紫菀地下器官主要藥用成分動態(tài)積累研究

陳維珍，郭偉娜，王 蓉

(1．黃山職業(yè)技術學院，安徽 黃山 245000；2.亳州職業(yè)技術學院 藥學院，安徽 亳州 230038；3.安徽中醫(yī)藥科學院 亳州中醫(yī)藥研究所，安徽 亳州 236800)

紫菀又被稱為青菀，還魂草，以及小辮等，是菊科植物紫菀Aster tataricus L.f.的根和根莖[1]。喜陰濕環(huán)境生長，在我國河北、內蒙、東北等地區(qū)的山頂、低山草地或沼澤地有大量分布。安徽亳州也是大面積種植區(qū)之一。紫菀的藥用價值有潤肺下氣、消痰止咳、抗氧化、止痛、以及調節(jié)免疫力。實驗證實：紫菀止咳化痰的功效與紫菀酮這種成分有關，抗氧化、止痛、以及調節(jié)免疫力等方面的功效則與其中山柰酚、槲皮素等黃酮類成分有關[2-6]。目前對紫菀的研究主要針對其化學成分、藥理作用，少有文獻資料報道它的采收期與主要藥用成分的動態(tài)積累之間的關系。為此，本研究在系統(tǒng)觀察紫菀生長發(fā)育基礎上，采用HPLC法對地下部位根、根莖和母根6個不同采收期的紫菀酮、槲皮素和山奈酚含量進行分析, 以期為紫菀適宜采收期的確定、資源綜合合理利用以及規(guī)范化種植提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相(Agilent1260，SPD-10Avp型號的檢測器，Class-VP工作站)；超聲波清洗機(KQ5200E，昆山市超聲儀器有限公司)；電子天平(HZ-104/35S，華志電子科技)；高速多功能粉碎機(RHP-400A ，鄭州長城科工貿有限公司)。

1.2 試藥 紫菀繁殖材料購于亳州中藥材交易市場，經安徽中醫(yī)藥大學方成武教授鑒定為菊科植物紫菀Aster tataricus L.f.的根莖，栽培于亳州中醫(yī)藥研究所藥用植物園內分別收集不同月份的根、根莖、母根做實驗用，。紫菀酮、槲皮素、山萘酚對照品(上海喬羽生物科技有限公司，質量分數(shù)≥98%)

2 實驗方法與結果

2.1 對照品溶液的配制

①紫菀酮：按照15版藥典[1]，取紫菀酮對照品精密稱定，用乙腈制成每l mL含0.l mg的溶液，即得；②槲皮素和山奈酚：根據(jù)文獻[7]，取槲皮、山萘酚素對照品適量，用甲醇將其制成濃度依次為0.002 mg/mL，0.003 mg/mL的混合溶液，作為對照品儲備液。

2.2 供試品溶液的配制

將紫菀的根、根莖、母根干燥后粉碎，過3號篩①紫菀酮：根據(jù)15版藥典方法[1]，取供試品粉末約1g，精密稱定后加入具塞錐形瓶中，精密加入20 mL甲醇，稱重后于40°C溫度下浸泡1小時，再超聲處理15 min(功率250 W，頻率40 kHz)，取出后放冷，再稱重，用甲醇補足損失的重量，搖勻后濾過。所得濾液即為紫菀酮供試品溶液。②槲皮素和山萘酚：依次精密稱量1 g粉末，向其中添加20 mL80%的甲醇，搖勻之后，再稱量，后進行20 min時間的超聲提取，取出后放置冷卻，再用80%的甲醇將質量補足，充分搖勻，可得槲皮素和山奈酚供試品溶液

2.3 色譜條件

參照文獻[7]色譜柱ZORBAX SB-C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流速：1.0mL·min-1；柱溫30℃，進樣量10μL；①紫菀酮：檢測波長200 nm，流動相100%乙腈。②槲皮素和山萘酚：檢測波長360 nm，流動相乙腈( A) 和0.1%磷酸水( B) 梯度洗脫，0～10 min， 25% ～40% A; 10～15 min，40%～45% A; 15～20 min，45%～100% A; 20～30 min，100%A。對照品、樣品對應的色譜圖情況，如圖1所示。

a紫菀酮對照品

b樣品

圖2a：槲皮素和山萘酚對照品，其中Ⅰ為槲皮素Ⅱ為山萘酚；

圖2b：樣品

2.4 線性關系

①分別從紫菀酮對照品溶液中吸取1、5、10、15、20、25μL，根據(jù)2.3項內對應的方法來測定，實施 3次平行測定，把濃度作為橫坐標(X),把峰面積作為縱坐標(Y),繪制標準曲線。②取槲皮素和山奈酚對照品儲備液，用甲醇依次稀釋，得到6個濃度數(shù)值不同的混合對照品溶液，利用2.3項內對應的方法來檢測，共3次平行測定。濃度作為橫坐標(X),峰面積作為縱坐標(Y)，繪制標準曲線。上述兩組實驗所得回歸方程和線性范圍見表1。結果顯示線性關系均較好。

表1 回歸方程及線性范圍

2.5 精密度試驗

①在相同濃度的紫菀酮對照品溶液中，連續(xù)精密吸取6次樣品，重復進樣6次，記錄峰面積大小，計算RSD =0.17%。②在同一槲皮素和山奈酚混合對照品溶液中，精密吸取樣品，利用2.3項內對應的方法連續(xù)6次進樣，計算峰面積，根據(jù)不同的峰號求出相應的峰面積RSD,最終結果依次為槲皮素RSD =0.08%，山萘酚RSD =0.07%，由此可知，儀器的精密度非常好。

2.6 重現(xiàn)性試驗

取同一紫菀樣品，分成2組，每組6份，根據(jù)2.2項內容對應的方法，制成供試品溶液，根據(jù)2.3項內容對應的色譜條件吸取樣品，6份照紫菀酮色譜條件進樣，6份照槲皮素和山奈酚測定色譜條件進樣，并統(tǒng)計出峰面積大小，計算得出紫菀酮、槲皮素和山奈酚在其中的成分含量。最終得出紫菀酮、槲皮素和山奈酚的RSD 依次為0.04%， 0.18%和0.11%，由此可知，具有非常好的重現(xiàn)性。

2.7 加樣回收率試驗

①精密稱取紫菀根上部的粉末6份，分別加入紫菀酮對照品溶液2.5mL，按照2.2項下的方法配制成供試品溶液，按2.3項下色譜條件進樣，記錄峰面積，計算平均回收率紫菀酮為101.8%，RSD=0.67%，結果表明該方法準確度良好。②精密稱取紫菀根上部的粉末6份，分別加入定量的槲皮素和山萘酚對照品，按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.2.3項下色譜條件進樣檢測，記錄色譜峰面積，計算各峰面積的RSD，所測成分的加樣回收率和RSD分別為槲皮素98.10%，RSD=0.44%；山萘酚回收率99.32%，RSD= 0.96%。

2.8 樣品含量測定

取不同部位、不同采收期的紫菀樣品共18批。每批約2.0 g.精密稱定，按2.2項下的方法制備供試品溶液，以2.3項下色譜條件進行分別進樣檢測，用外標法計算紫菀酮、槲皮素和山奈酚的實際含量，具體結果如表2所示。

表2 紫菀不同采收期不同部位主要藥用成分含量(n=3)

3 討論與結論

紫菀酮屬于三萜類結構，與黃酮類的槲皮素、山奈酚相比，它的極性與吸收波長有很大的不同，故在測定其含量時，選擇不同的色譜條件且兩者差異較大。通過研究發(fā)現(xiàn)，上述兩種測定方法均簡便易操作，結果迅速、準確，對評定紫菀的品質有一定的借鑒意義。

樣品測定結果見表2，紫菀酮作為紫菀的特征性成分，不同部位含量：根最高，母根次之，根莖最低，其中根和根莖二者含量均在12月達到最高，母根1月份最高；槲皮素和山奈酚作為紫菀的活性成分，二者在根和母根中的含量均在次年2月達到最高；根莖中12月含量最高。三種成分不同部位動態(tài)積累見圖3～圖5。

圖3 不同部位紫菀酮動態(tài)積累Fig 3 The dynamic accumulation of shionone in different parts

圖4 不同部位槲皮素動態(tài)積累Fig4 The dynamic accumulation of quercetin in different parts

圖5 不同部位山奈酚動態(tài)積累Fig5 The dynamic accumulation of kaempferol in different parts

紫菀為多年生草本植物[7]，但由于栽培后第二年開花，根莖會從中央向外圍枯朽，導致其上的須根逐漸腐爛，因而紫菀的栽培周期為1年。

歷代藥典規(guī)定紫菀采收期為春秋二季[1]，本研究顯示：根和根莖三種主要藥用成分動態(tài)積累規(guī)律基本一致，根和根莖紫菀酮均在12月份達到最高，母根紫菀酮的動態(tài)積累規(guī)律則與前者不同，在1月份達到最高；兩種黃酮類成分的動態(tài)積累規(guī)律與紫菀酮不同，二者均在次年2月達到最高，其中根中的含量波動最大，母根次之，根莖中含量較低，波動不明顯。綜合本實驗結果，由于目前紫菀的評價指標以紫菀酮為主，因而適宜采收期定為12月。

文獻顯示，紫菀含量測定主要針對在三萜類的紫菀酮、黃酮類的槲皮素和山奈酚等[8-10]，歷代藥典以根和根莖入藥，并以紫菀酮的含量作為藥材品質的化學鑒定依據(jù)[1]。本研究HPLC結果顯示，紫菀地下不同部位紫菀酮含量根>母根>根莖，且母根含量與藥典 “不得少于0.15%”的標準相接近，黃酮類成分槲皮素和山萘酚均高于根莖中含量，綜合紫菀酮、槲皮素和山奈酚三種成分的含量對比情況，母根在一定程度上也可入藥，以實現(xiàn)中藥資源的合理利用。