大腸不同部位惡性上皮腫瘤中錯配修復蛋白表達及意義

段運動,代俊利

(河北省承德市中心醫(yī)院重癥醫(yī)學科， 河北 承德 067000)

大腸癌是消化道比較常見的惡性腫瘤之一，2014年WHO在世界癌癥大會上指出，大腸癌發(fā)病率位于惡性腫瘤發(fā)病率的第三位，2012年世界癌癥協(xié)會統(tǒng)計大約有69萬人死于大腸癌[1]。大腸癌的發(fā)病有很多因素，由于其發(fā)病機理較為復雜，截止到現(xiàn)在還沒有一個共性的說法，根據(jù)相關(guān)的文獻資料可知，大腸癌的發(fā)病與微衛(wèi)星不穩(wěn)定有很大的關(guān)系，錯配修復基因是造成微衛(wèi)星不穩(wěn)定的主要因素，也就是說是由于錯配修復蛋白(Mismatch repair, MMR)的表達缺失造成的[2]。本研究通過免疫組化SP方法研究MMR的表達，并分析其表達情況對大腸癌發(fā)病率和死亡率的影響，希望可以找到該種蛋白是如何影響大腸癌的發(fā)病及在不同部位大腸癌中的表達意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料:收集的資料來源于承德市中心醫(yī)院。病例為2017年6月至2018年12月確診的大腸癌患者，患者的年齡在37歲到71歲(平均57+6.41歲)，共計168例。在這168例患者中右半結(jié)腸癌、左半結(jié)腸癌和直腸癌的人數(shù)分別是47人、92人和29人。所有病例的診斷均是按照2015年中國結(jié)直腸癌診療標準進行判定的，而且這些患者在進行診斷之后均沒有接受過放化療及生物治療，而且具有詳細的臨床病理資料，其中選用的對照組為與腫瘤相距5cm的正常大腸黏膜(78例)。

1.2方法：本研究中采用免疫組織化學染色法對MMR進行分析和研究， MLH1、MSH2、MSH6、PMS2這四種錯配修復蛋白，全部正常表達，認為MMR正常。若只要有一種不表達，就可以認MMR缺失，也就是錯配修復出現(xiàn)缺陷。免疫組化試劑均購于北京中杉金橋生物有限公司。

1.3結(jié)果判定：四種錯配修復蛋白(MMR)：MLH1、MSH2、MSH6、PMS2，陽性表達均位于細胞核。為了試驗的完整性和科學性，以陽性腫瘤細胞周圍的正常上皮細胞、淋巴細胞作為對照。腫瘤細胞核呈現(xiàn)棕黃色為陽性表達。

1.4統(tǒng)計方法:本次研究數(shù)據(jù)處理使用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件，計數(shù)資料以構(gòu)成比描述，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1在168例大腸癌組織中MMR蛋白表達缺失組(dMMR)27例(16.07%)，MMR蛋白無缺失組(pMMR)為141例(83.93%)，78例癌旁正常大腸黏膜組織MMR蛋白表達缺失組(dMMR)56例(71.79%)，MMR蛋白無缺失組(pMMR)為22例(28.21%)，MMR蛋白在大腸癌中與正常腸黏膜中的表達具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 MMR蛋白在大腸癌及正常腸黏膜組織中的表達n(%)

2.2在168例大腸癌組織中MMR蛋白表達缺失組(dMMR)27例(16.07%)，MMR蛋白無缺失組(pMMR)為141例(83.93%)。在47例右半結(jié)腸癌中，dMMR為19例(40.42%)，在左半結(jié)腸癌和直腸癌中dMMR分別為5例(5.43%)和3例(10.34%)，dMMR在不同部位大腸癌具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。并且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和侵透肌層組dMMR要明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及侵犯肌層組(P<0.05)，見圖1、表2。

表2 MMR蛋白表達與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系n(%)

圖1 MLH1、MSH2、MSH6、PMS2在大腸癌中的表達

3 討 論

惡性腫瘤的病因不明確，發(fā)生與多種因素有關(guān)，正常的人體中存在一套完整的DNA修復系統(tǒng)，如果修復機制出現(xiàn)異常，可引起基因突變導致癌變。作為消化道常見腫瘤之一的大腸癌，根據(jù)不同的分子變異基礎，可以將病因分成兩種類別。第一，就是染色體不穩(wěn)定(CIN)，第二，就是與dMMRT相關(guān)[3,4]，這其中有大約15%大腸癌的發(fā)生與微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)相關(guān)，而錯配修復基因的改變是導致MSI的直接原因。MMR蛋白在修復機制中發(fā)揮著重要作用，可識別DNA復制過程中出現(xiàn)的錯配堿基，并進行水解和修復，從而維持遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性[5]。研究[6]發(fā)現(xiàn)如果大腸癌患者處于MSI的Ⅱ和Ⅲ期，那么采用5-氟尿嘧啶對其生存期的意義并不是很大，所以在使用該藥物來分析病癥的時候可以利用MSI作為預后和療效預測的一個基本生物指標。而且MSI機制引起的大腸癌，相對于其它原因引起的大腸癌來說預后相對較好，在機體中發(fā)生轉(zhuǎn)移的概率也比較低，并且該機制引起的大腸癌對一些化療藥物的敏感度不高，比如5-氟尿嘧啶和順鉑等，但是對伊利替康比較敏感，放療敏感性也會較高[7]。現(xiàn)在對于子宮內(nèi)膜癌也進行錯配修復蛋白檢測，如果MMR基因的胚系發(fā)生了突變，那么很有可能是Lynch綜合征的病因，而且在這個過程中就可能會引起大腸癌、卵巢癌等衍生病癥，所以檢測MMR蛋白不僅可以篩查Lynch綜合征，還可以進一步降低患者家族的致病率。目前免疫組化方法已被廣泛應用于MMR蛋白檢測，其準確率與PCR技術(shù)相似，而且操作相對簡便，費用更低，因此被科研機構(gòu)和醫(yī)院所用[8]。對于dMMR結(jié)直腸癌的病例，其具有的典型特征有：發(fā)病年齡早；右半結(jié)腸多見；黏液腺癌為常見組織學類型；Crohn's樣淋巴細胞反應常見；一般預后較好等[9]。本研究采用免疫組化SP方法來分析MMR蛋白在大腸癌中的表達，其中在168例患者中，MMR無缺失141例(83.93%)，MMR缺失27例(16.07%)，同時也顯示MMR蛋白表達與腫瘤發(fā)生部位相關(guān)，MMR蛋白缺失組中右半結(jié)腸(17/47,40.42%)、左半結(jié)腸(5/92,5.43%)、直腸(3/29,10.34%)，很明顯右半結(jié)腸癌MMR蛋白缺失明顯高于其它部位，而且從病例來看右半結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率低及侵犯深度淺，這可能說明，發(fā)生右半結(jié)腸癌的途徑與左半結(jié)腸癌和直腸癌的病因有差異，并且相對來說右半結(jié)腸癌預后可能會更好。