益生菌及中草藥添加劑對仔豬腸道結(jié)構(gòu)的影響

鐘 亮，張 華，羅秋繼

1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，陜西咸陽 712100；2.遂寧市中通實(shí)業(yè)集團(tuán)動(dòng)物藥業(yè)有限公司，四川遂寧 629000

益生菌被稱為活性微生物飼料添加劑，能維持機(jī)體腸道的穩(wěn)態(tài)，優(yōu)化機(jī)體的免疫功能。初生仔豬腸道無菌，需通過接觸母體和外界環(huán)境獲得有益菌并使之逐漸定殖于腸道。因此人為添加益生菌對仔豬腸道健康發(fā)育具有至關(guān)重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)，益生菌（枯草芽孢桿菌及乳酸菌）的添加可顯著提高初生仔豬的日增重及腸道免疫功能。此外隨著人們對中草藥的認(rèn)識(shí)愈來愈成熟，人們發(fā)現(xiàn)將其作為添加劑應(yīng)用到斷奶仔豬的日糧中能有效地提高斷奶仔豬的食欲及飼料轉(zhuǎn)化率，降低腹瀉率，調(diào)節(jié)腸道微生物菌群（增加有益菌、抑制有害菌等），增強(qiáng)仔豬抗病力，使斷奶仔豬健康生長。本試驗(yàn)通過給初生仔豬飼喂益生菌制劑、中草藥添加劑，研究探究兩者對仔豬腸道結(jié)構(gòu)的影響，以期為生產(chǎn)實(shí)踐提供基礎(chǔ)理論解釋與相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

中草藥添加劑組方（質(zhì)量百分比）：黃芪10 g，板藍(lán)根15 g，茯苓10 g，甘草10 g，山楂15 g，連翹5 g。以上各中藥材按上述比例混合，使用超微粉碎機(jī)粉碎，配制成中草藥散劑備用。試驗(yàn)添加水平為1%。

益生菌制劑：乳酸菌+枯草芽孢桿菌活菌制劑（活菌數(shù)均為8×106CFU/g），試驗(yàn)添加水平約0.2%。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在齊全農(nóng)牧集團(tuán)股份有限公司的豬場進(jìn)行。采用全進(jìn)全出的飼養(yǎng)管理模式，半漏縫地面飼養(yǎng)，定時(shí)清理糞便，豬舍溫度控制在25～30 ℃，每圈（1.5×2.0 m2）均配有2個(gè)乳頭式飲水器和1個(gè)4孔料槽，讓豬自由采食與飲水。按豬場常規(guī)程序進(jìn)行免疫和保健。試驗(yàn)選取出生2 d內(nèi)的杜長大(DLY)三元雜交仔豬16只，隨機(jī)將其分為4組（每組4只）：對照組I、益生菌制劑組II、中草藥組添加劑III、益生菌制劑+中草藥添加劑復(fù)合組IV。仔豬出生2 d（確保攝入初乳）后開始試驗(yàn)，將益生菌活菌制劑（或中草藥制劑）與全脂奶粉混合，調(diào)制成糊狀，通過湯勺灌入仔豬舌根部確保仔豬完全服用，每日2次（上午、下午各一次），試驗(yàn)持續(xù)28 d。

1.3 測定指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束后，晨間屠宰所有仔豬，取各腸段組織（十二指腸，空腸，回腸，結(jié)腸，盲腸）3 cm，測定隱窩深度、絨毛高度，將腸道組織放入10%甲醛磷酸緩沖液中固定、保存，用于測定腸壁組織結(jié)構(gòu)指標(biāo)，進(jìn)而判斷腸道組織通透性。

取保存好的十二指腸、空腸、回腸的腸管組織，用乙醇逐漸脫水，二甲苯透明，采用BMJ-3型包埋機(jī)包埋，LEICA RM2135切片機(jī)進(jìn)行切片（7 μm），用蘇木精和伊紅（HE）染色，樹膠封片，日本PM.20顯微照相設(shè)備進(jìn)行圖像采集，Motic Images2000 軟件進(jìn)行組織切片絨毛高度、隱窩深度及各小腸部位腸壁厚度的測量。多次測量后取均值[1]。腸絨毛高度定義為從腸腺絨毛聯(lián)結(jié)處到絨毛頂端的長度（μm）；隱窩深度定義為從腸腺基部到腸腺絨毛聯(lián)結(jié)處的長度（μm），并計(jì)算絨毛高度與隱窩深度比值（V/C）。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，方差分析差異顯著者用鄧肯氏（Duncan）法進(jìn)行平均數(shù)間的差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 對初生仔豬小腸絨毛高度的影響

分析不同添加劑對初生仔豬小腸絨毛高度的影響。由1表可以看出，十二指腸、空腸、回腸絨毛高度分別以IV組、II組、III組最大。其中十二指腸絨毛高度IV組顯著高于I組（p＜0.05），與II組、III組差異不顯著（p＞0.05）；空腸絨毛高度II組顯著高于I組（p＜0.05），與III組、IV組差異不顯著（p＞0.05）；回腸絨毛高度III組顯著高于I組（p＜0.05），與II組、IV組差異不顯著（p＞0.05）。

表1 十二指腸、空腸、回腸絨毛高度（μm）的比較

2.2 對初生仔豬小腸隱窩深度的影響

分析不同添加劑對初生仔豬小腸隱窩深度的影響。由表2可以看出，十二指腸、空腸、回腸隱窩深度分別以II組、I組、IV組最小。其中十二指腸隱窩深度各組差異不顯著（p＞0.05）；空腸隱窩深度I組顯著低于II組、III組（p＜0.05），與IV組差異不顯著（p＞0.05）；回腸隱窩深度各組差異均不顯著（p＞0.05）。

表2 十二指腸、空腸、回腸隱窩深度（μm）的比較

2.3 對初生仔豬小腸絨腺比的影響

分析不同添加劑對初生仔豬小腸絨腺比的影響。由表3可以看出，十二指腸、空腸絨腺比均以IV組最大。其中十二指腸絨腺比IV組顯著高于I組（p＜0.05），與II組、III組差異不顯著（p＞0.05）；空腸絨腺比IV組顯著高于I、III組（p＜0.05），與II組差異不顯著（p＞0.05）；回腸絨腺比IV組顯著高于I組（p＜0.05），與II組、III組差異不顯著（p＞0.05）。仔豬十二指腸絨毛形態(tài)切片證實(shí)III、IV組小腸絨毛長而完整，I、II組小腸絨毛短而參差不齊，且存在明顯的絨毛斷裂的情況。

表3 十二指腸、空腸、回腸絨腺比的比較

2.4 對初生仔豬小腸腸壁厚度的影響

表4 十二指腸、空腸、回腸腸壁厚度（μm）的比較

分析不同添加劑對初生仔豬小腸腸壁厚度的影響。由表4可以看出，十二指腸、空腸、回腸腸壁厚度分別以IV組、II組、IV組最小。其中十二指腸腸壁厚度IV組顯著低于II組（p＜0.05），與I組、III組差異不顯著（p＞0.05）；空腸腸壁厚度II組與I、III、IV組差異均顯著（p＞0.05）；回腸腸壁厚度IV組顯著低于I組（p＜0.05），與II組、III組差異不顯著（p＞0.05）。十二指腸腸壁切片結(jié)果也證實(shí)I、II、III、IV組小腸腸壁厚度存在較為直觀的厚度差異，IV組腸壁厚度顯著小于I組。

3 討論

小腸是初生仔豬營養(yǎng)物質(zhì)吸收的重要器官，也是許多腸道病原菌定殖的場所。因此本試驗(yàn)對初生仔豬腸道功能的維持及疾病控制具有重要意義。此外，小腸的消化和吸收作用依賴小腸上的環(huán)形皺襞、腸絨毛及絨毛表面的柱狀上皮細(xì)胞等結(jié)構(gòu)來完成[2]。

腸絨毛生長依賴腸腺中的柱狀細(xì)胞和環(huán)狀細(xì)胞的增殖、分化及移行，小腸絨毛的生長狀況與初生仔豬的營養(yǎng)吸收和生長關(guān)系極為密切。隱窩深度反映細(xì)胞的生長率，隱窩變淺，表明細(xì)胞成熟率上升，分泌功能增強(qiáng)。絨毛高度/隱窩深度（絨腺比）綜合反映小腸的功能狀態(tài)，腸絨毛高度越高，隱窩深度越淺，越利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。而腸絨毛高度降低，隱窩深度的增加往往伴隨著絨毛萎縮，消化道吸收功能下降，最終導(dǎo)致初生仔豬腹瀉的發(fā)生，對初生仔豬的存活產(chǎn)生巨大的威脅[3]。

李旋亮等[4]用含有乳酸菌和芽孢桿菌的基礎(chǔ)日糧飼喂斷奶仔豬，發(fā)現(xiàn)添加益生菌能夠改善仔豬腸道的絨毛高度，說明益生菌能夠改善仔豬的腸道組織形態(tài)，有利于仔豬機(jī)體的營養(yǎng)吸收。彭曉培等[5]研究益生菌對仔豬腹瀉的影響，結(jié)果表明添加益生菌后斷奶仔豬的腹瀉率顯著降低，并隨著添加量的增加而更為顯著。此外，石秋鋒等[6]發(fā)現(xiàn)日糧添加益生菌能降低仔豬腹瀉率，同時(shí)粗蛋白表觀消化率得到提高。

另外，本試驗(yàn)所用中草藥添加劑組方中，板藍(lán)根具有清熱解毒、抗內(nèi)毒素的作用，主要用于大腸桿菌病、病毒性腹瀉等疾病的治療[7]。山楂有理氣健脾、燥濕化痰、消食健胃、活血化瘀的功能，主治肚腹脹滿、消化不良等。甘草有補(bǔ)中益氣、清熱解毒、緩和藥性的作用，能抗炎、抗過敏。曹日亮等[8]利用復(fù)方中藥添加劑（黨參、白術(shù)、神曲、紫蘇子、陳皮按一定比例配制）飼喂斷奶仔豬，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，試驗(yàn)組仔豬各腸段絨毛高度顯著增加，空腸和回腸部位更加明顯。

本試驗(yàn)研究中，無論是飼喂益生菌制劑的初生仔豬還是飼喂中草藥添加劑的初生仔豬，小腸各部位絨腺比都高于對照組，分析不同添加劑對仔豬小腸各部位腸壁厚度的影響，結(jié)果顯示，添加劑的使用增加了初生仔豬的腸壁通透性。更為重要的是，試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明益生菌制劑與中草藥添加劑共同使用產(chǎn)生了相互促進(jìn)的作用，相對于單一使用效果更佳。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)研究表明，給初生仔豬飼喂益生菌制劑或中草藥添加劑均可有效改善初生仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，提高絨腺比，增加腸壁通透性。且益生菌制劑與中草藥添加劑組合使用效果更佳。