,其病程長(zhǎng),主要表現(xiàn)為局部腰痛及下肢放射性疼痛,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[1]。神經(jīng)機(jī)械壓迫、炎癥刺激、血供障礙等是腰椎間盤突出癥主要發(fā)病機(jī)制,針刀療法對(duì)腰椎間盤突出癥患者療效確切,可利用鋒利刀刃對(duì)軟組織損傷處條索、硬結(jié)、粘連等進(jìn)行切割、剝離,恢復(fù)關(guān)節(jié)處力學(xué)平衡,同時(shí)結(jié)合了毫針針刺疏通損傷組織氣血,達(dá)到治療效果[2],而獨(dú)活寄生湯具有鎮(zhèn)痛、抗炎、改善血液循環(huán)等功效,也已逐步應(yīng)用于腰椎間盤突出癥的治療中[3],但有關(guān)兩者聯(lián)合應(yīng)用的報(bào)道尚不多見(jiàn),因此本研究旨在探究針刀療法與獨(dú)活寄生湯聯(lián)合應(yīng)用治療腰椎間盤突出癥大鼠的效果,分析其對(duì)背根神經(jīng)節(jié)炎癥的影響,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    70只清潔級(jí)健康SD大鼠,雄性,8周齡,體質(zhì)量200~250 g,購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證號(hào):2001A046,大鼠常規(guī)飼養(yǎng),室溫25℃左右,自由進(jìn)水、進(jìn)食。

    1.2 主要試劑

    獨(dú)活寄生湯(購(gòu)于中國(guó)人民解放軍第202醫(yī)院藥局,藥方組成:獨(dú)活12 g,秦艽、杜仲、桑寄生、牛膝、細(xì)辛各9 g,防風(fēng)、干地黃、當(dāng)歸、茯苓、川芎、肉桂心、芍藥、人參各6 g,甘草3 g);酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)試劑盒(金斯瑞生物科技有限公司);碘伏消毒劑(北京百諾威生物科技有限公司)等。

    1.3 主要儀器

    9號(hào)腰椎穿刺針(上海埃斯醫(yī)械塑料制品有限公司);一次性無(wú)菌HZ系列漢章針刀(北京卓越華友醫(yī)療器械有限公司,0.4 mm×0.4 mm);PL-200型熱痛測(cè)試儀(四川科儀誠(chéng)科技有限公司);5810R型低溫離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司);JY-SCZ2180型垂直電泳槽(西安賽維斯生物科技有限公司);NOVA型超薄切片機(jī)(瑞典LKB公司);CX23型光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司);Q550圖像處理系統(tǒng)(德國(guó)LEICA公司)。

    1.4 動(dòng)物模型構(gòu)建及分組

    將70只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、獨(dú)活寄生湯組、針刀組、針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組,各14只。除假手術(shù)組外,其余各組大鼠均構(gòu)建腰椎間盤突出癥大鼠模型[4]:術(shù)前1 d,于大鼠背部脫毛,以3.5 mL/kg 10%水合氯醛腹腔注射麻醉,距鼠尾根部1 cm處切斷鼠尾,切開(kāi)尾部椎間盤見(jiàn)髓核呈膠凍樣(約10 mg),取5個(gè)髓核,1 mg髓核加1 μL生理鹽水,混勻制備自體髓核混懸液,大鼠取屈曲側(cè)臥位,以9號(hào)腰椎穿刺針于L4~5棘突間隙行硬膜外穿刺,注射20 μL自體髓核混懸液,于硬膜外腔注射30 μL 2%利多卡因;假手術(shù)組以20 μL生理鹽水替代大鼠自體髓核混懸液,其他操作均同上。待大鼠清醒后若雙前肢活動(dòng)自如,雙后肢運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)喪失或減退,30 min左右完全恢復(fù)即證明硬膜外穿刺成功,繼續(xù)觀察,若大鼠雙后肢無(wú)癱瘓,且兩側(cè)后足熱痛反應(yīng)出現(xiàn)痛覺(jué)過(guò)敏即證明模型制備成功。

    1.5 各組動(dòng)物干預(yù)方法

    1.5.1 獨(dú)活寄生湯組 建模3 d后開(kāi)始灌胃獨(dú)活寄生湯13.8 mg/kg,1次/d,連續(xù)灌胃2周;

    1.5.2 針刀組 建模3 d后進(jìn)行針刀療法:將大鼠以自制襪套固定于鼠板上,于L4~5棘間、L4~5棘間旁開(kāi)0.1 cm處、患椎上下橫突及雙側(cè)坐骨神經(jīng)出口處以碘伏消毒,進(jìn)行針刀操作,均以HZ系列一次性針刀進(jìn)行針刀操作,①棘間:針刀刀口線方向與脊柱縱向軸方向一致,按四部規(guī)程刺入,待針刀有落空感(突破黃韌帶時(shí))微提針刀,稍加推進(jìn);②橫突點(diǎn):針刀刀口線方向與脊柱縱向軸方向一致,按四部規(guī)程刺入,松解完橫突后將針刀退至淺層,傾斜針刀從外到內(nèi),由淺層向深層松解至橫突根部,待有落空感時(shí)將針刀刀口線微調(diào)為“八字形”,向里稍加推進(jìn);③坐骨神經(jīng)出口處:針刀刀口方向與坐骨神經(jīng)走向一致,按四部規(guī)程刺入,待針刀有落空感時(shí)微提針刀然后稍加推進(jìn),均以碘伏消毒,進(jìn)行針刀操作,以大鼠下肢觸電樣抽動(dòng)為度,3次/周,治療2周。

    1.5.3 針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組 建模3 d后同時(shí)給予獨(dú)活寄生湯灌胃并施以針刀療法,方法同獨(dú)活寄生湯組及針刀組。

    1.5.4 模型組及假手術(shù)組 建模后正常飼養(yǎng)。

    1.6 大鼠熱痛刺激縮爪閾值

    分別于干預(yù)前及干預(yù)2周后將各組大鼠置于PL-200型熱痛測(cè)試儀的檢測(cè)盒內(nèi),加工熱光源通過(guò)儀器輻射到檢測(cè)盒底部玻璃板上并使其聚集至大鼠一側(cè)足底后半部分,光斑直徑5 mm,記錄從開(kāi)始照射至縮爪時(shí)間間隔,左右足交替測(cè)試3次,2次測(cè)試間隔5 min,取平均值[5]。

    1.7 HE染色

    觀察大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織病理變化,干預(yù)2周后待檢測(cè)大鼠熱痛刺激縮抓閾值結(jié)束后,將大鼠固定于鍘刀,端頭處死,迅速倒置,腹腔解剖,暴露并采集長(zhǎng)約2 mm的L5神經(jīng)根組織,于10%甲醛中固定24 h,常規(guī)制備厚約4 μm石蠟組織切片,進(jìn)行HE染色,于光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠背根神經(jīng)節(jié)病理形態(tài)[6]。

    1.8 ELISA法檢測(cè)大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織炎性因子含量

    背根神經(jīng)節(jié)組織采樣同1.7,研磨、勻漿,并以生理鹽水按1:10比例進(jìn)行稀釋制備組織懸液,以ELISA法檢測(cè)背根神經(jīng)節(jié)組織中白細(xì)胞介素1(IL-1)及腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量[7]。

    1.9 WB法檢測(cè)大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織炎性因子含量

    背根神經(jīng)節(jié)組織采樣同1.7,提取組織總蛋白,經(jīng)BCA法定量,取50 μg進(jìn)行WB檢測(cè),以β-actin為內(nèi)參,經(jīng)Q550圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)IL-1、TNF-α蛋白表達(dá)[8]。

    1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠熱痛刺激縮爪閾值比較

    模型組干預(yù)前及干預(yù)2周后熱痛刺激縮爪閾值均較假手術(shù)組縮短(P<0.05);與模型組及干預(yù)前比較,干預(yù)2周后獨(dú)活寄生湯組、針刀組及針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組大鼠熱痛刺激縮爪閾值均延長(zhǎng),且針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組長(zhǎng)于獨(dú)活寄生湯組、針刀組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

    表1 各組大鼠熱痛刺激縮爪閾值比較

    2.2 各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)病理學(xué)形態(tài)觀察

    HE染色顯示,假手術(shù)組小鼠背根神經(jīng)節(jié)組織細(xì)胞排列整齊,胞核位于中央,大且圓,核仁清晰,胞質(zhì)內(nèi)充滿顆粒樣尼氏小體;模型組細(xì)胞間隙距離增加,胞核固縮或偏移,胞質(zhì)溶解,呈空泡樣變,尼氏小體減少;獨(dú)活寄生湯組、針刀組及針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組上述病理變化均有不同程度的減輕。見(jiàn)圖1。

    注:A.假手術(shù)組; B.模型組; C.獨(dú)活寄生湯組; D.針刀組; E.針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組。圖1 HE染色觀察大鼠背根神經(jīng)節(jié)病理?yè)p傷(200×)

    2.3 ELISA法檢測(cè)各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)炎性因子含量

    ELISA檢測(cè)顯示,模型組大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織IL-1、TNF-α含量較假手術(shù)組顯著升高,而獨(dú)活寄生湯組、針刀組及針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組較模型組顯著降低,且針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組顯著低于獨(dú)活寄生湯組及針刀組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

    表2 各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織IL-1及TNF-α含量比較

    2.4 WB法檢測(cè)各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)炎性因子含量

    WB檢測(cè)顯示,模型組大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織IL-1、TNF-α蛋白相對(duì)表達(dá)量較假手術(shù)組顯著升高,而獨(dú)活寄生湯組、針刀組及針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組較模型組顯著降低,且針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組顯著低于獨(dú)活寄生湯組及針刀組(P<0.05)。見(jiàn)圖2、表3。

    注:A.假手術(shù)組; B.模型組; C.獨(dú)活寄生湯組; D.針刀組; E.針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組。圖2 WB法檢測(cè)大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織IL-1及TNF-α蛋白含量(200×)

    表3 各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織IL-1及TNF-α蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

    3 討論

    腰椎間盤突出癥主要是由纖維環(huán)、髓核產(chǎn)生退行性變,纖維環(huán)破裂,髓核脫出,導(dǎo)致相鄰脊神經(jīng)根受刺激或壓迫所致[9-10]。其屬于中醫(yī)“痹癥”范疇,風(fēng)、寒、濕、虛是其致病因素,而機(jī)體內(nèi)在的正虛是其發(fā)病的關(guān)鍵。獨(dú)活寄生湯最早記載于《備急千金要方》,主治風(fēng)寒濕痹,全方共奏祛風(fēng)濕、止痹痛、益肝腎及補(bǔ)氣血之功,邪正兼顧,驅(qū)邪不傷正,扶正不留邪[10-11]。獨(dú)活寄生湯可有效調(diào)控腰椎間盤突出癥大鼠髓核組織及纖維環(huán)組織中MMP-1表達(dá),抑制腰椎間盤退變,效果顯著;針刀療法整合了針刺療法及手術(shù)松解法,其利用“針刺”原理,疏通經(jīng)脈、行氣活血,并結(jié)合西醫(yī)“刀”的原理,松解粘連組織,解除擠壓,實(shí)現(xiàn)“以松致通、通則不痛”,可通過(guò)調(diào)節(jié)腰椎間盤突出癥大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織致痛因子表達(dá),改善其局部微循環(huán),進(jìn)而達(dá)到治療目的[12-14]。目前有關(guān)針刀療法結(jié)合獨(dú)活寄生湯共同治療腰椎間盤突出的效果尚未見(jiàn)報(bào)道,因此本研究以腰椎間盤突出大鼠模型為研究對(duì)象,進(jìn)行初步探究。

    腰椎間盤組織是機(jī)體最大的無(wú)血供組織,髓核因包裹于纖維環(huán)內(nèi)而與血液循環(huán)隔離,當(dāng)退行性病變或外傷導(dǎo)致椎間盤抗原與血液循環(huán)接觸后,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,釋放炎性介質(zhì),誘發(fā)炎性病變,導(dǎo)致疼痛。針刀具有比普通毫針更強(qiáng)的針刺效應(yīng)及針感,刺激穴位及經(jīng)絡(luò)后可行氣活血、通經(jīng)止痛;同時(shí)還可刮除瘢痕,松解組織粘連,有利于吸收炎性介質(zhì),消散炎性滲出,消除肌肉痙攣,恢復(fù)病變部位平衡,通利關(guān)節(jié)并改善關(guān)節(jié)功能。針刀療法能夠通過(guò)松解局部粘連改善腰椎間盤突出癥根性神經(jīng)痛大鼠微循環(huán)、促進(jìn)炎癥因子代謝、緩解疼痛;而獨(dú)活寄生湯可抑制炎性因子生成, 減輕髓核所致炎性反應(yīng),治療肝腎虧虛型腰椎間盤突出[15-16]。髓核脫出后可引發(fā)神經(jīng)根與背根神經(jīng)節(jié)形態(tài)、功能變化,脊神經(jīng)根微循環(huán)與營(yíng)養(yǎng)障礙是腰椎間盤突出癥的主要致痛機(jī)制[17]。本研究結(jié)果顯示,獨(dú)活寄生湯組、針刀組及針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組大鼠背根神經(jīng)節(jié)病理?yè)p傷均較模型組有所改善。提示針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯可有效改善腰椎間盤突出癥大鼠背根神經(jīng)節(jié)病理?yè)p傷;此外本研究結(jié)果顯示,干預(yù)2周后獨(dú)活寄生湯組、針刀組及針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組大鼠熱痛刺激縮爪閾值均較模型組延長(zhǎng),且針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組長(zhǎng)于獨(dú)活寄生湯組及針刀組;此外,獨(dú)活寄生湯組、針刀組及針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織IL-1、TNF-α含量及其蛋白相對(duì)表達(dá)量較模型組顯著降低,且針刀聯(lián)合獨(dú)活寄生湯組顯著低于獨(dú)活寄生湯組及針刀組。提示針刀療法配合獨(dú)活寄生湯可有效降低腰椎間盤突出癥大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織炎性細(xì)胞因子含量,有效緩解其炎性損傷,緩解疼痛。

    綜上,針刀療法配合獨(dú)活寄生湯可有效降低腰椎間盤突出癥大鼠背根神經(jīng)節(jié)組織炎性因子含量,改善其組織病變,進(jìn)而明顯提高大鼠熱痛刺激縮爪閾值,減輕疼痛,具有明顯的協(xié)同效應(yīng),治療效果顯著,但有關(guān)其具體分子作用機(jī)制及獨(dú)活寄生湯的最佳應(yīng)用劑量尚需進(jìn)一步系統(tǒng)研究。

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