液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測食品中的黃曲霉毒素分析

□ 谷 葉 黃和飛 昆明和合醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司

AFT，即由黃曲霉與寄生曲霉等真菌代謝后形成的一種毒害性真菌霉素。AFT及其衍生物有20余種，其中B1、B2、G1與G2在自然界內(nèi)廣泛分布，其基本結(jié)構(gòu)均由一個呋喃環(huán)與一個香豆素組成，前者是毒素的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)，后者和AFT的致癌性密切相關(guān)，且對前者的毒性有加強(qiáng)作用[1]。因?yàn)锳FT對機(jī)體健康造成的危害較大，故而多個國家政府機(jī)關(guān)與有關(guān)組織陸續(xù)擬定了食品內(nèi)AFT的檢測分離方法，和其他檢測方法相比，LC-MS/MS法分離能力強(qiáng)、靈敏度高，能實(shí)現(xiàn)對多種化合物的定性定量分析，本文主要用其檢測食品中4種AFT（B1、B2、G1與G2），具體如下。

選擇2014年1月-2016年12月 在我院收治的96例面神經(jīng)炎病人,其中男性66例,女性30例,年齡在10-76歲之間。

再次，也是最為重要的原因是由于女性在分娩前后激素水平的變化，直接導(dǎo)致產(chǎn)后抑郁癥的發(fā)生。在妊娠期間，孕婦體內(nèi)的雌激素和孕激素水平長時(shí)間處于較高水平，而雌激素具有多種神經(jīng)調(diào)節(jié)功能，分娩后雌激素水平突然降低，影響了神經(jīng)調(diào)節(jié)的功能，有可能導(dǎo)致情緒抑郁。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

從市面上采購花生、玉米、燕麥片等。制備AFT的B1、B2、G1與G2混合標(biāo)準(zhǔn)液（前兩者的質(zhì)量濃度均為1 μg/mL，后兩者均為 0.3 μg/mL）。乙醇、甲醇均為色譜純，甲酸為分析純，超純水。

1.2 儀器和設(shè)備

選用6430三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)及相關(guān)配套設(shè)施檢測AFT，還有凈化柱、電子天平、超聲波清洗器與超純水儀等設(shè)施。

1.3 儀器參數(shù)

1.3.1 色譜條件

分別量取25 g試樣，將其依次放入到容積為250 mL的錐形瓶內(nèi)，而后把100 mL乙腈-水溶液加入其中，連續(xù)快速攪拌3 min，將如上制得的混合液通過定性濾紙與Mycosep 226真菌毒素凈化柱，以獲得凈化液，提取適量通過0.22 μm濾膜，采集待測。

1.3.2 質(zhì)譜條件

選Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）作為色譜柱；流動相為0.1%甲酸-甲醇（3∶2）；設(shè)定流速0.4 mL/min；柱體溫度35 ℃；進(jìn)樣量為5 μL。

對各試樣反復(fù)進(jìn)行5次進(jìn)樣，檢測到各組分對應(yīng)的峰面積，測算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），以評估方法的精密度。為檢測該方法的回收率，提取3份試樣，依次添加體積不同的標(biāo)準(zhǔn)液，測算出加標(biāo)回收率。

表1 4種AFT的MRM掃描參數(shù)

1.4 處理試樣

（3）SD大鼠CRF模型制備：SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，以10%水合氯醛溶液ip麻醉，常規(guī)消毒鋪巾，從右背部切口打開腹腔，靜脈夾夾住腎蒂后用高頻電刀切除2/3右腎，止血后復(fù)位腎臟（正常組以相同步驟打開腹腔，暴露腎臟后復(fù)位，避免牽拉腎臟）。2周后于第2次手術(shù)切除左側(cè)腎臟。造模4個月后，以10 mL/kg的給藥體積連續(xù)給藥6周（正常組和模型組給予相同體積的生理鹽水），并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天采集血液，分離血清，用試劑盒測定Cr、BUN含量。

1.5 線性范圍和檢測限

當(dāng)甲醇和水相比例為3∶2時(shí)，4種組分于5 min內(nèi)陸續(xù)出峰，取得了最佳的分離效果[2]。

1.6 精密度和回收率試驗(yàn)

選取噴霧電離源作為離子源，基于正離子模式加以掃描；干燥氣流速、溫度依次為12 mL/min、345 ℃；霧化氣壓力為50 psi；毛細(xì)管電壓4 000 V；質(zhì)量掃查范疇100～500 m/z。4種AFT的MRM掃描參數(shù)見表1。

（3）礦料級配設(shè)計(jì)。上面層采用AC—16型瀝青混合料，設(shè)計(jì)時(shí)考慮含砂量對混合料性能造成下降，故將設(shè)計(jì)級配沿規(guī)范要求中值適當(dāng)上移，具體見表3。

2 結(jié)果和分析

把標(biāo)準(zhǔn)樣品液稀釋為數(shù)個不同濃度梯度，按濃度由低至高順序進(jìn)樣5 μL，橫、縱坐標(biāo)分別設(shè)定為進(jìn)樣濃度、峰面積，進(jìn)行線性回歸分析。

取用濃度存在差異的標(biāo)準(zhǔn)液，依照設(shè)定的色譜、質(zhì)譜條件進(jìn)樣，基于峰面積（y）與試樣含量（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得相應(yīng)的線性方程與有關(guān)系數(shù)，并測算出檢出限與定量限。具體見表2。

表2 黃曲霉素的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)與檢出限

依照1.6方法開展精密度與回收率試驗(yàn)，測算RSD，精密度檢測結(jié)果見表3[3]。

表3 黃曲霉素RSD測算情況統(tǒng)計(jì)

分析表2內(nèi)的數(shù)據(jù)后，發(fā)現(xiàn)RSD均＜5.0%。進(jìn)行回收率試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)樣品的回收率均在80.0%～94.5%。綜合各種數(shù)據(jù)信息后，認(rèn)為該檢測方法的精密度與回收率均較好。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研究中建立了LC-MS/MS法檢測食品內(nèi)AFT，使用甲醇和水等進(jìn)行洗脫，于質(zhì)譜正離子模式下進(jìn)行監(jiān)測，4種組分于5 min內(nèi)整體分離，B1、B2、G1與G2的檢出限依次是0.11、0.009、0.012 μg/kg與 0.008 μg/kg，加標(biāo)回收率均值為80.0～94.5%，RSD＜5.0%，均符合相關(guān)限量規(guī)范要求。LC-MS/MS檢測食品內(nèi)AFT，有過程快速、靈敏度高、精確可靠等諸多優(yōu)勢，值得推廣。