右江流域5種野生蔬菜的氨基酸含量及營養(yǎng)價值評價

黃元河，潘喬丹，趙秋華，張忠偉，黃玉鐲，農(nóng)禮翔

1.右江民族醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院（百色 533000）；2.右江民族醫(yī)學院藥學院（百色 533000）

壯族是我國第二大民族，據(jù)考古文獻記載壯族起源舊石器的左右流域[1]。壯族從舊時器時代發(fā)展到今，歷盡不同時代文化的滲透和融合，在與自然的相處過程中，形成長期食用野生植物的習慣，一直言傳至今，形成具有地方特色民族植物文化。此次試驗選取右江區(qū)壯族居民長期食用的5種野生野菜作為研究對象。狗肝菜[Dicliptera chinensis（L.）Juss.]為爵床科多生草本植物，地上部分作為蔬菜食用，具有清熱解毒、生津利尿的功效[2]；含有揮發(fā)油類化合物、萜類化合物、苯丙素類化合物、甾體及其苷類等成分，具有保肝活性、免疫調(diào)節(jié)功能和抗氧化活性[3]。銅錘玉帶草（Lobelia angulata Forst）為桔?？贫嗄晟荼荆厣喜糠肿鳛槭卟耸秤?，別名鈕子菜，具有清熱毒、除濕毒的功效，含有聚乙炔、黃酮類化合物、脂肪酸、多萜類化合物等成分，具有抗炎鎮(zhèn)痛作用、保肝作用[4]。鴨兒芹（Cryptotaenia japonica Hassk）為傘形科多年草本，全株作為蔬菜食用，具有消炎、解毒、活血消腫的功效，主治肺炎、肺膿腫、淋病、感冒咳嗽、跌打損傷，外用治皮膚瘙癢等病癥[5]。五指牛奶（Ficus simplicissima Lour.）為桑科小灌木，根可煲湯，具有健脾化濕、補氣化痰、行氣舒筋的功效，含有補骨脂素、異補骨脂內(nèi)酯、佛手柑內(nèi)酯、傘形花內(nèi)酯、山柰酚、木犀草素、β-谷甾醇、豆甾醇等，用于治療主治慢性支氣管炎、支氣管哮喘、肺癆咳嗽、肝炎、肝硬化、風濕痹痛、脾虛食少等[6]。野芋（Colocasia gigantea（Blume）Hook. f）為天南星科多年生大型草本，葉柄作為蔬菜食用，具有解毒、消腫止痛、祛痰鎮(zhèn)痙的功效，家種無毒、野生有毒[7]。為了更好地開發(fā)右江流域藥食同源植物，此次試驗對這5種野生蔬菜的可食部分進行氨基酸種類及含量分析，并對它們的營養(yǎng)價值進行評價。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

5種野菜為狗肝菜、鴨兒芹、野芋的葉柄，以及銅錘玉帶草和五指牛奶的根。其中，狗肝菜、鴨兒芹、野芋葉柄均于6月份購自廣西百色市右江區(qū)東風菜市場，銅錘玉帶草和五指牛奶根于6月份采挖于廣西百色市右江區(qū)崗樂山，經(jīng)過右江民族醫(yī)學院黃元河老師鑒定確認。將樣品洗凈，干燥，粉碎，干燥儲存?zhèn)溆?。每份樣品充分測定3次，取平均值。

1.1.1 游離氨基酸待測溶液

取1.0 g樣品粉末，精密稱定，加入100 mL 50%的乙醇溶液，超聲（300 W，100 kHz）提取2次，每次30 min，抽濾去渣取液，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中（80 ℃，50 r/min）揮至近干，用超純水定容至10.0 mL，即得樣品游離氨基酸測試溶液。

1.1.2 水解氨基酸測試溶液

取1.0 g樣品粉末，加入10 mL 6 mol/L鹽酸和1 mL 1%苯酚，抽真空充氮氣，重復(fù)3次，在110 ℃烘箱中水解24 h，過濾得水解液，于80 ℃水浴揮干，用3 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH近中性，超純水定容至50 mL，即得樣品水解氨基酸測試溶液。

1.2 主要儀器、設(shè)備與試劑

1.2.1 儀器與設(shè)備

島津LC-20A高效液相色譜儀：島津企業(yè)管理（中國）有限公司；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（天津市予華儀器有限公司）；TGL-15B高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；Mill-Q超純水機（美國密理博）。

1.2.2 試劑18種氨基酸標準品（色譜級，上海源葉生物有限公司）；三乙胺、異硫氰酸苯酯、乙腈（色譜級，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；冰乙酸、無水乙酸鈉、濃鹽酸（分析純，西隴化工股份有限公司）；超純水（自制）。

1.3 測定方法

參考陳蓉等[8]柱前衍生-HPLC法，測定氨基酸。

1.3.1 衍生測定液制備

分別精密移取400 μL混合對照標準品溶液、樣品游離氨基酸和水解氨基酸溶液置于EP管中，加入1 mol/L的衍生試劑A（1 mol/L三乙胺乙腈200 μL）、0.1 mol/L衍生試劑B（0.1 mol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液）各200 μL，混勻，室溫避光放置1 h，加入800 μL正己烷，渦旋振蕩5 min，放置10 min，以12 000 r/min離心5 min，取下層溶液，制得衍生化溶液。溶液經(jīng)0.22 μm濾膜濾過，超聲5 min，進樣20 μL。

1.3.2 色譜條件

Shim-pack VP-ODS色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫40 ℃，流速1.0 mL/min，檢測波長254 nm，單次進樣品20 μL。采用梯度洗脫：0 min，0%B；11 min，7.0% B；13.9 min，12.0% B；14 min，15.0% B；29 min，34.0% B；32 min，50.0% B；37 min，100% B；50 min，0% B。流動相A為0.1%醋酸鈉緩沖溶液（pH 6.5）-乙腈（93∶7，V/V），流動相B為乙腈-水（4∶1，V/V）并進行精密度試驗、重復(fù)性試驗、穩(wěn)定性試驗、線性關(guān)系考察，結(jié)果均達到要求，線性方程見表1。由表1可見，在線性范圍內(nèi)，各種氨基酸的進樣量濃度（x）與峰面積（y）的對數(shù)的線性方程的R2均大于0.999 0，線性關(guān)系良好。各氨基酸出峰明顯，無拖尾現(xiàn)象，便于區(qū)分。

表1 18種氨基酸的線性回歸方程及相關(guān)系

2 結(jié)果與分析

2.1 游離氨基酸的含量

游離氨基酸是指以單個氨基酸分子在植物體內(nèi)以游離態(tài)存在，可被直接吸收利用的氨基酸。依照1.1小節(jié)制備5種野生蔬菜游離氨基酸待測液，然后按照1.3小節(jié)進行衍生化處理進樣，測定18種氨基酸峰面積，通過加樣品回收試驗和線性方程計算18種游離氨基酸含量，結(jié)果見表2。

根據(jù)氨基酸的用途，氨基酸可以分為人體必需氨基酸、甜味氨基酸、苦味氨基、鮮味氨基酸和藥效氨基酸[8]。從表2可以看出：5種野菜中狗肝菜、銅錘玉帶草中均檢測出18種游離氨基酸；鴨兒芹中未能檢出谷氨酸、絲氨酸、甘氨酸、甘氨酸，五指牛奶根中未能檢出絲氨酸、甘氨酸、甘氨酸，野芋葉柄中色氨酸未能檢出；除了野芋葉柄中未能檢出必需氨基酸色氨酸，其他4種野菜中均有8種人體需氨基酸；其中狗肝菜中天冬氨酸（鮮味氨基酸）和谷氨酸（鮮味、甜味氨基酸）含量較高，銅錘玉帶草中天冬氨酸（鮮味氨基酸）、絲氨酸（甜味氨基酸）、蘇氨酸（甜味氨基酸）、組氨酸（藥效氨基酸）含量較高；鴨兒芹中蘇氨酸（甜味氨基酸）、脯氨酸（甜味、苦味氨基酸）、酪氨酸（藥效氨基酸）含量較高。

表2 5種野菜18種游離氨基酸的含量（以干質(zhì)量計）mg/g

2.2 水解氨基酸的含量

水解氨基酸是通過酸解，將待測植物體內(nèi)的蛋白質(zhì)、多肽等氨基酸鏈水解成單個氨基酸，因此水解氨基酸能夠全面反映樣品中所有單個氨基酸種類和含量。依照1.1小節(jié)制備5種野生蔬菜水解氨基酸待測液，然后按照1.3小節(jié)進行衍生化處理進樣，測定18種氨基酸峰面積，通過加樣品回收試驗和線性方程計算18種水解氨基酸含量，結(jié)果見表3。各種必需氨基酸占總氨基酸的質(zhì)量分數(shù)及WHO/FAO推薦的模式譜標準值見表4。

從表3可以看出：5種野菜中均檢測出18種水解氨基酸，其中狗肝菜、鴨兒芹、銅錘玉帶草三種菜葉類野菜的總氨基酸含量均較高，分別為33.07，44.03和51.31 mg/g；而根莖類野菜五指牛奶根、野芋葉柄的總氨基酸含量較低。銅錘玉帶草中的天冬氨酸（鮮味氨基酸）和谷氨酸（鮮味、甜味氨基酸）含量最高，分別為8.43和13.61 mg/g，是口感很好的野生蔬菜；5種野生蔬菜均含有8種人體必需氨基酸，含量從高到低依次為鴨兒芹、狗肝菜、銅錘玉帶草，而五指牛奶根和野芋葉柄含量較低。5種野菜藥效氨基酸含量均較高，這些說明其有著較好的營養(yǎng)價值和藥用價值。

表3 5種野菜18種水解離氨基酸的含量（以干質(zhì)量計） mg/g

從表4可以看出：5種野菜中必需氨基酸相對含量與WHO/FAO推薦的人體必需氨基酸含量模式譜[9]相比，狗肝菜中甲硫氨酸-半胱氨酸、賴氨酸低于標準模式外，其余氨基酸高于標準模式；鴨兒芹和野芋葉柄中甲硫氨酸-半胱氨酸低于標準模式外，其余氨基酸高于標準模式；銅錘玉帶草中甲硫氨酸-半胱氨酸含量明顯低于標準模式外，其余必需氨基酸比例均高于或接近標準模式；五指牛奶根中賴氨酸和色氨酸明顯高于標準模式，其余氨基酸低于標準模式。這說明5種野菜中狗肝菜、鴨兒芹、銅錘玉帶草和野芋葉柄必需氨基酸含量配比較為合理，屬于較優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)來源。

表4 5種野菜中各種人體必需氨基酸占總氨基酸總量的質(zhì)量分數(shù)

3 結(jié)論與討論

此次試驗選用異硫氰酸苯酯作為柱前衍生試劑，因其與一二級氨基酸可同時反應(yīng)，形成的衍生產(chǎn)物（苯氨基硫甲酰衍生物）單一、穩(wěn)定，衍生副產(chǎn)物對測定無干擾[10]，因此柱前衍生RP-HPLC法具有簡便、快捷、高效，具有較高的穩(wěn)定性特點[11]。此次試驗采用該方法檢測右江流域壯族食用5種野生蔬菜的游離氨基酸和水解氨基酸含量。游離氨基酸檢測顯示狗肝菜、銅錘玉帶草均含有18種游離氨基酸，狗肝菜、銅錘玉帶草、鴨兒芹鮮味和甜味氨酸含量較高，是味道較好的野生蔬菜。水解氨基酸檢測顯示，鴨兒芹各種氨基酸含量與孫曉慧等[12]測定結(jié)果不一致、五指牛奶根中各種氨基酸含量與曹利民等[13]測定結(jié)果不一致，這可能與材料的產(chǎn)地、氣候、季節(jié)有關(guān)。狗肝菜、鴨兒芹、銅錘玉帶草三種菜葉類野菜的總氨基酸含量均較高，銅錘玉帶草中的天冬氨酸和谷氨酸含量最高。谷氨酸能夠促進大腦紅細胞生成、改進大腦機能，與血氨形成谷酰氨，能夠解除氨毒害作用。天門冬氨酸在冠狀供血不足引起心肌缺氧時，對心肌有保護作用；還參與鳥氨酸循環(huán)，降低血壓中氮和二氧化碳的含量，增強肝功能等[14]。5種野生蔬菜均具有8種人體必需氨基酸，鴨兒芹、狗肝菜、銅錘玉帶草含量較高，藥效氨基酸豐富。狗肝菜、鴨兒芹、銅錘玉帶草和野芋葉柄必需氨基酸含量配比與WHO/FAO推薦標準模式相比，必需氨基酸含量配比較為合理，屬于較優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)來源。因此通過從營養(yǎng)角度還是藥膳保健方面考慮，狗肝菜肝菜、鴨兒芹、銅錘玉帶草均具有較好的開發(fā)前景。