胰島素休克的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇研究

王莉

[摘 要]該文探究了幾種魚的胰島素休克現(xiàn)象。將實(shí)驗(yàn)魚放入不同濃度的胰島素水溶液中，待出現(xiàn)驚厥時(shí)將魚轉(zhuǎn)至10%萄葡糖溶液中，觀察其恢復(fù)情況。結(jié)果顯示，在3IU/mL胰島素溶液中，出現(xiàn)休克的時(shí)間分別為斑馬魚（66.78±6.80）min、麥穗魚（39.33±8.35）min、中華鳑鲏（50.00±10.21）min;在4IU/mL胰島素溶液中，出現(xiàn)休克的時(shí)間分別為斑馬魚（30.67±6.47）min、麥穗魚（16.22±5.22）min、中華鳑鲏（15.86±9.70）min。每種實(shí)驗(yàn)魚在3IU/mL和4IU/mL兩種胰島素溶液中出現(xiàn)休克的時(shí)間之間均存在極顯著差異（P<0.01）。三種魚都可作為胰島素休克實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)材料。

[關(guān)鍵詞]中華鰟鮍;麥穗魚;斑馬魚;胰島素休克

[基金項(xiàng)目]2019年度國家級(jí)一流本科專業(yè)建設(shè)點(diǎn)“醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)”項(xiàng)目（教高廳函〔2019〕46號(hào)）;2015年度寧夏回族自治區(qū)重點(diǎn)建設(shè)專業(yè)“醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)”項(xiàng)目（寧教高辦〔2015〕109號(hào)）

[作者簡介]王 莉（1978—），女，陜西寶雞人，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)士，寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)學(xué)系實(shí)驗(yàn)師，主要從事臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)研究。

[中圖分類號(hào)] R-33[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1674-9324（2020）33-0145-02[收稿日期] 2020-03-19

胰島素休克，也稱“低血糖驚厥”，是指給小鼠注射胰島素或者將魚置入胰島素水溶液中，造成的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性低血糖，外部表現(xiàn)為驚厥或昏迷[1-3]。對(duì)鄉(xiāng)村中學(xué)而言，用小鼠做實(shí)驗(yàn)材料，采購不易且價(jià)格較貴。改用斑馬魚、麥穗魚和中華鳑鲏等，材料易得，價(jià)格便宜，簡便有趣。

一、材料和儀器

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

三種實(shí)驗(yàn)魚均購于銀川市勝利街花鳥魚寵市場，實(shí)驗(yàn)前均作24h的饑餓處理。

斑馬魚，體長（33.1±2.51）mm，體質(zhì)量（0.284±0.030）g。麥穗魚，體長（39.4±3.27）mm，體質(zhì)量（0.495±0.127）g。中華鳑鲏，體長（34.5±1.78）mm，體質(zhì)量（0.578±0.067）g。實(shí)驗(yàn)用水的pH值為7.0～7.5，水溫（20±2）℃。

（二）實(shí)驗(yàn)藥品

胰島素注射液（400IU/10mL），浙江萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品（批號(hào)21510208）。10%萄葡糖溶液，實(shí)驗(yàn)時(shí)現(xiàn)配。實(shí)驗(yàn)用水：自來水煮沸后冷卻至室溫。

（三）實(shí)驗(yàn)儀器用品

1mL注射器、50mL燒杯、500mL燒杯、50mL量筒、小魚網(wǎng)、電子天平、鑷子、電子表、紅外溫度計(jì)、pH試紙和標(biāo)簽紙等。

二、方法

（一）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

準(zhǔn)備3個(gè)50mL燒杯，分別加入40mL實(shí)驗(yàn)用水，然后各自放入5尾魚。實(shí)驗(yàn)組加入一定量胰島素注射液（400IU/10mL），混勻得到3IU/mL和4IU/mL單位胰島素溶液，對(duì)照組不加。觀察魚在不同單位胰島素溶液中的行為反應(yīng)。以喪失平衡能力及游泳能力作為判定標(biāo)準(zhǔn)，記錄每條魚出現(xiàn)休克現(xiàn)象所經(jīng)歷的時(shí)間。當(dāng)魚出現(xiàn)休克后，將其及時(shí)轉(zhuǎn)入10%葡萄糖溶液中急救，觀察行為變化，記錄蘇醒條數(shù)，計(jì)算死亡率。以上實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次。

（二）統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，用Excel軟件進(jìn)行處理。采用成組數(shù)據(jù)平均數(shù)比較的t檢驗(yàn)，P<0.05，為顯著性差異，P<0.01，為極顯著差異。對(duì)三種魚在不同單位胰島素溶液中出現(xiàn)休克的時(shí)間之間做方差分析，比較差異顯著性。

三、結(jié)果與分析

（一）不同單位胰島素溶液中斑馬魚出現(xiàn)休克的時(shí)間

由表1可知，斑馬魚在對(duì)照組清水中，不出現(xiàn)休克現(xiàn)象;在3IU/mL胰島素溶液中，65分鐘左右都會(huì)出現(xiàn)胰島素休克現(xiàn)象;在4IU/mL胰島素溶液中，30分鐘左右都會(huì)出現(xiàn)胰島素休克現(xiàn)象。將出現(xiàn)休克的魚及時(shí)轉(zhuǎn)入10%葡萄糖溶液進(jìn)行急救，大部分恢復(fù)正常，有20%左右的斑馬魚死亡。斑馬魚在3IU/mL、4IU/mL胰島素溶液中的休克時(shí)間之間存在極顯著性差異（P<0.01）。

（二）不同單位胰島素溶液中麥穗魚出現(xiàn)休克的時(shí)間

由表2可知，麥穗魚在對(duì)照組清水中，不出現(xiàn)休克現(xiàn)象;在3IU/mL胰島素溶液中，40分鐘左右都會(huì)出現(xiàn)胰島素休克現(xiàn)象;在4IU/mL胰島素溶液中，15分鐘左右都會(huì)出現(xiàn)胰島素休克現(xiàn)象。將出現(xiàn)休克的魚及時(shí)轉(zhuǎn)入10%葡萄糖溶液進(jìn)行急救，但急救無效，死亡率均為100%。麥穗魚在3IU/mL、4IU/mL胰島素溶液中的休克時(shí)間之間存在極顯著性差異（P<0.01）。

（三）不同單位胰島素溶液中中華鳑鲏出現(xiàn)休克的時(shí)間

由表3可知，中華鳑鲏在對(duì)照組清水中，不出現(xiàn)休克現(xiàn)象;在3IU/mL胰島素溶液中，50分鐘左右都會(huì)出現(xiàn)胰島素休克現(xiàn)象;在4IU/mL胰島素溶液中，15分鐘以上都會(huì)出現(xiàn)胰島素休克現(xiàn)象。將出現(xiàn)休克的魚及時(shí)轉(zhuǎn)入10%葡萄糖溶液進(jìn)行急救，但急救無效，死亡率均為100%。中華鳑鲏在3IU/mL、4IU/mL胰島素溶液中的休克時(shí)間之間存在極顯著性差異（P<0.01）。

（四）三種魚在3IU/mL胰島素溶液中出現(xiàn)胰島素休克時(shí)間的比較

小寫字母不同（a，b）表示兩者之間有顯著差異（P<0.05）;大寫字母不同（A，B）表示兩者之間有極顯著差異（P<0.01）。

由表4可知，在3IU/mL胰島素溶液中出現(xiàn)休克時(shí)間的差異，斑馬魚與中華鳑鲏、麥穗魚相比均達(dá)極顯著水平（P<0.01），而麥穗魚與中華鳑鲏相比不明顯。

（五）三種魚在4IU/mL胰島素溶液中出現(xiàn)胰島素休克時(shí)間的比較

小寫字母不同（a，b）表示兩者之間有顯著差異（P<0.05）;大寫字母不同（A，B）表示兩者之間有極顯著差異（P<0.01）。

由表5可知，在4IU/mL胰島素溶液中出現(xiàn)休克時(shí)間的差異，斑馬魚與中華鳑鲏、麥穗魚相比均達(dá)極顯著水平（P<0.01），而麥穗魚和中華鳑鲏相比不明顯。

四、結(jié)論

在胰島素休克實(shí)驗(yàn)中，對(duì)斑馬魚、麥穗魚和中華鳑鲏在3IU/mL、4IU/mL胰島素溶液中經(jīng)歷一定時(shí)間均出現(xiàn)休克現(xiàn)象。在3IU/mL溶液中，麥穗魚休克耗時(shí)接近一節(jié)課，斑馬魚和中華鳑鲏均超過一節(jié)課;在4IU/mL溶液中，麥穗魚和中華鳑鲏休克耗時(shí)在15min左右，斑馬魚在30min左右。從所需費(fèi)用來看，麥穗魚和中華鳑鲏大約是小鼠的10%，斑馬魚大約是小鼠的45%。因此，在胰島素休克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇的經(jīng)濟(jì)性和現(xiàn)實(shí)性上，斑馬魚、麥穗魚和中華鳑鲏所需遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于小鼠。

參考文獻(xiàn)

[1]韋建恒.胰島素低血糖休克[J].生物學(xué)通報(bào)，1992，27（3）：49.

[2]沈旭明.胰島素驚厥實(shí)驗(yàn)材料的選用與實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析[J].生物學(xué)雜志，2000，17（2）：32+8.

[3]蘇永春，勾影波.用金魚或鯽魚做胰島素休克實(shí)驗(yàn)[J].生物學(xué)通報(bào)，1995，30（4）：32.

Study on the Selection of Experimental Animals for Insulin Shock

WANG Li

（School of Clinical Medicine， Ningxia Medical University， Yinchuan， Ningxia 750004， China）

Abstract： The objective of this experiment is to explore the phenomenon of insulin shock in several kinds of fish. The experimental fish were put into different concentrations of aqueous insulin solution. When convulsions occurred， the fish were transferred to 10% glucose solution and their recovery was observed. According to the results， in 3 IU/mL insulin solution， the time of insulin shock for zebrafish， pseudorasbora parva and rhodeus sinensis gunther was respectively （66.78±6.80）min， （39.33±8.35）min， and （50.00±10.21）min; in 4 IU/mL insulin solution， the time of insulin shock for the three kinds of fish was respectively （30.67±6.47） min， （16.22±5.22） min， and （15.86±9.70）min. For each of the three kind of experimental fish， there was a very significant difference （P<0.01） in the time of insulin shock when it was put in 3 IU/mL and 4 IU/ mL insulin solution. The three kinds of fish could all be used as experimental animals for insulin shock experiments.

Key words： rhodeus sinensis gunther; pseudorasbora parva; zebrafish; insulin shock