氟尿嘧啶血藥濃度監(jiān)測(cè)差異化分析

陳釗宇 李代程 譚竹川 李朋征

（達(dá)州市大竹縣人民醫(yī)院 四川 達(dá)州 635100）

5-FU 是常用的抗癌藥物，可顯著降低患者的病死率。大量臨床研究結(jié)果顯示，不同患者間5-FU 的療效和毒性存在較大的個(gè)體差異。不同患者進(jìn)行氟尿嘧啶血藥濃度監(jiān)測(cè)可產(chǎn)生100 倍左右的血藥濃度差距。若患者5-FU 血藥濃度值超出范圍，其發(fā)生Ⅲ～Ⅳ度骨髓抑制、Ⅲ～Ⅳ度腹瀉、腸道黏膜炎等不良反應(yīng)的發(fā)生率明顯升高。這些都揭示出5-FU 的血藥濃度與療效、毒性密切相關(guān)。

1.一般資料

我院60例經(jīng)病理確診的大腸癌患者，采取FOLFOX方案化療，且每位患者的化療周期均≥4 周期。血樣采取定于每周期化療第2 天早上6 點(diǎn)統(tǒng)一采血，然后由科室護(hù)士專人負(fù)責(zé)送到藥學(xué)部，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)5-FU 血藥濃度進(jìn)行檢測(cè)，取各周期的血藥濃度均值，根據(jù)5-FU 血藥濃度預(yù)測(cè)可信區(qū)間分為A組（≤20mg/L）、B 組（20 ～40mg/L）和C 組（＞40mg/L），比較三組患者的化療療效以及不良反應(yīng)發(fā)生情況。

2.方法

2.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（Waters e2695）

2.2 色譜條件

色譜柱：Waters-C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶液（5：95），等度洗脫8min，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm，柱溫25 攝氏度，流速為1 mL/min，進(jìn)樣量體積為10μL。

2.3 對(duì)照品溶液制備

精密稱取5-氟尿嘧啶（5FU）及5-溴尿嘧啶（5Br）對(duì)照品適量，以50%甲醇水定容于10mL 容量瓶中，得1mg/mL 5-氟尿嘧啶和5-溴尿嘧啶儲(chǔ)備液。從儲(chǔ)備液中取適量5-氟尿嘧啶和5-溴尿嘧啶，用50%甲醇水定容于10mL 容量瓶中，得20μg/mL 的5-氟尿嘧啶和5-溴尿嘧啶的對(duì)照品溶液，置4℃冰箱保存。取5-氟尿嘧啶對(duì)照品溶液適量，分別配置成1、2、4、8、12、16、20μg/mL 的5-氟尿嘧啶工作液，同時(shí)在工作液中加入100 μL 5-溴尿嘧啶的對(duì)照品溶液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

用5-氟尿嘧啶樣品峰面積與5-溴尿嘧啶內(nèi)標(biāo)峰面積比（R）對(duì)樣品濃度（c）作線性回歸，計(jì)算回歸方程。

2.5 血漿樣品處理

取1mL血樣于4℃，3500轉(zhuǎn)，離心10分鐘，取100μL上清液，加入100μL 5-溴尿嘧啶的對(duì)照品溶液，再加入3 mL 甲醇，渦旋1 分鐘，置于離心機(jī)以4℃，10000 轉(zhuǎn)，離心10 分鐘，取上清液，50℃氮?dú)獯蹈桑?mL 甲醇復(fù)溶，重復(fù)吹干三次后，用1mL 50%甲醇溶解，過(guò)0.22μm 微孔濾膜，即得血漿樣品，置4℃冰箱保存。

2.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

對(duì)照品色譜圖

2.7 對(duì)照品測(cè)定數(shù)據(jù)

樣品濃度μg/mL 5FU 峰面積 5FU 平均峰面積 5Br 峰面積 5Br 平均峰面積 R（5FU/5Br）2 69648 69792.5 41175 41611 1.68 69937 42047 4 132697 132236 41559 41657.5 3.17 131775 41756 8 255037 255261 41656 41579 6.14 255485 41502 12 369042 369025.5 40432 40372 9.14 369009 40312 16 485545 486942 41589 41769 11.66 488339 41949 20 544516 547249 36125 36197 15.12 549982 36269

2.8 對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.結(jié)果

3.1 5-FU 與療效相關(guān)性分析

見表1。

表1 三組化療療效比較（x±s，%）

3.2 三組化療后不良反應(yīng)比較

C 組的骨髓抑制、黏膜炎等不良反應(yīng)總發(fā)生率73.33%（11/15） 高于A、B 組的17.65%（3/17）、25.00%（7/28），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；但B、C 組在手足綜合征發(fā)生率及胃腸反應(yīng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

4.影響氟尿嘧啶血藥濃度監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

納入60 例結(jié)直腸癌患者。5-FU 高濃度組（AUC ＞40ug/ml）的客觀緩解率、疾病控制率低于低、中濃度組（AUC ≤20ug/ml 和20 ～40ug/ml），且高濃度組患者疾病進(jìn)展率是顯著高于低濃度和中濃度組的患者，中濃度組患者客觀緩解率、疾病控制率高于低濃度組，且疾病進(jìn)展率低于低濃度組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），表明中濃度組患者AUC 在20 ～40 ug/ml 范圍其能得到較好的控制，降低患者疾病進(jìn)展的幾率；同時(shí)隨著AUC 增加，其骨髓抑制的發(fā)生率升高，高、中濃度組患者骨髓抑制反應(yīng)發(fā)生率高。按骨髓抑制程度分級(jí)，Ⅰ～Ⅱ級(jí)和Ⅲ～Ⅳ級(jí)骨髓抑制反應(yīng)程度在各組之間差異無(wú)顯著性（P＞0.05），但骨髓抑制的發(fā)生率是隨著AUC 的增加而呈增高趨勢(shì)的；5-FU高濃度組（AUC ＞40ug/ml）的患者Ⅲ級(jí)以上惡心嘔吐反應(yīng)的發(fā)生率是顯著高于低、中濃度組（AUC ≤20ug/ml 和20 ～40ug/ml），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）；腹瀉、脫發(fā)以及手足綜合征等不良反應(yīng)隨著AUC 的增加，其發(fā)生率呈增高趨勢(shì)，但病例數(shù)少，未能做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。表明5-FU 穩(wěn)態(tài)血藥濃度與毒性反應(yīng)（骨髓抑制、惡心嘔吐反應(yīng)）是呈正相關(guān)的。由以上結(jié)果可知，中濃度組患者治療療效效果高于低濃度組和高濃度組，而中濃度組患者毒性反應(yīng)發(fā)生率和Ⅲ級(jí)以上毒性反應(yīng)發(fā)生率低于高濃度患者。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，約82%的患者AUC 高于目標(biāo)值，僅約15%的患者能達(dá)到目標(biāo)范圍，部分患者高于警戒值，并且個(gè)體間存在較大的藥代動(dòng)力學(xué)差異。

結(jié)合臨床研究推測(cè)我院5-FU 檢測(cè)值偏高可能有以下原因：（1）患者自身情況；（2）是否正確給藥：患者使用靜脈泵化療時(shí)，泵入時(shí)間長(zhǎng)達(dá)48 小時(shí)，部分患者私自調(diào)整輸液泵速度加快5-FU的輸入速度從而使血液中藥物濃度升高；（3）化療中存在合并用藥：結(jié)直腸癌患者在治療時(shí)，合并使用多種輔助藥物，其中可能存在藥物的抑制和相互作用，如腫瘤科常用藥西咪替丁、多潘立酮、氟喹諾酮類等；（4）基因的多態(tài)性；（5）樣本處理與保存。

5.結(jié)論

結(jié)直腸癌是常見惡性腫瘤之一，NCCN 指南和中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范推薦5-FU 作為晚期結(jié)直腸癌患者的基礎(chǔ)治療。5-FU 本身無(wú)抗癌活性，由其活性代謝產(chǎn)物發(fā)揮抗癌作用。5-FU半衰期短，其體內(nèi)過(guò)程符合非線性藥代動(dòng)力學(xué)消除模式，以持續(xù)靜脈滴注方式給藥，監(jiān)測(cè)其穩(wěn)態(tài)血藥濃度，計(jì)算出AUC。

6.展望

目前國(guó)內(nèi)對(duì)DPYD、MTHFR 和UMPS 基因多態(tài)性與5-FU 血藥濃度及臨床毒性反應(yīng)之間關(guān)系研究較少，且多集中探討某一代謝酶基因多態(tài)性與5-FU 毒性反應(yīng)之間的相關(guān)性，局限性較大，同時(shí)且不同研究間的結(jié)論往往相悖。藥物體內(nèi)過(guò)程是多個(gè)基因的多重影響下的結(jié)果。因此多基因的多態(tài)性及5-FU 血藥濃度對(duì)療效與毒性反應(yīng)之間的研究是未來(lái)5-FU 研究的發(fā)展趨勢(shì)。