1例罕見的缺失型β珠蛋白生成障礙性貧血及其家系分析

歐陽(yáng)慧,胡新年,許偉華,藍(lán)仙娥,祝少鳳,劉冬霞,黃奕雅,龍 輝

廣東省清遠(yuǎn)市婦幼保健院：1.優(yōu)生與遺傳實(shí)驗(yàn)診斷中心；2.臨床檢驗(yàn)中心,廣東清遠(yuǎn) 511515

珠蛋白生成障礙性貧血(以下簡(jiǎn)稱地貧)是一種遺傳性惡性貧血疾病，目前臨床實(shí)驗(yàn)室主要檢測(cè)類型包括3種α缺失(--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα)、3種點(diǎn)突變(αCSα/αα，αQSα/αα，αWSα/αα)和17種常見β地貧[-28、-29、-30、-32、CD14-15、CD17、CD26(βE)、CD27-28、CD31、CD41-42、CD43、CD71-72、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、IVS-Ⅱ-654、CAP+1、initiation condon]，其中β地貧的發(fā)生機(jī)制主要是β珠蛋白鏈上的基因發(fā)生突變，使得β-珠蛋白合成障礙，進(jìn)而導(dǎo)致α珠蛋白和β珠蛋白的合成比例不平衡，而多余的α珠蛋白沉積在紅細(xì)胞細(xì)胞膜上會(huì)持續(xù)發(fā)生作用，影響紅細(xì)胞細(xì)胞膜的功能[1]。遺傳性持續(xù)性胎兒血紅蛋白增高癥(HPFH)是由β珠蛋白基因簇大片段缺失導(dǎo)致，它屬于一種遺傳異質(zhì)性的血紅蛋白病，在患兒紅細(xì)胞中存在大量的胎兒血紅蛋白(Hb)F，血液學(xué)中臨床檢測(cè)結(jié)果是正常的或輕度偏低，攜帶者常常無(wú)臨床癥狀或者只有輕微的臨床癥狀，但在Hb電泳檢測(cè)時(shí)HbF水平增高(一般大于10%)[2]。HPFH包括非缺失型和缺失型兩種，β地貧基因攜帶者和東南亞型遺傳性持續(xù)性胎兒血紅蛋白增高癥(SEA-HPFH)基因攜帶者婚配后就會(huì)有1/4的概率生育中間型或重型β地貧患兒，因此，HPFH患兒的產(chǎn)前診斷非常重要[3-4]。

目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于此類病例家系報(bào)道較少。由于在實(shí)驗(yàn)室中常規(guī)的地貧基因檢測(cè)試劑盒無(wú)法檢測(cè)出SEA-HPFH，使其容易出現(xiàn)漏檢。本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)1例41-42突變復(fù)合SEA-HPFH β缺失型的患兒，并對(duì)此進(jìn)行了家系調(diào)查及臨床表型分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患兒，男，12 d，由外院送至本院優(yōu)生與遺傳實(shí)驗(yàn)診斷中心新生兒篩查室進(jìn)行地貧篩查，篩查結(jié)果為HbA 2.1%、HbF 97.9%，提示為重型β地貧，兒童保健中心召回患兒進(jìn)一步進(jìn)行地貧基因檢測(cè)，其基因型疑為β地貧βCD41-42(-TTCT)純合子。對(duì)其父母進(jìn)行基因型分析：患兒的父親，男，26歲，地貧基因檢測(cè)結(jié)果是βCD41-42(-TTCT)雜合突變攜帶者；患兒的母親，女，24歲，地貧基因診斷未檢出異常，與篩查結(jié)果不符(小細(xì)胞低色素性，HbF為23.7，明顯增高)，對(duì)其進(jìn)一步做罕見地貧基因型的檢測(cè)，結(jié)果為SEA-HPFH(東南亞型)β缺失型地貧。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集 分別采集患兒、患兒母親及患兒父親的外周靜脈血各2 mL，以乙二胺四乙酸抗凝，共3份血液標(biāo)本，并讓患兒父母簽署知情同意書。

1.2.2血液學(xué)的表型分析 采用XN-1000血細(xì)胞自動(dòng)分析儀(日本希森美康公司)進(jìn)行紅細(xì)胞的參數(shù)分析。

1.2.3Hb成分分析 采用毛細(xì)管電泳儀(法國(guó)SEBIA公司)對(duì)Hb成分進(jìn)行定量或者定性分析。

1.2.4常見地貧基因分析 實(shí)驗(yàn)室使用深圳亞能生物技術(shù)有限公司地貧檢測(cè)試劑盒，采用跨躍斷裂點(diǎn)PCR(Gap-PCR)和DNA RAD-PCR進(jìn)行常規(guī)地貧基因型的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照本實(shí)驗(yàn)室地貧檢測(cè)操作作業(yè)指導(dǎo)文件進(jìn)行操作。

1.2.5罕見β地貧基因檢測(cè)診斷 標(biāo)本與深圳亞能生物技術(shù)有限公司的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，采用DNA測(cè)序、多重鏈接探針擴(kuò)增技術(shù)、缺口PCR及血紅蛋白持續(xù)增多癥缺失型電泳等技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1血液學(xué)表型分析 患兒幾項(xiàng)貧血相關(guān)的指標(biāo)水平均降低，表示為小細(xì)胞低色素性貧血，懷疑為重型的β地貧。患兒的父親幾項(xiàng)貧血相關(guān)的指標(biāo)均降低，表示為小細(xì)胞低色素性貧血，HbA2水平升高，疑為輕型β地貧?；純耗赣HMCV和MCH水平輕度偏低，疑為β地貧或HPFH。見表1。

表1 患兒及其父母的血液學(xué)表型和基因型

2.2常見地貧基因檢測(cè) 患兒母親的檢測(cè)結(jié)果提示未見異常，患兒父親檢出βCD41-42(-TTCT)雜合突變，患兒檢出β珠蛋白基因CD41-42(-TTCT)純合突變。

2.3缺失型β地貧基因檢測(cè) 患兒和其母親均檢出SEA-HPFH β缺失型，患兒父親的檢測(cè)結(jié)果提示未見異常。

3 討 論

β地貧是由β珠蛋白基因發(fā)生點(diǎn)突變、微小的缺失或者插入所引起。迄今為止，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)46種基因突變類型。β珠蛋白基因簇位于α珠蛋白基因簇區(qū)域的第11號(hào)的染色體短臂的15.5區(qū)域，而它的基因簇上含有 1 個(gè)胚胎期表達(dá)基因(ε)、2個(gè)胎兒期表達(dá)基因(Gγ和αγ)、2個(gè)成人期表達(dá)基因(β和δ)、1個(gè)假基因(Ψβ)[5-6]。在中國(guó)人群中，SEA-HPFH是一種常見的以高HbF為表型的β地貧基因缺失突變，首次發(fā)現(xiàn)于柬埔寨和越南，因此被稱作東南亞型(或越南型)HPFH。目前的地貧試劑盒普遍只能檢測(cè)β地貧最常見的17種點(diǎn)突變類型，并未包括SEA-HPFH，因而在常見地貧基因檢測(cè)中存在此類地貧被漏診或誤診的可能。同時(shí)SEA-HPFH雜合的患者與β地貧攜帶者結(jié)合有可能導(dǎo)致中間型或重型β地貧患兒出生，因此對(duì)罕見型地貧基因的檢測(cè)越來越受到重視[7-8]。

在本研究中，患兒母親的血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果顯示為輕度的小細(xì)胞低色素性貧血，懷疑為地貧基因攜帶者，而進(jìn)行的常見地貧基因檢測(cè)卻未發(fā)現(xiàn)β地貧點(diǎn)突變 ，但HbF水平明顯升高，若排除慢速異常HbQ/G帶，則懷疑為HPFH基因攜帶者。CHANGSRI等[9]報(bào)道，非缺失型HPFH的HbF水平多為5.0%～15.0%，而缺失型HPFH的HbF水平多為15.0%～30.0%。因此，初步判斷患兒母親為缺失型HPFH，從而進(jìn)一步送至深圳亞能生物技術(shù)有限公司進(jìn)行缺失型的地貧基因檢測(cè)，結(jié)果證實(shí)為SEA-HPFH基因攜帶者?；純焊赣H的血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果顯示為小細(xì)胞低色素性貧血，HbA2和HbF水平明顯升高，進(jìn)一步做常見地貧基因檢測(cè)，結(jié)果為βCD41-42(-TTCT)雜合突變,為輕型的β地貧?；純貉Ｒ?guī)檢測(cè)結(jié)果顯示為小細(xì)胞低色素性貧血，提示為重型β地貧，進(jìn)一步常見地貧基因檢測(cè)結(jié)果為β珠蛋白基因CD41-42(-TTCT)純合突變表型，根據(jù)家系調(diào)查，外送深圳亞能生物技術(shù)有限公司做罕見地貧，結(jié)果顯示為41-42突變合并SEA-HPFH β缺失型，地貧基因型為βCD41-42/β SEA-HPFH，提示為中間型或重型β地貧。由此分析，患兒同時(shí)遺傳了父親和母親的β突變基因。當(dāng)SEA-HPFH合并β地貧突變時(shí)會(huì)出現(xiàn)中間型或者重型β地貧，臨床可表現(xiàn)為中度或者重度貧血。

對(duì)于地貧血液學(xué)篩查表型為陽(yáng)性的患兒，當(dāng)Hb電泳結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，特別是HbF水平異常升高的，在進(jìn)行常見地貧基因檢測(cè)完成以后，需要對(duì)照其他相關(guān)結(jié)果看是否需要進(jìn)行罕見地貧基因檢測(cè)，必要時(shí)需進(jìn)行基因測(cè)序[10]。此外，地貧基因檢測(cè)結(jié)果顯示為純合突變或純合缺失的患兒，需進(jìn)行家系調(diào)查或進(jìn)一步檢測(cè)確定基因型，避免出現(xiàn)地貧基因檢測(cè)常規(guī)試劑盒無(wú)法檢測(cè)出來而誤診、漏診的情況。因此，為了提高出生人口質(zhì)量，應(yīng)重視優(yōu)生優(yōu)育，減少中間型、重型地貧患兒的出生，同時(shí)需要加強(qiáng)基層產(chǎn)前篩查醫(yī)師的遺傳基礎(chǔ)知識(shí)。