塵肺并發(fā)肺結(jié)核患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和ADA水平改變及臨床意義*

王 維，何 杰，周 取，劉文彬

1.重慶市第六人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，重慶400060；2.重慶市人文科技學(xué)院計(jì)算機(jī)工程學(xué)院，重慶 401524；3.重慶大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院肝膽胰腫瘤科，重慶 400030

塵肺病是由于工人長期吸入的礦物性粉塵在肺內(nèi)潴留所致的以組織彌漫性纖維化為主要病變的全身性疾病，是我國發(fā)病率最高、危害最嚴(yán)重的職業(yè)病[1]。若粉塵長時(shí)間滯留在肺中，可直接或間接介導(dǎo)肺巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和膠原蛋白積累，導(dǎo)致進(jìn)行性缺血性壞死，間質(zhì)纖維化和呼吸衰竭[2]。塵肺患者肺組織纖維化和大量巨噬細(xì)胞損傷等因素，為結(jié)核分枝桿菌的感染提供了有利機(jī)會(huì)，使肺結(jié)核成為塵肺病常見的并發(fā)癥，也進(jìn)一步加速了塵肺患者病情發(fā)展[3-4]。有研究指出，塵肺病患者免疫細(xì)胞會(huì)延緩肺部纖維化并加速炎癥的消退，提示塵肺病患者免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能存在缺陷[5]。腺苷脫氫酶(ADA)在T淋巴細(xì)胞發(fā)育和分化中發(fā)揮著極其重要的作用，其活性與免疫功能密切相關(guān)，是活動(dòng)性肺結(jié)核輔助性T淋巴細(xì)胞的重要標(biāo)志物[6]。同時(shí)ADA對(duì)體內(nèi)積液的結(jié)核感染具有一定的診斷價(jià)值。鑒于此，本文將對(duì)塵肺并發(fā)肺結(jié)核患者的外周血CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和血清ADA水平進(jìn)行特征分析，試圖通過對(duì)比研究探討其臨床意義，為塵肺并發(fā)肺結(jié)核感染的預(yù)防和治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年 1 月至 2019 年11 月重慶市第六人民醫(yī)院門診及住院54例塵肺患者(塵肺組)和塵肺并發(fā)肺結(jié)核患者34例(塵肺并發(fā)肺結(jié)核組)作為研究對(duì)象，其診斷標(biāo)準(zhǔn)參照 GBZ70-2015《職業(yè)性塵肺病的診斷》和WS288-2017《肺結(jié)核診斷》標(biāo)準(zhǔn)[7-8]。排除骨折與骨質(zhì)疏松、嚴(yán)重內(nèi)分泌疾病和/或嚴(yán)重代謝疾病及嚴(yán)重肝、腎疾病患者。塵肺組中男39例、女15例，平均年齡為(56.9±1.9)歲；塵肺并發(fā)肺結(jié)核組中男25例、女9例，平均年齡為(59.6±2.7)歲。另選取本院體檢健康者33例作為對(duì)照組，其中男18例、女15例，平均年齡為(46.2±1.8)歲，對(duì)照組均無肺部疾患、無其他病變且各項(xiàng)生化、影像等檢測指標(biāo)和表現(xiàn)均正常。

1.2方法 采集所有選入對(duì)象清晨空腹外周靜脈血6 mL，其中2 mL加入乙二胺四乙酸二鉀抗凝管中,混勻后用于檢測CD4+、CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù),另4 mL分離血清后檢測ADA水平。CD4+、CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測系統(tǒng)為SemiBio CD，儀器試劑均購自上海匯中細(xì)胞生物科技有限公司。細(xì)胞計(jì)數(shù)操作過程嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，主要分為稀釋血樣、孵育、洗染和計(jì)數(shù)，最后采用SemiBio CytoCounter 全自動(dòng)細(xì)胞可視化檢測系統(tǒng)對(duì)玻片上的細(xì)胞放大成像，高速、精確掃描玻片上固定的細(xì)胞后自動(dòng)定位、聚焦，根據(jù)特異性細(xì)胞標(biāo)志識(shí)別并得出結(jié)果。血清ADA使用速率法在貝克曼 AU5800全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測，檢測試劑采用重慶中元生物技術(shù)有限公司。

2 結(jié) 果

2.1各組CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4+/CD8+T細(xì)胞比值結(jié)果比較 塵肺組和塵肺并發(fā)肺結(jié)核組CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與塵肺組相比，塵肺并發(fā)肺結(jié)核組CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。塵肺組和塵肺并發(fā)肺結(jié)核組CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。塵肺組CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)高于塵肺并發(fā)肺結(jié)核組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。塵肺并發(fā)肺結(jié)核組CD4+/CD8+T細(xì)胞比值均低于對(duì)照組和塵肺組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1、圖1。

表1 各組CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4+/ CD8+ T細(xì)胞比值結(jié)果比較

注：NS表示兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2各組ADA水平比較 對(duì)照組、塵肺組和塵肺并發(fā)肺結(jié)核組血清ADA水平分別為(11.47±3.97)U/L、(13.01 ±3.28)U/L和(20.79±4.78)U/L，塵肺并發(fā)肺結(jié)核組血清ADA水平均高于對(duì)照組和塵肺組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖2。

圖2 各組血清ADA水平比較

2.3CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)與ADA水平相關(guān)性分析 塵肺組中CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)與血清ADA水平呈正相關(guān)(r=0.11、0.17，P=0.43、0.23)；塵肺并發(fā)肺結(jié)核組CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)與血清ADA水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.36、-0.31，P=0.03、0.07)。

3 討 論

塵肺患者因長期被粉塵刺激，氣道發(fā)生炎癥引起分泌物增加，氣道清除功能減弱，易被微生物定植和侵入。由于塵肺患者肺組織纖維化和部分免疫細(xì)胞吞噬清粉塵后裂解釋放炎癥因子等進(jìn)一步加劇肺組織損傷，為結(jié)核分枝桿菌的生長繁殖創(chuàng)造了極好條件，使肺結(jié)核成為塵肺病常見的并發(fā)癥[3]。當(dāng)塵肺并發(fā)肺結(jié)核后，結(jié)核分枝桿菌引的起免疫應(yīng)答及病理改變使得病情進(jìn)展迅速，病死率遠(yuǎn)高于普通塵肺患者[3]。塵肺患者并發(fā)肺結(jié)核確診主要依賴于痰涂片、培養(yǎng)和病理學(xué)證據(jù)，但痰涂片、培養(yǎng)和病理學(xué)檢查陽性率較低，受取材等影響，易出現(xiàn)漏診。因此，尋找塵肺并發(fā)肺結(jié)核感染的實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)，及時(shí)診治，對(duì)改善患者的病情，有效控制肺結(jié)核在塵肺患者中的傳播意義重大。

肺結(jié)核的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸不僅與細(xì)菌的載量和毒力相關(guān)，而且受宿主免疫功能的影響[9-10]。宿主肺結(jié)核免疫以細(xì)胞免疫為主，也是反映宿主免疫功能的重要指標(biāo)[11]。為進(jìn)一步探討T淋巴細(xì)胞在塵肺并發(fā)肺結(jié)核中的作用，本研究比較了對(duì)照組、塵肺組和塵肺并發(fā)肺結(jié)核組CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)，與前期研究結(jié)果一致[12]，塵肺并發(fā)肺結(jié)核組CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)遠(yuǎn)低于對(duì)照組和塵肺組，提示CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測有望成為塵肺患者并發(fā)肺結(jié)核感染的輔助診斷指標(biāo)。

ADA是體內(nèi)參與嘌呤核苷酸代謝的酶類，主要存在于肺組織和部分淋巴細(xì)胞中[13]。在肺結(jié)核患者體內(nèi)，T 淋巴細(xì)胞吞噬結(jié)核分枝桿菌后被破壞，大量ADA釋放入血，因此表現(xiàn)出患者受到結(jié)核分枝桿菌的感染時(shí)血清中ADA水平增加[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組和塵肺組相比，塵肺并發(fā)肺結(jié)核組血中CD4+和CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)都明顯減少，但ADA水平卻明顯增加，且CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)與ADA水平呈負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果提示，動(dòng)態(tài)監(jiān)測塵肺患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和ADA水平變化趨勢對(duì)并發(fā)肺結(jié)核感染的診斷具有一定的意義。

綜上所述，動(dòng)態(tài)監(jiān)測塵肺患者外周血T淋巴細(xì)胞和ADA水平對(duì)提示塵肺并發(fā)肺結(jié)核感染具有臨床意義。本研究的局限性在于未對(duì)各組T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和ADA水平繪制受試者工作特征曲線分析其在塵肺并發(fā)肺結(jié)核病診斷中的靈敏度和特異度。用最佳臨界值來鑒別塵肺患者是否伴發(fā)結(jié)核感染還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量來探討。