胡蘿卜茄病鐮刀菌生物學特性及藥劑敏感性研究

韓鳳英，高 婧，王 勇，慕宗杰，康立茹，王 永，趙 君，賈瑞芳

（1.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018）

茄病鐮刀菌（Fusarium solani）是一種重要的植物病原菌，可引起植物根部腐爛，在真菌分類系統(tǒng)中屬于無性型真菌、絲孢綱、瘤座孢目、瘤座孢科、鐮刀菌屬[1]。據(jù)報道[2]，茄病鐮刀菌可導致洋桔梗根莖腐爛??；YANG 等[3]研究表明，茄病鐮刀菌可引起甘薯根腐?。籏EISUKE 等[4]從根部和莖基腐爛或整株植物萎蔫的草原龍膽病株中分離到了茄病鐮刀菌。此外，還在黃瓜[5]、孜然[6]、加工番茄[7]、小扁豆[8]、西芹[9]、苜蓿等[10]根腐病病株中分離和鑒定出茄病鐮刀菌。關于胡蘿卜根腐病，在愛爾蘭、澳大利亞、美國、塞爾維亞、日本均有報道，尤其是日本相對較多，但目前在我國還少有報道。張笑宇等[11]首次報道了內(nèi)蒙古胡蘿卜鐮刀菌根腐病病原菌，研究明確了內(nèi)蒙古西部地區(qū)胡蘿卜鐮刀菌根腐病的病原菌為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）和茄病鐮刀菌（Fusarium solani），但并未對其生物學特性和藥劑敏感性進行研究。因此，本研究對胡蘿卜茄病鐮刀菌生物學特性和藥劑敏感性進行了測定，旨在了解該病原菌的生長條件和敏感性藥劑，為防治胡蘿卜根腐病的發(fā)生和蔓延提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試菌株

供試茄病鐮刀菌（Fusarium solani）菌株的編號和來源見表1，均分離保存于內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學植物病理教研室。

表1 供試茄病鐮刀菌菌株的編號及來源

1.2 供試培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA 培養(yǎng)基）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15 g，蒸餾水定容到1 L。Czapek 培養(yǎng)基[12]：NaNO32 g，K2HPO41 g，KCl 0.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，F(xiàn)eSO40.01 g，蔗糖30 g，瓊脂15 g，蒸餾水1 L。

1.3 菌株的轉(zhuǎn)接與培養(yǎng)

將TPL-1、WQ1、WQ2、DM、TX31、TX3-1、QB（對照）分別接種到PDA 培養(yǎng)基，放入25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待其生長5 d 左右進行轉(zhuǎn)接。

1.4 胡蘿卜茄病鐮刀菌生物學特性研究

1.4.1 不同地區(qū)胡蘿卜茄病鐮刀菌生長速度的測定 分別將直徑8 mm 菌餅接種在直徑90 mm 的PDA 培養(yǎng)基平板中央，25 ℃恒溫培養(yǎng)，方法采用十字交叉法，連續(xù)測量1～8 d 的菌落直徑，每個菌株重復4 次。

1.4.2 不同地區(qū)胡蘿卜茄病鐮刀菌產(chǎn)孢量的測定 接種方法同上，在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d后，在培養(yǎng)皿中加入10 mL 無菌水，洗脫病菌制成孢子懸浮液，采用血球計數(shù)板法分別測量7 個菌株的孢子數(shù)量[12]。

1.4.3 溫度對胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響 按照“1.4.1”中的接種方法，分別將平板置于5、10、15、20、25、30、35、40 ℃溫度梯度下培養(yǎng)，6 d 后測量菌落直徑，每個菌株重復4 次。

1.4.4 pH值對胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響 用濃度為1 mol/L 的HCl 和同濃度的NaOH 溶液配制成pH值分別為5、6、7、8、9、10、11 共7 個梯度的PDA 培養(yǎng)基。按照“1.4.1”中的接種方法，分別將菌餅接種到上述7 個梯度的PDA 培養(yǎng)基中央，25 ℃恒溫培養(yǎng)，6 d 后測量菌落直徑，每個菌株重復4 次。

1.4.5 碳源對胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響 分別用等量碳素的蔗糖、葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、淀粉代替Czapek 培養(yǎng)基中的碳源，配成不同的碳源培養(yǎng)基。按照“1.4.1”中的接種方法，分別將菌餅接種到上述不同碳源培養(yǎng)基中央，25 ℃恒溫培養(yǎng)，6 d 后測量菌落直徑，每個菌株重復4 次。

1.4.6 氮源對胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響 分別用等量氮素的硫酸銨、牛肉膏、硝酸鉀、硝酸銨、蛋白胨代替Czapek 培養(yǎng)基中的氮源，其余操作步驟同“1.4.5”。

1.5 藥劑對胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響

在無菌條件下，先將100 g/L 甲基硫菌靈可濕性粉劑、15 mL/L 嘧菌酯懸浮劑和0.3 mL/L 咯菌腈懸浮種衣劑分別稀釋200 倍、50 倍和150 倍，然后吸取5 mL 分別加入經(jīng)高壓滅菌后冷卻至50 ℃左右的PDA 培養(yǎng)基，充分搖勻后制成平板備用。按“1.4.1”中的接種方法，分別將7 株菌餅接種于上述培養(yǎng)基平板中央，25 ℃恒溫培養(yǎng)，7 d 后測量菌落直徑，每個菌株重復4 次。比較7 株菌對3種不同藥劑敏感性。

2 結果與分析

2.1 不同地區(qū)胡蘿卜茄病鐮刀菌生長速度比較

由圖1 可知，第1 天，7 株菌的生長速度差異不顯著（P＞0.05）；第4 天，生長最快的是菌株TX31，菌落直徑為4.62 cm；8 d 后，生長最快的是菌株TX3-1、直徑為8.53 cm，最小的是菌株TPL-1、菌落直徑為7.52 cm。

2.2 不同地區(qū)胡蘿卜茄病鐮刀菌產(chǎn)孢量比較

在相同條件下培養(yǎng)的7 株菌產(chǎn)孢量有明顯差異，孢子量超過106個/mL 的菌株有TX3-1、WQ1、DM 和QB。其中，菌株TX3-1 孢子量最多，約為1.5×106個/mL；菌株TX31 孢子量最少，約為0.7×106個/mL（圖2）。

2.3 不同溫度對不同地區(qū)胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響

將菌株分別放置于不同溫度梯度下培養(yǎng)6 d，不同溫度處理下，菌株的生長速度不同（圖3）。在30 ℃條件下，各個菌株生長最快，其中生長最快的是菌株TX31，約為7.68 cm，對照菌株QB 菌落直徑明顯小于其他菌株，僅為6.86 cm；當溫度低于5 ℃和高于40 ℃時，7 株菌都不能生長；25～30 ℃是最適合菌株生長的溫度范圍；當溫度為35 ℃，7 株菌的生長速度明顯降低，其中，菌株TPL-1 下降最快，菌落直徑為3.85 cm。

2.4 不同pH值對不同地區(qū)胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響

在不同pH值條件下培養(yǎng)6 d 后，7 株菌在pH值5～11 范圍內(nèi)均能生長，在中性條件下，菌株生長情況最好。其中，生長最快的是菌株DM、菌落直徑6.67 cm；生長速度最慢的是菌株QB、菌落直徑為5.83 cm（圖4）。

2.5 不同碳源對不同地區(qū)胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響

7 株菌在5種碳源培養(yǎng)基上均能生長，以半乳糖為碳源時生長最慢，其中，生長最慢的是菌株TX3-1、菌落直徑為5.31 cm；生長最快的菌株是WQ1、菌落直徑為5.73 cm。以淀粉為碳源時生長最快，其中，生長最快的是菌株TPL-1，菌落直徑為6.71 cm；生長最慢的是菌株WQ2，菌落直徑為6.26 cm。菌株WQ1 在麥芽糖培養(yǎng)基上的生長速度最快，而菌株QB、TX3-1、DM、WQ2、TX31、TPL-1 在淀粉培養(yǎng)基上生長速度最快（圖5）。

2.6 不同氮源對不同地區(qū)胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響

由圖6 可知，測定含有不同氮源培養(yǎng)基上菌株的直徑，以牛肉膏、硝酸鉀、蛋白胨為氮源時，對7 株菌的生長都能起到促進作用；但在加入硫酸銨和硝酸銨的培養(yǎng)基上菌株生長速度明顯下降，菌株生長抑制最明顯的是硫酸銨氮源培養(yǎng)基。其中，7 株菌中生長速度最快的是菌株WQ1，菌落直徑為3.25 cm；生長最慢的是菌株TPL-1，菌落直徑僅為2.22 cm。使菌株TX31、WQ1、WQ2、DM 生長最快的是蛋白胨氮源培養(yǎng)基，菌株TX3-1、菌株TPL-1 在牛肉膏氮源培養(yǎng)基上生長最快，而最適于菌株QB 生長的是硝酸鉀氮源培養(yǎng)基，菌落直徑為6.21 cm。

2.7 不同藥劑對不同地區(qū)胡蘿卜茄病鐮刀菌生長的影響

由圖7 可知，7 株菌對甲基硫菌靈可濕性粉劑表現(xiàn)最為敏感，對菌株生長的抑制程度最大；當藥劑為咯菌腈懸浮種衣劑時，菌株DM 和TX3-1 相對于另外5 株菌，生長抑制程度較明顯，菌株直徑分別為4.53 cm 和4.48 cm，但敏感性不強；當藥劑為嘧菌酯懸浮劑時，7 株菌對其敏感性均不強。

3 討論與結論

董賢慧等[13]、吳娜等[14]探討了溫度、碳、氮對茄病鐮刀菌生長及產(chǎn)孢的影響情況；楊靜美等[15]、趙杰[16]研究了番木瓜茄病鐮刀菌、煙草茄病鐮刀菌的生物學特性，測定了溫度、pH值、碳源、氮源等對菌株生長的影響。本試驗也對胡蘿卜茄病鐮刀菌的生長、產(chǎn)孢量進行了研究，結果顯示，生長最快的是菌株TX31 和TX3-1，均采自呼和浩特市托克托縣。而桑蓉[17]研究異源鐮刀菌對小麥致病力的分化，結果表明，菌落擴展速度與致病力線性相關性極高，即菌落擴展速度快，菌株致病力最強。因此，在呼和浩特市托克托縣胡蘿卜栽培中，要對茄病鐮刀菌引起的根腐病加以重視，積極防治。

本試驗中，胡蘿卜茄病鐮刀菌的最適溫度范圍為25～30 ℃，低于5 ℃和高于40 ℃菌絲基本不生長，其對pH值要求不嚴格，在pH值為5～11 內(nèi)均能生長，這與趙杰[16]對煙草茄病鐮刀菌的研究結果一致。胡蘿卜茄病鐮刀菌能夠利用多糖、雙糖及單糖作為碳源，半乳糖為碳源時生長最差，淀粉為碳源時最有利于菌株的生長。在供試氮源試驗中，以牛肉膏、硝酸鉀、蛋白胨為氮源時，均能顯著地促進胡蘿卜根腐病菌株的生長，但是以硫酸銨和硝酸銨為氮源時，菌株生長速度明顯降低，可以在胡蘿卜生產(chǎn)上推薦配合施用銨態(tài)氮肥，以減少鐮刀菌根腐病的發(fā)生，提高胡蘿卜品種質(zhì)量和產(chǎn)量。

對胡蘿卜茄病鐮刀菌藥劑敏感性的測定表明，在選取的3種藥劑中，胡蘿卜茄病鐮刀菌對100 g/L甲基硫菌靈可濕性粉劑的敏感性較高，可作為胡蘿卜根腐病防治藥劑使用。本試驗中藥劑敏感性測定是在室內(nèi)進行的，缺少盆栽試驗和大田試驗數(shù)據(jù)，篩選出的藥劑在田間使用可能會受到環(huán)境因素的影響，所以還有待田間試驗證實。