四種豬圓環(huán)病毒滅活疫苗免疫效果的評價

張德寶，宋龍飛，劉 佳，幺立祥，孫華峰

（1.河北韓美生物科技有限公司 071000；2.河北正合生物制藥有限公司 050000；3.河北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳農(nóng)業(yè)品牌建設中心 050000）

豬圓環(huán)病毒病（Porcine circovirus disease， PCVD）是由圓環(huán)病毒II 型引起的一種免疫抑制性疾病， 統(tǒng)稱豬圓環(huán)病毒相關性疾病，主要包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥、豬皮炎與腎病綜合癥、繁殖障礙等一系列疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。主要感染3～8 周齡豬，臨床表現(xiàn)生長發(fā)育不良、皮膚蒼白、體質(zhì)下降、漸進性消瘦、腹瀉及呼吸困難，發(fā)病率20.5%～60%，死亡率通常達10%，有的豬場高達50%［1，2］。 1991 年首先在加拿大的豬群發(fā)現(xiàn)PCV2 感染［3］，該病迅速在全世界各地開始蔓延。 自2000年以來，PCV2 感染在歐洲每年造成的經(jīng)濟損失達6 億歐元，在美國每年約造成5 億美元的經(jīng)濟損失［4，5］。 我國豬圓環(huán)病毒感染最早報道于2000 年［4］，ELISA 方法流行病學調(diào)查， 檢測出我國PCV 血清陽性率高達40%～50%， 表明我國豬群PCV2 感染率較高， 且其常常伴隨PRRSV、PRV、PPV、CSFV 以及多種細菌等其他病原混合感染。

隨著國內(nèi)外推廣和商品化PCV2 疫苗的應用， 疫苗接種已成為防控PCVD 的重要手段。 不同廠家的疫苗由于生產(chǎn)過程和佐劑類型的不同，免疫效果亦不相同。 本研究比較了4 種市售銷量較好的PCV2 疫苗進行試驗，對比不同組豬群生產(chǎn)性能方面的差異，比較試驗豬群不同時期內(nèi)PCV2 基因拷貝數(shù)和病毒血癥感染比例、血清抗體水平方面的差異，為養(yǎng)豬生產(chǎn)中正確選擇豬圓環(huán)病毒疫苗提供參考。

2.1.1 黨參總皂苷溶解性試驗。室溫下，黨參總皂苷在表面活性劑中溶解性排序依次為Cremophor EL40、Tween-80、Span-80；在助表面活性劑中溶解性排序依次為PEG400、1,2-丙二醇；在油相中溶解性排序依次為橄欖油、辛酸癸酸甘油三酯，故選擇Cremophor EL40、PEG400、橄欖油用于確定黨參總皂苷納米乳組成。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 14～21 日齡健康杜長大三元雜交仔豬100頭，由河北保定某豬場提供。

南海問題是一個涉及多方的議題，因此各方做出決策的認知意象不盡相同，分屬不同的立場和視域，這本屬正?，F(xiàn)象。但越菲等聲索國完全無視中國多年來在南海爭端上的自我克制，肆意在國際上將中國描述為奉行擴張主義、欺壓弱小鄰居的惡鄰；美日雖非當事國，但出于在亞太地區(qū)制衡中國的考慮，也將中國正常的南海維權行為和主權范圍島礁建設行為視為中國意欲控制南海航道，增強自身地緣政治優(yōu)勢，進而形成勢力范圍的重要一步。不同國家之間圍繞某一議題在認知上形成巨大鴻溝并不奇怪，這通常是因為，在國際政治互動中，當他國的行為與己方的預期不相符時，該國通常無視他國的外部環(huán)境約束而強調(diào)他國天性本惡。[32]

2.1 臨床評價 仔豬注射4 種疫苗后的平均日增重與未免疫對照組相比，0～10 周齡內(nèi)不存在差異 （P＞0.05），10～20 周齡內(nèi)差異顯著（P＜0.05），即仔豬注射疫苗后平均日增重明顯高于對照組，且疫苗A 和疫苗D 組試驗豬平均日增重顯著高于對照組，差異顯著（P＜0.05，詳見表1）。

?DiMaggio，P．J．，Powell，W．W．，The new institutionalism in organizational analysis，Chicago:University of Chicago Press，1991．

1.6 血清學檢測 應用商品化試劑盒對1.5 血清樣品進行抗體檢測。

1.3 試驗設計 將試驗動物隨機分成5 組 （含空白對照組）進行雙盲試驗，每組20 頭仔豬。 A 組、B 組、C 組、D 組分別使用對應疫苗按照產(chǎn)品說明書進行免疫，E 組為不注射疫苗組。 所有試驗豬按照常規(guī)飼養(yǎng)進行管理， 仔豬于24 日齡時斷奶，65 日齡時轉入育肥舍。

南昌綠地國際會展中心鋼桁架內(nèi)供回水管線方案優(yōu)化與實施……………………………………………………… 李國靈（11-86）

1.4 生產(chǎn)性能 稱取并記錄各組試驗豬出生體重、 斷奶體重、轉欄體重、出欄體重，統(tǒng)計并分析各試驗組不同時期平均日增重（死亡豬只的數(shù)據(jù)排除在生產(chǎn)性能評價之外）。

1.7 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 19.0 及GraphPad Prism 軟件進行統(tǒng)計分析處理。

1.5 感染情況 應用EasyPure Viral DNA/RNA Kit（TRANSGEN）對試驗豬血清（疫苗注射后（days post vaccination，dpv）0d、21d、49d、70d、112d 血清樣品） 進行DNA 提取， 采用Real-Time PCR 對豬圓環(huán)病毒PCV2b 基因拷貝數(shù)進行定量分析， 以確定試驗豬群PCV 病毒血癥感染情況。

2 結果

1.2 主要試劑 豬圓環(huán)病毒2 型ELISA 抗體檢測試劑盒，購自瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；豬圓環(huán)病毒滅活疫苗，分別購自勃林格、南農(nóng)高科、青島易邦和瑞普生物。

2.2 感染情況 如圖1 所示，所有仔豬在疫苗注射前均沒有檢測到PCV2 基因，在疫苗注射后21d 檢出率達到高峰，且注射疫苗組仔豬PCV2 基因拷貝數(shù)和抗原檢出陽性率均顯著低于未注射疫苗組， 說明4 種疫苗可有效降低血清中PCV 基因拷貝數(shù)和病毒血癥陽性比例。

圖1 days post vaccination

2.3 血清學測定 如圖2 所示，ELISA 抗體趨勢大體符合疫苗接種后，機體抗體消長的一般規(guī)律。 其中免疫組抗體水平和對照組相比， 在疫苗注射前及注射后21d 沒有差異，21d 后免疫組仔豬抗體呈大致上升趨勢，與對照組差異顯著。且疫苗A、疫苗D抗體水平略高，但與疫苗B、疫苗C 沒有顯著性差異。

圖2 days post vaccination

3 討論

多年的實踐經(jīng)驗證明， 免疫預防是圓環(huán)病毒相關疾病防控的有效措施，國外最早于2007 年出現(xiàn)了商品化的疫苗，且臨床效果顯示，商品化的PCV 疫苗可以有效的控制圓環(huán)病毒相關疾病的大規(guī)模發(fā)生。 本研究選取了市售銷量比較好的4 種不同廠家生產(chǎn)的豬圓環(huán)病毒滅活疫苗進行免疫效果的臨床對比實驗，生產(chǎn)性能統(tǒng)計結果顯示免疫豬圓環(huán)病毒疫苗后， 豬群平均日增重得到明顯改善，降低了料肉比，提高了生產(chǎn)效益。

如何評價豬圓環(huán)病毒疫苗的免疫效果是近年來研究的熱點，本研究綜合生產(chǎn)性能指標、抗原檢出比例、抗體產(chǎn)生規(guī)律，應用Real-Time PCR 和商品化試劑盒、中和試驗等對豬圓環(huán)病毒抗原、抗體進行測定，結果顯示疫苗免疫可有效降低血清中PCV基因拷貝數(shù)和病毒血癥陽性比例，提高血清抗體水平，與未免疫對照組相比均存在顯著性差異，免疫效果提升明顯。 其中疫苗A和疫苗D 表現(xiàn)略具優(yōu)勢， 初步表明在市售的不同廠家的疫苗存在質(zhì)量差異， 本研究為免疫程序的合理制定及篩選優(yōu)質(zhì)疫苗提供了一定的數(shù)據(jù)支持。