UV法建立槲寄生多糖口服液含量測定方法

鄭云天 劉格格 馬嘉悅 張金霜 吳垚 陳冰

目的：提取長白山槲寄生植物中多糖成分，制備槲寄生多糖口服液，并建立UV法對(duì)槲寄生口服液多糖的含量測定方法。

方法：采用水提法提取槲寄生多糖成分；通過方法學(xué)考察建立UV法測定槲寄生多糖口服液中的多糖含量方法，并對(duì)樣品進(jìn)行含量測定。

結(jié)果：在0.001 mg/mL～0.007 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，精密度、重現(xiàn)性、重復(fù)性及加樣回收率實(shí)驗(yàn)RSD均小于2%。三批樣品含量測定平均值為0.0088 mg/mL，RSD值為1.03%。

結(jié)論：所建立方法靈敏度高，穩(wěn)定性好，可用于槲寄生多糖口服液質(zhì)量控制方法。槲寄生[Viscum coloratum （Komar.） Nakai]屬于桑寄生科槲寄生屬植物，具有多種活性成分。其中，槲寄生多糖成分具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化作用、抗腫瘤功能以及降低血脂和血糖等作用，對(duì)人體內(nèi)自由基清除作用而減小損傷胃腸道黏膜，有治療胃炎、腸炎的作用。將槲寄生多糖成分提取并制備成口服液，擴(kuò)大其應(yīng)用范圍。

1. 材料與設(shè)備

1.1 材料

槲寄生（采自吉林省永吉縣，寄主為楊樹）、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（2016091067，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）、蔗糖、亞硫酸氫鈉、苯甲酸鈉、95%乙醇、三氯乙酸（TCA）、苯酚、濃硫酸。以上輔料為藥用級(jí)別，試劑為分析純，均由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 設(shè)備

紫外可見分光光度計(jì)（UV-5100，上海元析儀器有限公司）；數(shù)顯恒溫電熱套（HDM.500C，金壇市科析儀器有限公司）；中藥粉碎機(jī)（LG-08A，浙江瑞安市百信藥機(jī)器械廠）；標(biāo)準(zhǔn)篩（浙江上虞市宏興儀器廠）。

2. 方法與結(jié)果

2.1 長白山槲寄生多糖的提取

稱取適量長白山槲寄生粉末在70℃下干燥12h，粉碎，過40目篩，稱取過篩后的槲寄生粉末10g，料液比按1∶26，在95℃水溫下提取3h，得到槲寄生多糖提取液，用4層紗布過濾去除殘?jiān)瑢⑻崛∫簼饪s后，加入95%乙醇后置冰箱冷藏室，次日除去乙醇，沉淀物用純水將溶解，向其中加入50% TCA，調(diào)濃度為10%，離心（4000r/ min）去除沉淀物，得槲寄生脫蛋白多糖水提取液。

2.2 長白山槲寄生口服液制備

取槲寄生脫蛋白多糖水提取液200ml，定容至1000ml。取出稀釋液100ml，加入蔗糖3mg，亞硫酸氫鈉10mg，苯甲酸鈉40mg，溶解后灌封，滅菌，得到長白山槲寄生口服液。

2.3 UV法對(duì)長白山槲寄生口服液的含量測定

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定無水葡萄糖對(duì)照品10mg，配制成濃度為0.1mg/ml的溶液。

2.3.2 苯酚溶液的配置

取苯酚放于燒杯中置于60℃水浴中溶解，用蒸餾水定容搖勻，配制成濃度為6%苯酚溶液，于棕色瓶中保存，備用。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

如圖1所示，精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml，分別加水至2.0 ml，搖勻后精密加入1.0ml 6%苯酚，搖勻后精密加入5.0ml濃硫酸，放冷至室溫后，沸水浴顯色15min，以蒸餾水按相同方法操作為空白。于波長490nm處測定吸光度，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，多糖質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，得Y=91.857X+0.0891，R2=0.9996。

2.3.4 精密度試驗(yàn)

取同一濃度對(duì)照品溶液，依法重復(fù)測定6次，計(jì)算RSD值。計(jì)算得RSD為0.62%（n=6），表明儀器的精密度良好。

2.3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份，按上述方法配制供試品溶液，依法測定，得RSD為1.86%（n=6），表明此方法重現(xiàn)性良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在上述條件下，取供試品溶液，室溫放置，12h內(nèi)，每2h依法測定一次，得RSD為0.82%（n=6）。表明此方法穩(wěn)定性良好。

2.3.7 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品，每3份一組，共3組，分別按標(biāo)示量的80%、100%、120%比例精密加入對(duì)照品，并按照上述方法配制供試品溶液，依法測定，得RSD為1.86%。表明此法準(zhǔn)確度高。

2.4 樣品含量測定

按所建立方法進(jìn)行三批樣品含量測定，平均含量為0.0088 mg/ml，得RSD為1.03%（n=9）。

3. 討論

本文首先進(jìn)行了長白山槲寄生多糖成分的提取及純化，并采用溶解法制備口服液。通過UV法進(jìn)行方法學(xué)考察，建立了長白山槲寄生口服液的含量測定方法。從結(jié)果可以看出，方法學(xué)考察各項(xiàng)指標(biāo)RSD均小于2%，三批樣品平均含量為0.0088mg/mL，RSD=1.03%（n=9），均符合2015版《中國藥典》的相關(guān)規(guī)定，表明此方法靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，可以作為長白山槲寄生口服液質(zhì)量檢測方法。

作者簡介：

鄭云天（1999-），男，制藥工程專業(yè)學(xué)生

陳冰（1977-），女，講師，碩士，研究方向：藥學(xué)

基金項(xiàng)目：

吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目（吉農(nóng)院合字[2019]第 027 號(hào)）