高血脂病人載脂蛋白E 基因多態(tài)性與心肌梗死相關(guān)性

胡耀，譚昀，桂紹濤，王洪，楊柳

作者單位：1江西省人民醫(yī)院、南昌大學(xué)附屬人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，江西 南昌330000；2南昌市進(jìn)賢縣人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，江西 南昌330000

心肌梗死是冠心病最嚴(yán)重的并發(fā)癥［1］，而冠心病和多種因素有關(guān)，其中血脂異常就是最常見的一種。載脂蛋白E（ApoE）基因是與血脂相關(guān)的基因之一［2］，其編碼的異構(gòu)體與受體的親和性以及代謝速率影響個(gè)體間血脂水平，在脂類代謝及維持膽固醇平衡等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，同時(shí)直接參與動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死［3-4］、高血壓、心力衰竭等心血管疾病的病理生理過程。載脂蛋白基因位于19 號(hào)染色體長臂上，由3 697 個(gè)核苷酸組成。ApoE 基因?qū)儆诔Ｈ旧w顯性基因，具有顯著的遺傳多態(tài)性，包含3個(gè)等位基因（E2、E3、E4），進(jìn)而產(chǎn)生6種基因型：3 種純合子（E2/E2、E3/E3、E4/E4），3 種雜合子（E2/E3、E2/E4、E3/E4）和3種異構(gòu)體ApoE2（E2/E2和E2/E3）［5］。目前，根據(jù)載脂蛋白基因型可指導(dǎo)病人選擇降脂藥物和飲食干預(yù)措施。ApoE 基因型與心肌梗死的關(guān)系已被國內(nèi)其他心臟中心報(bào)道［6］。但是結(jié)果不盡相同，而且江西省的心臟中心的數(shù)據(jù)未見報(bào)道?；诖?，我們推測ApoE某種基因型的高脂血癥和心肌梗死事件之間可能存在某種關(guān)聯(lián)。如果被證實(shí)，臨床上可以依據(jù)這種關(guān)聯(lián)指導(dǎo)臨床用藥。

1 資料與方法

1.1一般資料江西省人民醫(yī)院心血管內(nèi)科于2017年1—6月對685例高脂血癥病人進(jìn)行ApoE基因型檢測。收集年齡、性別、病史（冠心病、心肌梗死、腦梗死、糖尿病、高血壓、高脂血癥）、血液參數(shù)和載脂蛋白基因型，同時(shí)記錄在案，其中排除資料不全的病人。使用Excel 表格雙人記錄并核對，其中心肌梗死病人53例，非心肌梗死病人632例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）根據(jù)國際血脂檢測專家指南委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)，把血清中低密度脂蛋白＞130 mg/L 和（或）三酰甘油＞150 mg/L認(rèn)定為高脂血癥；（2）年齡范圍分布為30～75 歲；（3）初始未治療病人（既往未服用他汀類藥物的病人）。其中心肌肌鈣蛋白酶譜試驗(yàn)陽性為心肌梗死。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）家族性高脂血癥；（2）甲狀腺疾病；（3）酒精性肝?。唬?）脂肪肝等其他原因所致肝功能損害者；（5）肝臟CT提示肝硬化，肝癌者；（6）其他：如嚴(yán)重感染病人，惡性腫瘤病人，合并其他自身免疫性疾病者。

1.2實(shí)驗(yàn)方法本研究經(jīng)江西省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（No.［2012］-101）。采取病人血液后，隨后將相關(guān)樣本于-20 ℃貯存于江西省人民醫(yī)院江西省臨檢中心進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

1.2.1 血脂的測定 江西省檢驗(yàn)中心：日立7180自動(dòng)生化分析儀檢測血清脂蛋白，直接讀數(shù)后記錄。

1.2.2 ApoE 基因分型 經(jīng)江西省臨床檢驗(yàn)中心基因診斷實(shí)驗(yàn)室檢測。ApoE基因型檢測試劑盒（基因芯片法）：（1）采用離心吸附柱和緩沖系統(tǒng)提取全血DNA。結(jié)合DNA 可從血液中特異性提取基因組DNA。在-20 ℃下儲(chǔ)存；（2）PCR技術(shù)擴(kuò)增特定基因片段：采用熱啟動(dòng)PCR 擴(kuò)增ApoE 基因。PCR 系統(tǒng)包括：2 μL 基因組 DNA，160 μmol/L 的脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs），0.35 μmol/L 的引物，1.5 mmol/L的鎂離子（Mg2+），10%二甲基亞砜（DMSO），2.4 U的Taq DNA聚合酶，總反應(yīng)體積為20 μL。PCR反應(yīng)參數(shù)為循環(huán)參數(shù)：50 ℃ 2 min，95 ℃ 15 min，（94 ℃，30 s，65 ℃，45 s）45個(gè)循環(huán).

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用xˉ±s表示，兩組間比較采用成組t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)及百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1病人ApoE基因分型結(jié)果在所有病人中共檢測出三組ApoE 型：E2 表型組（E2/E2，E2/E3）、E3 表型組（E3/E3，E3/E4）、E4 表型組（E2/E4，E4/E4），結(jié)果示例見圖1。

圖1 高脂血癥病人ApoE基因型基因芯片檢測結(jié)果

2.2 ApoE基因型及純/雜合子頻率分布將所有病人中檢測出的三組ApoE型分類統(tǒng)計(jì)，E2/E2基因型6 例（8%），E2/E3 基因型68 例（92%）；E3/E3 基因型430 例（98%），E3E4 基因型10 例（2%）；E2/E4 基因型163 例（95%），E4/E4 基因型8 例（5%）。其中，ApoE E3表型組占大多數(shù)（440例）。

2.3心肌梗死組和非心肌梗死組間一般情況比較兩組一般臨床特性（年齡、性別、糖尿病、高血壓）因素具有可比性（P＞0.05），見表1。

表1 高脂血癥心肌梗死組和非心肌梗死組一般情況比較

2.4高脂血癥心肌梗死與非心肌梗死組ApoE基因頻率比較與非心肌梗死組對比，心肌梗死組E2、E3 表型差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），E4 表型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 高脂血癥心肌梗死與非心肌梗死組ApoE基因頻率比較/%

3 討論

ApoE基因在脂質(zhì)代謝中有非常重要的作用，有研究表明ApoE基因多態(tài)性與脂質(zhì)代謝異常有關(guān)［7］，國外等研究表明等位基因E4 有致動(dòng)脈粥樣硬化作用［8］，同時(shí)與腦梗死和心肌梗死密切相關(guān)［9］。相反，一些研究發(fā)現(xiàn)E4 等位基因的頻率與腦梗死和心肌梗死的發(fā)病率無關(guān)［10］。

本研究中，在所有入組病人中共檢測出三組ApoE 型：（E2/E2，E2/E3）、E3 表型組（E3/E3，E3/E4）、E4表型組（E2/E4，E4/E4）。其中，ApoE基因型中E3基因型占大多數(shù)（440例）。這和我國學(xué)者（如西部地區(qū)）研究［11-12］結(jié)果類似。相應(yīng)的，和江西地區(qū)接壤的湖南地區(qū)的報(bào)道［13］也顯示和這個(gè)結(jié)果一致。與之相反的，我國華南地區(qū)人群中ApoE以E2/E4+E3/E3 組合最為多見［14］。這其中的可能解釋是，江西地處華中與華東交界處，和華南地區(qū)人群有基因分型的差別，而與中部、西部地區(qū)的人群此類基因型更接近。

在心肌梗死與非心肌梗死組ApoE 基因頻率比較方面，我們發(fā)現(xiàn)，與非心肌梗死組對比，E4表型組（E3/E4，E4/E4）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ApoE E4 等位基因與心肌梗死密切相關(guān)。這一結(jié)果和國內(nèi)其他研究小組［15］類似，在 Xu 等［16］研究中，提示基因型E2/E3和E3/E3相比較，前者能降低心肌梗死易感性（OR＝0.79，95%CI：0.68～0.90）。攜帶E4 等位基因的純合子（即E4/E4）相對于未攜帶E4等位基因的純合子心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)增加（OR＝2.26，95%CI：1.03～4.98）［17］。但也有研究表明，ApoE 基因與冠狀動(dòng)脈疾病無關(guān)［18］。這可能和ApoE E4等位基因與心肌梗死密切相關(guān)，其中的原因可能有：首先，載脂蛋白充當(dāng)脂蛋白配體。它的3個(gè)等位基因?qū)κ荏w具有不同的結(jié)合活性。E2 等位基因能降低血清總膽固醇（TC）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），而E4等位基因則使TC和LDL-C濃度升高，加速動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程，而動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病乃至心肌梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［19］，從而使得攜帶E4等位基因的人患腦梗死的概率增加。第二，盡管3 種載脂蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)只有一個(gè)氨基酸殘基差異，但它們的空間構(gòu)象差異很大，ApoE E4基因是突變型基因，而其他兩種基因均為野生型基因，眾所周知，基因突變通常發(fā)生在DNA 復(fù)制時(shí)期；同時(shí)，基因突變與DNA 復(fù)制、DNA損傷修復(fù)、癌變和衰老有關(guān)。例如本課題組在以往研究中發(fā)現(xiàn)，高脂血癥基因突變型甚至和乙型肝炎病毒感染有關(guān)［20］。所以此類基因突變可能和冠心病有關(guān)。同時(shí)基因型不同的人群對不同降脂藥的有效性各有差異，例如，對于E2型病人，阿托伐他汀和瑞舒伐他汀降脂效果更佳［21-23］，辛伐他汀則對E4人群更敏感。

總之，本研究探討了江西省高脂血癥人群ApoE基因多態(tài)性及其與心肌梗死發(fā)病率的關(guān)系，證實(shí)了ApoE E4 等位基因與心肌梗死密切相關(guān)，在血脂異常的情況下，積極檢測和分型ApoE 基因，為預(yù)防和早期診斷人群心肌梗死提供了新的客觀依據(jù)。