彝族藥物朵基諾(鐵掃把)抗煙堿急性毒性作用研究

趙有亮，李蓉

(楚雄醫(yī)藥高等?？茖W校，云南 楚雄 675000)

朵基諾為彝族藥物名稱，其漢譯意為“馬蜂叮的藥”，為楚雄地區(qū)民間廣泛使用的一種民族藥物，漢藥名為：鐵掃把，又叫“大夜關門”“地膚”，為蝶形花科胡枝子屬(LespedezacuneataG.Don)植物，以根和全株入藥，夏秋季采收[1]。近年來，研究者們對本藥在止咳、化痰、平喘作用及對子宮平滑肌的影響、胃腸活動影響、免疫系統(tǒng)影響、體外抗菌作用方面進行了一定的研究，提出了一些藥用價值。除了以上藥用價值外，楚雄地區(qū)彝族居民長期以來用水煎煮后內(nèi)服用于食物藥物中毒的解救?，F(xiàn)通過動物實驗研究，進一步確定藥物有效性，為民族藥物資源開發(fā)提供一定理論基礎。

1 材料

1.1 藥材 從云南省楚雄市區(qū)域內(nèi)采集，經(jīng)生藥學鑒定為彝族藥物朵基諾，漢藥名為鐵掃把的全草(包括根、徑、葉)，晾干，陰涼處保存。

1.2 動物 普通級昆明種小鼠200只，雌雄不限，6～7周齡，體重(19.7±2.2)g，昆明醫(yī)科大學實驗動物學部提供，許可證號：SCXK(滇)K2015-0002。飼養(yǎng)于楚雄醫(yī)藥高等?？茖W校實驗動物室，室溫(23±1)℃，自由飲水攝食。

2 方法

2.1 供試品的制備 取備好的朵基諾干燥藥材，切成小段，稱取200 g，加純化水適量浸泡30 min，加熱煎煮兩次，第一次30 min，第二次20 min，過濾，合并兩次濾液，濃縮至400 mL(每毫升藥液相當于原藥材0.5 g)。

2.2 煙堿液的制備 自制吸煙裝置，準備某煙草企業(yè)生產(chǎn)的香煙2盒(煙堿含量：1.0 mg，焦油含量：10 mg)，點燃香煙抽取煙霧，將煙霧通入生理鹽水溶液讓其充分溶解(每3只香煙煙霧通入10 mL生理鹽水液)，得到煙堿溶液，以供實驗造模使用。

2.3 實驗方法

2.3.1 常規(guī)劑量下朵基諾藥液的解毒效果研究 隨機選取小鼠80只，分為兩組，每組40只。

①甲組(對照組)：以0.2 mL·(10 g)-1的劑量灌服生理鹽水，30 min后以0.2 mL·(10 g)-1劑量腹腔注射煙堿溶液，觀察小鼠的活動及存活情況。

②乙組(實驗組)：以0.2 mL·(10 g)-1的劑量灌服朵基諾藥液，30 min后以0.2 mL·(10 g)-1劑量腹腔注射煙堿溶液，觀察小鼠的反應和生存情況。

2.3.2 不同劑量朵基諾的解毒效果研究隨機選取小鼠60只，分為3組，每組20只。

①甲組(高劑量組)：將朵基諾供試藥液濃縮至原體積一半后，以0.2 mL·(10 g)-1的劑量對小鼠灌服給藥，30 min后以0.2 mL·(10 g)-1劑量腹腔注射煙堿溶液，觀察小鼠的反應和生存情況。

②乙組(中劑量組)：以0.2 mL·(10 g)-1的劑量灌服朵基諾供試藥液，30 min后以0.2 mL·(10 g)-1劑量腹腔注射煙堿溶液，觀察小鼠的反應和生存情況。

③丙組(低劑量組)：將朵基諾供試藥液稀釋1倍后，以0.2 mL·(10 g)-1的劑量對小鼠灌服給藥，30 min后以0.2 mL·(10 g)-1劑量腹腔注射煙堿溶液，觀察小鼠的反應和生存情況。

2.3.3 不同劑量煙堿下朵基諾的解毒效果研究將煙堿液濃度分別增加到1.5倍、2倍、2.5倍量，以供實驗用。隨機選取小鼠60只，分為3組，每組20只。

①甲組(煙堿高劑量一組)：以0.2 mL·(10 g)-1的劑量灌服朵基諾藥液，30 min后腹腔注射煙堿液(2.5倍致死量)，觀察小鼠的反應和生存情況。

②乙組(煙堿高劑量二組)：以0.2 mL·(10 g)-1的劑量灌朵基諾藥液，30 min后腹腔注射煙堿液(2倍致死量)，觀察小鼠的反應和生存情況。

③丙組(煙堿高劑量三組)：以0.2 mL·(10 g)-1的劑量灌服朵基諾藥液，30 min后腹腔注射煙堿液(1.5倍致死量)，觀察小鼠的反應和生存情況。

3 結果

3.1 常規(guī)劑量下朵基諾解毒作用 用藥后2 min后，甲組動物出現(xiàn)不同程度煩躁、興奮、抽搐、扭體反應，5 min出現(xiàn)死亡，1 h后34只小鼠死亡，72 h后存活6只；乙組動物出現(xiàn)煩躁、興奮、抽搐等反應，用藥10 h后7只小鼠死亡，33只小鼠存活，之后72 h內(nèi)未見其他小鼠死亡(見表1)。

表1 常規(guī)劑量下朵基諾的解毒情況統(tǒng)計表

實驗結果顯示，兩組動物用藥后中毒程度有較大的差別，存活情況有顯著性差異(P<0.001)，實驗組生存率明顯高于陽性對照組。朵基諾水煎液對煙堿液所致急性中毒有一定的對抗作用，可明顯緩解中毒癥狀、提高實驗動物的生存率。

3.2 不同劑量朵基諾的解毒作用 用藥后2 min后，甲組動物出現(xiàn)輕度煩躁、興奮、扭體反應，20 min后鎮(zhèn)靜，未出現(xiàn)死亡情況；乙組動物出現(xiàn)一定程度興奮、抽搐等反應，用藥后10 h有4只小鼠死亡，16只存活，之后72 h內(nèi)未見其他小鼠死亡；丙組動物出現(xiàn)煩躁、興奮、抽搐、扭體反應，10 min后9只死亡,4只出現(xiàn)強烈驚厥，11只小鼠存活，之后48 h內(nèi)未新增小鼠死亡(見表2)。

表2 不同劑量下朵基諾的解毒情況統(tǒng)計表

實驗結果顯示，3組動物的中毒程度、存活率與劑量呈現(xiàn)一定的依賴關系，高劑量組小鼠的中毒程度較輕，且存活率高；低劑量組的中毒程度重，且存活率降低，提示在臨床用藥中需確保一定的劑量。

3.3 不同劑量煙堿下朵基諾的解毒作用 用藥2 min后，甲、乙、丙3組動物出現(xiàn)明顯的煩躁、興奮、抽搐、扭體反應，10 min出現(xiàn)死亡，30 min后甲乙2組40只小鼠全部死亡。丙組動物14只小鼠死亡，之后48 h內(nèi)僅有6只存活(見表3)。

表3 不同劑量煙堿條件下朵基諾的解毒情況統(tǒng)計表

實驗結果顯示，朵基諾緩解煙堿急性中毒過程中，實驗動物的存活率與中毒程度成反比關系，甲乙兩組動物煙堿的用量過大，中毒程度過深，無解救的機會，實驗動物全部死亡；丙組動物中毒程度相對較淺，有30%的動物存活。朵基諾解救急性中毒與用藥對象中毒程度有關，中毒程度在一定范圍內(nèi)方可發(fā)揮其解毒功效，中毒程度過深藥物作用無法發(fā)揮。

4 討論

通過香煙煙霧制備煙堿液所含化學成分復雜，包括尼古丁、焦油、糖醛、酚類、烯類化合物等[2]，可經(jīng)皮膚、黏膜、消化道等多途徑快速吸收，對神經(jīng)細胞、肺纖維細胞、肝細胞、視網(wǎng)膜細胞等具有廣泛的細胞毒作用，可引起急性中毒反應，表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)復雜的癥狀，致死機制主要是中樞神經(jīng)和N膽堿能神經(jīng)興奮性改變、呼吸麻痹或呼吸衰竭[3]，也可能與廣泛的細胞毒和氧化損傷有關。機體長期接觸煙堿可引起細胞DNA、RNA、蛋白質(zhì)損傷，產(chǎn)生致癌、致畸等特殊毒性[4]，對多個臟器表現(xiàn)出不同程度損害作用。朵基諾抗煙堿急性毒性作用可能與改變中樞神經(jīng)系統(tǒng)、膽堿能神經(jīng)興奮性和兒茶酚胺、內(nèi)源性前列腺素有關，也可能與穩(wěn)定細胞膜，減少煙堿的細胞毒性有關，具體作用機理有待于進一步研究。

朵基諾(鐵掃把)性甘、微苦、涼，具有清熱利濕、消食除積、行氣止痛、祛痰止咳等功效[1]，主要含有萜類、皂苷、揮發(fā)油等化學成分[5-7]，可用于小兒疳積、消化不良、胃腸炎、細菌性痢疾、胃痛、黃疸型肝炎、糖尿病、腎炎水腫、尿路感染、口腔炎、咳嗽、支氣管炎；外用治療濕疹、皮膚瘙癢、帶狀皰疹、滴蟲病、毒蛇咬傷等[8]。朵基諾(鐵掃把)藥用價值廣，對生長環(huán)境要求不高，可進行大面積栽培，具有廣闊的發(fā)展前景和開發(fā)價值，但其解毒機理至今尚未清楚，有待于進一步深入研究。