苯菌靈在蘋(píng)果上的殘留分布研究

付堯 韋文芳 劉冬梅

摘要?近年來(lái)苯菌靈在蘋(píng)果上的使用逐漸增加，使蘋(píng)果白粉病、黑星病、輪紋病等得到有效防治。但同時(shí)也導(dǎo)致了苯菌靈在蘋(píng)果果實(shí)及其加工制品中的殘留問(wèn)題。采用乙腈萃取和液質(zhì)聯(lián)用的檢測(cè)方法，研究了苯菌靈農(nóng)藥在蘋(píng)果果皮、果柄、果萼、果肉及果核中的殘留分布規(guī)律。結(jié)果表明，果柄中苯菌靈農(nóng)藥殘留最多，果皮中次之，果肉中殘留最少。

關(guān)鍵詞?蘋(píng)果;苯菌靈;殘留分布

中圖分類(lèi)號(hào)：S481.8?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A?文章編號(hào)：2095-3305（2020）03-181-04

DOI：?10.19383/j.cnki.nyzhyj.2020.03.075

蘋(píng)果是人們最喜愛(ài)的水果之一，蘋(píng)果農(nóng)藥殘留作為評(píng)價(jià)食品安全性的主要內(nèi)容，已納入中國(guó)、美國(guó)、日本及歐盟各國(guó)的食品安全監(jiān)測(cè)計(jì)劃，年年進(jìn)行例行監(jiān)測(cè)。

苯菌靈化學(xué)名稱(chēng)1-正丁胺基甲酰-苯并咪唑-2-氨基甲酸甲酯，是一種高效、廣譜、內(nèi)吸性殺菌劑，具有保護(hù)、鏟除和治療作用。對(duì)仁果及核果類(lèi)作物、谷類(lèi)作物、蔬菜上的子囊菌綱、半知菌綱及某些擔(dān)子菌綱的真菌引起的病害有良好防效。近年來(lái)，苯菌靈在蘋(píng)果上的使用逐漸增加，使蘋(píng)果白粉病、黑星病、輪紋病等得到有效防治。但同時(shí)也導(dǎo)致了苯菌靈在蘋(píng)果果實(shí)中的殘留問(wèn)題。開(kāi)展蘋(píng)果農(nóng)藥殘留監(jiān)測(cè)，對(duì)掌握蘋(píng)果農(nóng)藥殘留狀況、促進(jìn)蘋(píng)果農(nóng)藥殘留水平降低和保護(hù)消費(fèi)者身體健康具有重要意義。

1?國(guó)內(nèi)外研究

1.1?國(guó)外蘋(píng)果農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀

早在20世紀(jì)80年代，蘋(píng)果的農(nóng)藥殘留問(wèn)題就開(kāi)始受到廣泛關(guān)注，美、英、德等國(guó)陸續(xù)開(kāi)展了大規(guī)模的食品（包括蘋(píng)果）農(nóng)藥殘留監(jiān)測(cè)。美國(guó)1993—1994年對(duì)769個(gè)自產(chǎn)蘋(píng)果樣品和1?062個(gè)進(jìn)口蘋(píng)果樣品進(jìn)行了農(nóng)藥殘留檢測(cè)，檢測(cè)農(nóng)藥79種，自產(chǎn)蘋(píng)果和進(jìn)口蘋(píng)果的農(nóng)藥殘留檢出率分別是85%和86%，但只有個(gè)別樣品超過(guò)了美國(guó)環(huán)境保護(hù)署（EPA）設(shè)定的MRL，超標(biāo)率僅為0.30%和0.41%。日本1995年對(duì)5?405個(gè)蔬菜水果樣品進(jìn)行了殘留檢測(cè)，其中僅有一個(gè)樣品超標(biāo)。瑞典1995年對(duì)5?373個(gè)國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口蔬菜水果樣進(jìn)行了覆蓋170種農(nóng)藥的殘留檢測(cè)，其中891個(gè)國(guó)產(chǎn)樣品和2?682個(gè)進(jìn)口樣品的檢出率分別為9.4%和38.2%，超標(biāo)率分別為0.4%和6.0%。愛(ài)爾蘭在2000年"國(guó)家農(nóng)藥殘留監(jiān)控計(jì)劃"執(zhí)行中檢測(cè)蘋(píng)果42個(gè)樣品和27種農(nóng)藥，59.5%的樣品檢出了農(nóng)藥殘留，但沒(méi)有樣品超標(biāo)。據(jù)歐盟2001年對(duì)蘋(píng)果農(nóng)藥殘留的監(jiān)測(cè)結(jié)果，在檢測(cè)的乙酰甲胺磷、苯菌靈類(lèi)、百菌清、毒死蜱、甲基對(duì)硫磷、抑菌脲、代森錳類(lèi)、甲胺磷、腐霉利等9種（類(lèi)）農(nóng)藥2?641個(gè)樣品中，52%樣品未檢出農(nóng)藥殘留，47%的樣品農(nóng)藥殘留水平未超過(guò)MRL，僅有1.1%的樣品超標(biāo)。

1.2?國(guó)內(nèi)蘋(píng)果農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀

目前，國(guó)內(nèi)對(duì)蘋(píng)果中苯菌靈的最大殘留限量（MRL）做出了臨時(shí)限量規(guī)定，MRL值為5?mg/kg。從已有的報(bào)道來(lái)看，國(guó)內(nèi)蘋(píng)果農(nóng)藥殘留主要是有機(jī)磷和菊酯類(lèi)等殘留期相對(duì)較長(zhǎng)的殺蟲(chóng)劑，殘留普遍且超標(biāo)問(wèn)題較突出;有機(jī)氯農(nóng)藥雖有檢出，但殘留水平逐年降低，對(duì)果品安全的影響較小;關(guān)于殺菌劑、昆蟲(chóng)激素和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等殘留的研究報(bào)道很少，殘留水平尚不十分清楚。

有機(jī)氯農(nóng)藥（特別是HCH和DDT）半衰期長(zhǎng)、不易降解，目前檢出率很高，但因已禁用多年，殘留水平較低。2000年衛(wèi)計(jì)委食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所組織對(duì)水果中有機(jī)氯農(nóng)藥的檢測(cè)中，HCH和DDT雖有檢出，但含量遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥在我國(guó)年產(chǎn)量達(dá)19.2萬(wàn)噸（1997年），占農(nóng)藥總產(chǎn)量的48.6%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)世界有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑占農(nóng)藥總產(chǎn)量35%的平均值，是目前影響果品安全生產(chǎn)的主要因素，在蘋(píng)果中檢出率和超標(biāo)率均較高。擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥因具有性質(zhì)穩(wěn)定、不易光解、殘效期長(zhǎng)等特點(diǎn)，在高毒有機(jī)磷農(nóng)藥被禁用后，有了更廣泛的使用，其殘留問(wèn)題日益突出。氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的用量逐年增加，其殘留已引起關(guān)注。但目前關(guān)于氨基甲酸酯農(nóng)藥在蘋(píng)果中殘留狀況的報(bào)道較少。

1.3?國(guó)內(nèi)蘋(píng)果農(nóng)藥殘留研究現(xiàn)狀

陳瑩[1]等運(yùn)用分散固相萃取-液相色譜法，檢測(cè)蘋(píng)果樣品中的多菌靈和噻菌靈農(nóng)藥的殘留量，?使用C18和PSA?吸附劑組合將多菌靈的回收率由文獻(xiàn)中大于110%降到91.8%～104.7%，采用二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，以甲醇-磷酸緩沖液（體積比為40：60）為流動(dòng)相，流速0.8?ml/min，于285?nm波長(zhǎng)下檢測(cè)。

李海飛[2]等利用高效液相色譜快速測(cè)定蘋(píng)果中苯并咪唑類(lèi)農(nóng)藥（多菌靈、噻菌靈和甲基硫菌靈）殘留量，樣品經(jīng)乙腈萃取后鹽析，提取液經(jīng)PSA和ODS吸附劑加無(wú)水硫酸鎂凈化后，過(guò)0.45?μm濾膜，直接用HPLC-PDA（二極管陣列檢測(cè)器）分離測(cè)定，外標(biāo)法定量。

李曉婷[3]應(yīng)用紅外顯微成像技術(shù)及衰減全反射紅外光譜技術(shù)定性及定量檢測(cè)農(nóng)藥殘留。對(duì)于混合農(nóng)藥，可以通過(guò)譜圖上特征峰及峰強(qiáng)度來(lái)定性農(nóng)藥。而通過(guò)衰減全反射紅外技術(shù)可以準(zhǔn)確測(cè)定農(nóng)藥含量。

孫云云[4]等利用激光顯微拉曼光譜技術(shù)，以蘋(píng)果為載體，有機(jī)磷農(nóng)藥毒死蜱為研究對(duì)象，初步探討了蘋(píng)果表面毒死蜱農(nóng)藥的快速無(wú)損檢測(cè)方法。選取硫代磷酸酯基團(tuán)的632?cm-1處的拉曼信號(hào)可識(shí)別蘋(píng)果表面毒死蜱農(nóng)藥殘留，其檢測(cè)限為48?mg/kg?；诶庾V的檢測(cè)手法，有望實(shí)現(xiàn)水果表面農(nóng)藥殘留的快速、無(wú)損傷檢測(cè)，為實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥殘留無(wú)損、快速、在線檢測(cè)奠定技術(shù)基礎(chǔ)。

黃文雯[5]利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法，實(shí)現(xiàn)了濃縮果汁中常見(jiàn)苯并咪唑殺菌劑殘留檢測(cè)，并建立了可同時(shí)檢測(cè)濃縮果汁中常見(jiàn)苯并咪唑殺菌劑及其中間轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。

吳麗華[6]采用基質(zhì)固相分散萃取（MSPD）前處理蘋(píng)果樣品，建立了氟羅里硅土（florisil）MSPD、氣相色譜-火焰光度檢測(cè)器（GC-FPD）測(cè)定16種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量，利用氟羅里硅土MSPD、氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器（GC-ECD）測(cè)定19種菊酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量，并且進(jìn)一步建立了C18基質(zhì)固相分散，柱后衍生、HPLC-FLD測(cè)定蘋(píng)果中6種氨基甲酸酯農(nóng)藥的方法。

2?殘留量測(cè)定

2.1?實(shí)驗(yàn)部分

2.1.1?試劑與儀器?Agilent?1200?液質(zhì)連用儀，含有Agilent?化學(xué)工作站（美國(guó)Agilent公司）;Agilent?Erolex?C18?色譜柱（2.1?mm×50?mm×1.8?um，美國(guó)Agilent公司）;JY2002?電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）;RJ-TDL-40B?低速臺(tái)式離心機(jī)（瑞江分析儀器公司）;渦旋儀;超聲波清洗儀;秒表。乙腈為色譜純（Thermo?Fisher?公司）;實(shí)驗(yàn)室用水為超純水（Mili-Q）;丙酮為分析純;PSA，C18，硅鎂型吸附劑，氯化鈉，用前經(jīng)130℃烘干6?h?并過(guò)篩。苯菌靈是質(zhì)量濃度為1?000?mg/L標(biāo)準(zhǔn)品，多菌靈是質(zhì)量濃度為200?mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品。均為天津匯迪生物技術(shù)有限公司的有證標(biāo)準(zhǔn)品。

2.1.2?蘋(píng)果樣品加工步驟?果皮部分使用去皮器對(duì)蘋(píng)果樣品進(jìn)行去皮處理，稱(chēng)量果皮質(zhì)量，后將果皮勻漿粉碎。果核、果柄、果萼部分用去核器（直徑2?cm）沿去皮蘋(píng)果中心軸截取蘋(píng)果的從柄到萼的果核部分，分為上（1/4）、中（2/4）、下（1/4）三部分。中（2/4）為果核部分，上（1/4）為果柄部、下（1/4）為果萼部。分別稱(chēng)量果肉、果核、果萼、果柄質(zhì)量，并分別勻漿。果肉部分稱(chēng)量去除了皮、核、柄萼部的果肉質(zhì)量，將果肉勻漿。（每個(gè)樣本的樣本量為5個(gè)蘋(píng)果合并處理）

2.1.3?樣品前處理過(guò)程?稱(chēng)取蘋(píng)果樣品10.0?g于50?ml離心管中，加入20?ml乙腈，高速勻漿1?min后加入4?g?NaCl，高速勻漿30?s后以3?800?r/min速度離心5?min。取上清液1?ml待凈化。向1?ml上清液中加入50?mg?PSA、50?mg?C18、50?mg硅鎂型吸附劑，高速勻漿1?min后以10?000?r/min速度離心3?min，上清液經(jīng)0.45?μm微膜過(guò)濾，進(jìn)液質(zhì)連用儀分析。

2.2?色譜條件

Agilent?1200液質(zhì)連用儀，色譜柱為Erolex?C18?（2.1?mm×50?mm×1.8?um，美國(guó)Agilent公司）;流速為0.2?ml/?min;進(jìn)樣量為5?ul;流動(dòng)相為水-乙腈（30：70）;掃描方式為正離子（見(jiàn)表1）;檢測(cè)方式為多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。

2.3?樣品中的苯菌靈殘留量計(jì)算

由于苯菌靈在溶解時(shí)會(huì)有部分變?yōu)槎嗑`，最后總殘留量以多菌靈記。

（1）苯菌靈標(biāo)樣中苯菌靈的量計(jì)算公式：

式中，Cben--苯菌靈標(biāo)樣中苯菌靈的濃度

Call--苯菌靈標(biāo)樣濃度

Cben（car）--苯菌靈標(biāo)樣中多菌靈的濃度

Acar--多菌靈標(biāo)樣的峰面積

Ccar--多菌靈標(biāo)樣濃度

Aben（car）--苯菌靈標(biāo)樣中多菌靈的峰面積

（2）樣品中的苯菌靈農(nóng)藥殘留量計(jì)算公式：

式中，Cben--苯菌靈標(biāo)樣中苯菌靈的濃度

Aben--苯菌靈標(biāo)樣中苯菌靈的峰面積

Ai--樣品中苯菌靈的峰面積

V--最終定容體積

m--稱(chēng)取的樣品量

X--樣品中苯菌靈殘留量

3?結(jié)果與分析

3.1?苯菌靈農(nóng)藥標(biāo)樣圖

對(duì)1.52?mg/kg苯菌靈農(nóng)藥標(biāo)樣進(jìn)行液質(zhì)連用儀測(cè)定（見(jiàn)圖1）。

圖1中雙線重疊的兩組峰，其中高的峰（即黑色峰）是1?mg/kg多菌靈標(biāo)樣的峰，由兩張圖可以看出1.52?mg/kg的苯菌靈標(biāo)樣自身有一部分已分解為多菌靈，所以要想求得苯菌靈的殘留量，要先求得剩余的苯菌靈的量才可以做樣品中苯菌靈的殘留分析。

3.2?蘋(píng)果中苯菌靈農(nóng)藥殘留液相色譜圖

蘋(píng)果樣品苯菌靈農(nóng)藥殘留液相色譜圖（見(jiàn)圖2）。

3.3?回收率試驗(yàn)

在空白樣品中添加0.1?mg/kg、1.0?mg/kg、10?mg/kg?水平的苯菌靈農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按前文提及的方法處理，液質(zhì)連用儀測(cè)定，計(jì)算回收率;重復(fù)5次，求平均值。試驗(yàn)結(jié)果表明，添加0.1～10?mg/kg?苯菌靈農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，苯菌靈農(nóng)藥的回收率為96.2%～101.8%，表明該方法可作為檢測(cè)苯菌靈農(nóng)藥可靠的前處理方法（見(jiàn)表2）。

3.4?蘋(píng)果中苯菌靈的殘留分布

根據(jù)前文提及的實(shí)驗(yàn)方法，分別測(cè)定樣品中果柄，果皮，果肉，果核，果萼中苯菌靈農(nóng)藥的殘留，蘋(píng)果果實(shí)不同部位中的農(nóng)藥殘留存在明顯差異。根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及以上統(tǒng)計(jì)圖形得出，苯菌靈農(nóng)藥在蘋(píng)果中的分布規(guī)律：蘋(píng)果不同部位苯菌靈農(nóng)藥殘留不同，果柄中的殘留最高，其次是果皮，位于第三位的是果蒂，果肉及果核中苯菌靈農(nóng)藥的殘留量很小，基本可以忽略不計(jì)（見(jiàn)表3、圖3）。

4?建議

實(shí)驗(yàn)研究表明，苯菌靈等內(nèi)吸性農(nóng)藥，噴施過(guò)后因其高殘留的特性，農(nóng)藥往往還未降解充分，就已經(jīng)被生產(chǎn)和食用。在加工和食用過(guò)程中簡(jiǎn)單沖洗處理是不能將其去除干凈的，因此建議從源頭加以控制，規(guī)范農(nóng)藥管理，嚴(yán)格管控苯菌靈農(nóng)藥施用，促進(jìn)綠色蘋(píng)果生產(chǎn)。蘋(píng)果加工制品生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)最大限度刨除柄、蒂及果皮或設(shè)計(jì)苯菌靈等高殘留農(nóng)藥的吸附去除工序;消費(fèi)市場(chǎng)要建立現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)和預(yù)警系統(tǒng)，確保食用者的安全。

參考文獻(xiàn)

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責(zé)任編輯：黃艷飛