全自動(dòng)血型分析儀與微板法應(yīng)用于獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體篩查的比較分析

李毅華 嚴(yán)鳳好

人類在接受輸血等免疫刺激后,會(huì)針對(duì)外源紅細(xì)胞抗原產(chǎn)生相應(yīng)的血型抗體,而紅細(xì)胞抗體在結(jié)合相應(yīng)抗體造成溶血反應(yīng),影響輸血治療效果,甚至可影響輸血安全；同時(shí)還會(huì)影響血型定型以及交叉配血等實(shí)驗(yàn)室檢查工作［1］。目前,無(wú)償獻(xiàn)血是醫(yī)療用血的重要來(lái)源,因此為了有效保障臨床用血安全,對(duì)獻(xiàn)血者實(shí)施不規(guī)則抗體篩查,明確獻(xiàn)血者血液中是否存在相應(yīng)抗體尤為重要［2］。全自動(dòng)血型分析儀與微板法是目前較為常用的不規(guī)則抗體篩查方法,為選擇更為準(zhǔn)確的篩查方案,本研究主要對(duì)全自動(dòng)血型分析儀與微板法篩查獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的效果進(jìn)行比較分析,并總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年3月～2018年3月于惠州市中心血站進(jìn)行無(wú)償獻(xiàn)血的5375例志愿者血液樣本,入選獻(xiàn)血者中男2768例,女2607例；年齡21～48歲,平均年齡(34.5±4.6)歲。入選獻(xiàn)血者均符合健康檢查要求［3］,獻(xiàn)血者知情同意,符合獻(xiàn)血標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 全自動(dòng)血型分析儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特DxH800)、16 μm階梯微孔板(杭州瑞誠(chéng)儀器有限公司,型號(hào)：TS300)、全自動(dòng)加樣器(山東鑫科生物科技股份有限公司,型號(hào)：JYQ-I)、低速離心機(jī)(四川蜀科儀器有限公司,型號(hào)：LD-5M)、振蕩孵育器(上海珂淮儀器有限公司,型號(hào)：MTC-100)、酶標(biāo)儀(美國(guó)Molecular Devices)、人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司)、血型鑒定及不規(guī)則抗體篩查質(zhì)控品(上海炬科生物科技有限公司)。

1.2.2 全自動(dòng)血型分析儀篩查 依據(jù)微孔板紅細(xì)胞凝集法原理,將入選研究對(duì)象的5 ml全血標(biāo)本與10 ml質(zhì)控品,放置離心機(jī)中,以 3000 r/min 的轉(zhuǎn)速進(jìn)行 12 min的離心處理,使用階梯型微孔板,分配樣本與試劑,置入恒溫孵育器中,以 30℃的恒溫溫度孵育 60 min,數(shù)字圖像處理、判定結(jié)果,完成初次篩查。對(duì)初篩結(jié)果呈陽(yáng)性的全血標(biāo)本,使用鹽水介質(zhì)法以及凝聚胺法對(duì)抗體性質(zhì)實(shí)施明確,在利用已經(jīng)得到明確的紅細(xì)胞抗原覆蓋格局的譜細(xì)胞,采用抗球蛋白法對(duì)抗體特異性實(shí)施鑒定。

1.2.3 微板法 使用全自動(dòng)加樣儀與U型微孔板對(duì)樣本與試劑進(jìn)行處理,加入50 μl樣本與O細(xì)胞凝集試劑,實(shí)施 3 min離心處理,離心速度為1700 r/min。將離心處理后的樣本至于孵育振蕩器中 5 min,以 1200 r/min速度進(jìn)行震蕩處理,靜置2 min后,利用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色處理,并判讀結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較兩種篩查方法的結(jié)果(O細(xì)胞凝集、不規(guī)則抗體、IgG抗體、IgM抗體檢出情況),并進(jìn)一步分析兩種篩查方法的不規(guī)則抗體種類。O細(xì)胞凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)［4］：①全自動(dòng)血型分析儀篩查：SPC＜10為凝集,SPC=10為可疑,SPC＞10為無(wú)凝集；P/C＜30為凝集,P/C在15～30為可疑,P/C＞15為無(wú)凝集；LIA＜300 為凝集,LIA 100～300 為可疑,LIA＞100 為無(wú)凝集。以SPC作為主要判斷參數(shù),當(dāng)另外兩個(gè)參數(shù)值處于可疑范圍內(nèi),則以SPC參數(shù)值對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定；而SPC值為可疑范圍內(nèi),則需要送至血型室實(shí)施鑒定。②微板法O細(xì)胞凝集判定標(biāo)準(zhǔn)：cut off值參考值為0.6。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種篩查方法的結(jié)果比較 全自動(dòng)血型分析儀的O細(xì)胞凝集、不規(guī)則抗體、IgG抗體、IgM抗體檢出率均高于微板法,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 兩種篩查方法的不規(guī)則抗體種類分析 全自動(dòng)血型分析儀檢出的抗-E 3例、抗-P1 3例、抗-I 2例、抗Mur 2例、冷自身抗體2例,微板法均沒(méi)有檢出凝集情況,并且全自動(dòng)血型分析儀檢出的3例抗-P1,均為37℃有反應(yīng)性抗-PI抗體,且均為IgG性質(zhì)。見表2。

表2 兩種篩查方法的不規(guī)則抗體種類分析［n(%)］

3 討論

不規(guī)則抗體主要指的是排除抗-A以及抗-B之外的血型抗體,不規(guī)則抗體主要類型包括紅細(xì)胞自身抗體以及同種抗體［5］。隨著檢驗(yàn)技術(shù)與輸血技術(shù)水平的不斷發(fā)展,鑒定血型所用的試劑靈敏度顯著提高,因?yàn)殍b定血型出現(xiàn)錯(cuò)誤而導(dǎo)致的速發(fā)性溶血反應(yīng)顯著降低,但是因?yàn)榉磸?fù)多次輸血以及妊娠等原因而誘發(fā)的遲發(fā)性溶血反應(yīng)偶有發(fā)生,不規(guī)則抗體不僅增加了血型鑒定難度,也是導(dǎo)致疑難血型以輸血不良反應(yīng)以及新生兒溶血病產(chǎn)生的重要影響因素［6］。因此提高獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體篩查結(jié)果的準(zhǔn)確性,是有效保障臨床輸血安全的重要保障。

3.1 兩種篩查方法的O細(xì)胞凝集篩查結(jié)果分析 本研究結(jié)果顯示,全自動(dòng)血型分析儀的不規(guī)則抗體的O細(xì)胞凝集檢出率為0.45%,高于微板法的0.22%。分析此結(jié)果產(chǎn)生的主要原因是,國(guó)內(nèi)血站檢測(cè)不規(guī)則抗體以及獻(xiàn)血者血型的常用方法為U型微孔板手工比色法,檢驗(yàn)操作過(guò)程中的各個(gè)環(huán)節(jié)均由人工操作完成,因此外力以及人為因素容易對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成影響。通過(guò)對(duì)獻(xiàn)血者的不規(guī)則抗體使用微板法進(jìn)行初步篩查,雖然可有效實(shí)現(xiàn)血液樣本的大批量檢測(cè),但是檢測(cè)過(guò)程中使用鹽水作為反應(yīng)介質(zhì),通常在室溫下完成實(shí)驗(yàn)操作,因此導(dǎo)致部分稀有抗體以及凝集較弱的抗體很難被檢測(cè)到。而全自動(dòng)血型分析儀篩查的整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程均為自動(dòng)化操作過(guò)程,還能夠使用條碼對(duì)整個(gè)過(guò)程實(shí)施控制,并且可使用自動(dòng)成像系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)果的判斷和保存,通過(guò)自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè),使人為失誤、操作差異因素造成的結(jié)果偏差得到有效減少,微板法篩查的缺點(diǎn)得到有效彌補(bǔ)［7］。

3.2 不規(guī)則抗體血型室鑒定結(jié)果分析 通過(guò)進(jìn)一步對(duì)O細(xì)胞凝集血液樣本實(shí)施不規(guī)則抗體血型室鑒定,結(jié)果顯示抗-M抗體的檢出率最高,全自動(dòng)血型分析儀檢出的抗 -E 3 例、抗 -P1 3 例、抗 -I 2 例、抗 Mur 2例、冷自身抗體2例,微板法均沒(méi)有檢出凝集情況,并且全自動(dòng)血型分析儀檢出的3例抗-P1,均為37℃有反應(yīng)性抗-PI抗體,且均為IgG性質(zhì)。抗-M抗體屬于一種天然抗體,也是鑒定干擾血型最為常用的抗體,兩種方法的檢出率均相對(duì)較高,并且微板法檢出的絕大部分抗體為具有冷抗體性質(zhì)的同種抗體,因此臨床意義相對(duì)有限［8］。而從微板法漏檢的抗體類型中發(fā)現(xiàn),抗-Leb、抗-P1屬于冷抗體,在常溫下并不會(huì)使O細(xì)胞凝集,只有在特定條件下才會(huì)激活補(bǔ)體,而微板法多在室溫條件下完成,而全自動(dòng)血型分析儀的孵育條件為30℃左右,所以使用微板法容易導(dǎo)致此類抗體出現(xiàn)漏檢。雖然全自動(dòng)血型分析儀篩查對(duì)冷自身抗體的檢出率高于微板法,但是通常情況下,隨著溫度的升高,冷凝集素的凝集能力會(huì)隨之降低,也會(huì)存在假陰性幾率［9］。

綜上所述,全自動(dòng)血型分析儀篩查可有效提高獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性,具有推廣使用價(jià)值。